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技術文章
Thermo反相色譜柱使用和維護說明
點擊次數(shù)：820 發(fā)布時間：2018/8/28 11:15:10
Thermo反相色譜柱使用和維護說明
1 、 適用鍵合相
反相色譜柱鍵合相包括：C18、C8、C4、C1、Phenyl、PFP、aQ、Cyano 1 等。
2 、 柱體積
2 、 柱體積
色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算：
V 為色譜柱柱體積（mL），r 為色譜柱內(nèi)徑（cm），L 為色譜柱長度（cm）。
3 、 色譜柱柱效測試與保存
反相色譜柱出廠時都經(jīng)過柱效測試，所用化合物為茶堿、鄰-硝基苯胺、苯甲酸甲酯、
苯乙醚和二甲苯，如有不同，以柱效報告為準。
在條件允許情況下，請對新色譜柱進行柱效測試。
反相色譜柱出廠時均保存在乙腈-水溶液中。
4 、 溫度
所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應低于 60℃。
5 、 樣品
將樣品溶解在流動相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫，則需要將樣品溶解
在初始流動相或極性相近的溶劑中。
樣品溶液不應含有任何顆粒物，使用 0.5μm 或更小粒徑的濾膜過濾。同時建議在
色譜系統(tǒng)中使用在線過濾器。
樣品溶液如果使用強溶劑（例如，流動相為水，樣品溶劑為甲醇），為達到較好峰形，
需要降低進樣量（以 250x4.6mm 規(guī)格為例，小于 10μL）。
6 、 流動相
所有流動相，特別是含有緩沖鹽的流動相，當日實驗當日配制；如果使用了前日配
制的流動相，請確保流動相 pH 值沒有變化，并確保流動相沒有長菌。
流動相的 pH 值取決于您的應用和色譜柱填料類型。我們建議在所有的色譜柱上都僅使
用 pH 范圍為 2~8 的流動相（ Hypercarb 可以使用 pH 為 1~14 的流動相）；如果需要使用
pH 更高（2~10）的流動相，請選用 Hypersil GOLD、Syncronis C18、Betasil C18 等色譜柱，
并請盡量避免使用無機緩沖鹽。
請盡量避免在常規(guī)流動相中使用很高比例的水（>95%）作為流動相，此類流動相僅適
用于中等疏水的鍵合相，例如 Hypersil GOLD aQ、Aquasil C18、Syncronis aQ 等色譜柱。
所有流動相都需使用 2μm 濾膜過濾。
7 、 色譜柱安裝
請小心操作色譜柱。
不要摔、碰色譜柱，這樣會損壞色譜柱床，使色譜柱性能下降。
使用合適的連接管路和接頭，確保色譜柱連接處死體積降到（使用不銹鋼接頭時需要尤其注意）。我們建議使用 SLIPFREE 接頭，此接頭與 Thermo 色譜柱以及其他品牌色譜
柱均完美匹配。
8 、 色譜柱平衡
在進行分析之前，請使用至少 20 倍柱體積的流動相沖洗色譜柱，以使色譜柱達到平衡。
9 、 色譜柱保護
對于“臟”的樣品以及組分未知的樣品，請盡量使用在線濾器或保護柱，如果可能，使
用 SPE 小柱對樣品進行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長色譜柱使用壽命。
10 、 色譜柱 清洗
常規(guī)清洗：
在儲存色譜柱之前，請使用至少 20 倍柱體積的不帶緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱（去除
緩沖鹽），再用更強的溶劑沖洗色譜柱（去除強保留成分，反相色譜通常使用甲醇或乙腈），
然后使用合適的溶劑儲存色譜柱。
清洗強保留污染物：
使用如下試劑依次清洗色譜柱
20 倍柱體積不帶緩沖鹽的流動相；
20 倍柱體積甲醇或乙腈；
20 倍柱體積異丙醇；
20 倍柱體積正己烷或氯仿；
20 倍柱體積異丙醇；
20 倍柱體積甲醇或乙腈。
11 、 色譜柱保存
反相色譜柱，保存溶劑通常是含至少 30% 有機相的水溶液，也可在常規(guī)清洗后直接保
存在有機相中。
如果需要長時間儲藏，則需要使用較高比例的有機相（有機相比例至少大于 50%，但
不建議使用純有機相）。
注意：如果違反上述規(guī)程，可能使色譜柱失去保修。
原創(chuàng)作者：圣賓儀器科技（上海）有限公司
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