山羊痘抗體（Pox-Ab）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍：                                                                                                                    96T
2pg/ml-60pg/ml 
使用目的：
本試劑盒用于測定山羊血清、血漿及相關(guān)液體樣本中山羊痘抗體（Pox-Ab）含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中山羊痘抗體（Pox-Ab）水平。用純化的抗原包
被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入山羊痘抗體（Pox-Ab） ，再與HRP
標(biāo)記的抗原結(jié)合， 形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物， 經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。 TMB
在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中
的山羊痘抗體（Pox-Ab）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值），通過
標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中山羊山羊痘抗體（Pox-Ab）濃度。  
試劑盒組成  
1  30 倍濃縮洗滌液  20ml×1瓶  7  終止液  6ml×1 瓶
2  酶標(biāo)試劑  6ml×1瓶  8  標(biāo)準(zhǔn)品（120pg/ml）  0.5ml×1 瓶
3  酶標(biāo)包被板  12 孔×8條  9  標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  1.5ml×1 瓶
4  樣品稀釋液  6ml×1瓶  10  說明書  1 份
5  顯色劑A 液  6ml×1瓶  11  封板膜  2 張    
6  顯色劑B液  6ml×1/瓶  12  密封袋  1 個
標(biāo)本要求  
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
山羊痘抗體（Pox-Ab）試劑盒操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
60pg/ml  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
30pg/ml  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15pg/ml  3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5pg/ml  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.75pg/ml  1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液  
2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同） 、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。 在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl，然后再加待測樣品10µl（樣品*終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。      
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50µl，空白孔除外。  
7.  溫育：操作同3。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50µl，再加入顯色劑B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.  終止：每孔加終止液 50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） 。
11.  測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） 。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行。
山羊痘抗體（Pox-Ab）試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的OD 值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計
算時請*后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存： ；2-8℃。
2．有效期：6個月