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技術(shù)文章

水產(chǎn)品中呋喃唑酮殘留量的測定--高效液相色譜法

點擊次數(shù):751 發(fā)布時間:2009/6/30 15:41:55

1.范圍
本標準規(guī)定了水產(chǎn)品中呋喃唑酮殘留量的測定方法──高效液相色譜法。
本標準適用于水產(chǎn)品可食部分中呋喃唑酮殘留量的測定。

 2.規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標準,然而,鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的*新版本。凡是不注日期的引用文件,其*新版本適用于本標準。
GB/T 6682-1992 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法

3. 原理

樣品中呋喃唑酮用二氯甲烷提取,蒸發(fā)濃縮提取液,無水硫酸鈉去除水分,用正己烷液-液萃取除去脂肪及其它雜質(zhì),離心,取下層清液經(jīng)膜過濾器后用高效液相色譜儀分離,紫外檢測器檢測,外標法定量。

4. 試劑和材料

4.1  乙腈:色譜純。
4.2  二氯甲烷:色譜純。
4.3  正己烷:分析純,用乙腈飽和。
4.4  85%磷酸:分析純。
4.5  乙腈水溶液:乙腈+水(體積分數(shù)為80+20)。
4.6  無水硫酸鈉:分析純;經(jīng)640℃灼燒4.0h后,貯于密閉容器中備用。
4.7  無水硫酸鈉柱:200mm×24mmid),內(nèi)裝50mm~100mm高的無水硫酸鈉。
4.8  呋喃唑酮標準品:純度≥99.5%。
4.9  呋喃唑酮標準儲備液:稱取10.0mg呋喃唑酮,用乙腈水溶液溶解并稀釋定容至50mL棕色容量瓶中,在冰箱中冷藏保存,保存期一個月。該液1mL相當于200μg呋喃唑酮。
4.10  試驗用水:符合GB/T 6682一級水標準。

5. 儀器和設(shè)備
5.1  高效液相色譜儀,配有紫外檢測器。
5.2  高速組織搗碎機。
5.3  旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。
5.3  離心機。
5.4  振蕩器。
5.5  蒸發(fā)燒瓶,具塞。
5.6  刻度離心管。
5.7  膜孔濾器:0.45μm
6.色譜條件
6.1  色譜柱:C18, 250mm×4.6mmid),粒度5μm
6.2  流動相:乙腈++磷酸(體積分數(shù)為40+60+0.1)。
6.3  流速:0.8mL/min。
6.4  檢測波長:365nm
6.5  柱溫:室溫。
6.6  進樣量:20μL
7. 樣品測定

7.1  試樣制備
取魚、蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)品可食部分,切成不大于5mm×5mm×5mm的小塊后混勻,經(jīng)高速組織搗碎機搗碎即可,充分混勻。
7.2  提取
稱取搗碎樣品約10g(精確至0.01g),加25mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15min,在振蕩器上振蕩5min,提取液經(jīng)無水硫酸鈉柱濾入蒸發(fā)燒瓶中,殘渣分別用25mL15mL二氯甲烷按上述方法各重復(fù)提取一次,再用15mL二氯甲烷沖洗無水硫酸鈉柱,并采用洗耳球吹出柱中液體,濾液均濾入同一蒸發(fā)燒瓶中,濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45℃左右水浴下減壓蒸發(fā)去除溶劑,蒸發(fā)速度控制在每秒一滴。
7.3  凈化
1.0mL流動相和1.0mL正己烷溶解殘渣并充分洗滌蒸發(fā)燒瓶,將液體移入離心管中,在4000r/min離心5min,用尖嘴吸管移去上層正己烷層,再向離心管中加入1.0mL正己烷,混勻2min,離心,用尖嘴吸管移去上層正己烷層,下層清液經(jīng)0.45μm膜孔濾器過濾后進HPLC分析。
7.4  測定
7.4.1  呋喃唑酮標準工作液配制
臨用前,取呋喃唑酮標準儲備液,用流動相稀釋成濃度為0.01μg/mL~1.00μg/mL的標準工作液。
7.4.2  液相色譜測定
根據(jù)樣品液中呋喃唑酮殘留量情況,選定峰高相近的標準工作溶液。標準工作溶液和樣品液中呋喃唑酮響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。對標準工作溶液和樣品液等體積參插進樣進行測定。在上述色譜條件下,呋喃唑酮保留時間約為5.8min。
7.5  空白試驗
除不加試樣外,按7.2~7.4步驟進行。
8. 結(jié)果計算與表述
根據(jù)標準工作液和樣品液的峰高,按式(1)計算樣品中呋喃唑酮殘留量:                        h-h0
×V×1000
C=Cs ×                          ···································
1
                       hs×m
式中:
C──樣品中呋喃唑酮殘留量,單位為微克每千克(μg/kg);
h──樣品液中呋喃唑酮的峰高;
hs──標準工作溶液中呋喃唑酮的峰高;
h0──空白試驗的峰高;
Cs──標準工作溶液中呋喃唑酮的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
V──樣品液*終定容體積,單位為毫升(mL);
m──樣品的稱取量,單位為克(g)。
   
9. 
線性范圍、檢測限、回收率
9.1  線性范圍
    本方法的呋喃唑酮標準工作液線性范圍為0.01μg/mL ~1.00μg/mL
9.2  檢測限
本方法的檢測限為1μg/kg。
9.3  回收率
本方法回收率為72.8%~96.2%。       

原創(chuàng)作者:天津市蘭博實驗儀器設(shè)備有限公司

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