Bradford法
該方法用于大多數(shù)蛋白質(zhì)的定量是比較精確的，但不適用于小分子堿性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污劑的濃度超過0．2％影響測定結(jié)果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford濃染液的配制：將100rug考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50m1 95％乙醇，加入100ml濃磷酸，然后，用蒸餾水補(bǔ)充至200ml，此染液放413至少6個月保持穩(wěn)定。該染液也可從Bio-Rad公司購到。
2．標(biāo)準(zhǔn)曲線蛋白質(zhì)樣本的準(zhǔn)備：盡量使用與待測樣本性質(zhì)相近的蛋白質(zhì)作為標(biāo)準(zhǔn)品，例如測定抗體，可用純化的抗體作為標(biāo)準(zhǔn)。如果待測樣本是未知的，也可用抗體作為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。通常在20ug—150ug／100ul之間繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3．將待測樣本溶于100~1緩沖溶液中，該緩沖溶液應(yīng)與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的緩沖溶液相同（用PBS）。
4．按1：5用蒸餾水稀釋濃染料結(jié)合溶液，如出現(xiàn)沉淀，過濾除去。
5．每個樣本加5ml稀釋的染料結(jié)合溶液，作用5～30rain。染液與蛋白質(zhì)結(jié)合后，將由紅色變?yōu)樗{(lán)色，在595nm波長下測定其吸光度。注意，顯色反應(yīng)不得超過30min．
6．根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算待測樣本的濃度。
注：Bradford法對BSA的測定值均為其重量的2倍。
Bradford斑點法
該方法特別適用于檢測層析柱洗脫組分以定位蛋白洗脫液。例如用于檢測親和層析洗脫液。
1．先配制Bradford濃縮染液。將100mg考馬斯亮藍(lán)G-250溶于50m195％乙醇，加入100ml濃磷酸，然后，用蒸餾水補(bǔ)充至200ml，放4℃至少可保存6個月。該染液也可從Bio-Rad公司購到。
2．將8u!待測蛋白質(zhì)樣本轉(zhuǎn)移至一條Parafilm、SaranWrap上或微孔板孔中。同時應(yīng)設(shè)一樣本緩沖洗脫液作為空白對照。
3．每個樣本孔中加2glBradford濃染液并混勻。
4．大約2min后，含有蛋白質(zhì)的樣本將變?yōu)樗{(lán)色。該方法的靈敏度約為10ug／ml此反應(yīng)在去污劑濃度超過0．2％時非常敏感。但KCl、NaCl、MgCl2或EDTA對其無影響，Tris僅有輕微的影響。