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免疫組化、免疫熒光及免疫細(xì)胞化學(xué)

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上傳時(shí)間：2011/12/17 14:25:29

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上 傳 者：上海銳聰實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司

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什么叫免疫組織化學(xué)？簡單地說，用已知的抗原或者抗體去檢測待檢組織中的抗原或抗體，根據(jù)其結(jié)合后經(jīng)一系列方法的處理，呈色反應(yīng)，在光鏡下確定組織的來源屬性和部位。目前免疫組織化學(xué)作為病理診斷，鑒別特殊病例，是不可缺少的*重要的手段，國內(nèi)在免疫組織化學(xué)的應(yīng)用方面已經(jīng)普遍地展開并擴(kuò)展至基層單位，為病理事業(yè)做出應(yīng)有的貢獻(xiàn)。

什么叫免疫熒光細(xì)胞化學(xué)？是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體（或抗原）作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光（黃綠色或桔紅色），可以看見熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位，以及利用定量技術(shù)測定含量。

用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法；用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。這兩種方法總稱免疫熒光技術(shù)，以熒光抗體方法較常用。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)技術(shù)。

免疫熒光細(xì)胞化學(xué)分直接法、夾心法、間接法和補(bǔ)體法。

什么叫免疫熒光細(xì)胞化學(xué)？免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry）是根據(jù)免疫學(xué)原理，利用抗體同特定抗原專一結(jié)合，對(duì)抗原進(jìn)行定位測定的技術(shù)�？乖饕獮榇蠓肿踊蚺c大分子相結(jié)合的小分子；抗體則是由漿細(xì)胞針對(duì)特定的抗原分泌的γ球蛋白。如果將抗體結(jié)合上標(biāo)記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應(yīng)，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位。

標(biāo)記抗體與抗原結(jié)合方式主要有兩種：①直接法：用標(biāo)記抗體與抗體中的相應(yīng)抗原直接結(jié)合，操作方法簡便，特異性高，但敏感性較差，此法可用于檢定未知抗原；②間接法：先用未標(biāo)記的具有特異性的抗體與樣品中的相應(yīng)抗原結(jié)合，然后再以標(biāo)記的第二抗體與特異性的抗體結(jié)合；第二抗體是用抗體作為抗原注入另一動(dòng)物體內(nèi)誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體，然后再結(jié)合以標(biāo)記物。通過這樣的放大作用，使抗原分子上的標(biāo)記物大大增多，故間接法較直接法的敏感性大為增高，約高5～10倍，故應(yīng)用更為廣泛。間接法中較常用的，如過氧化物酶-抗過氧化物酶復(fù)合物法（peroxidase anti-peroxidase complexmethod，　 標(biāo)記方法PAP法），該法除需一抗和二抗外，還需要制備HRP標(biāo)記的抗酶抗體,即以HRP作為抗原免疫動(dòng)物，制成抗HRP抗體，再以HRP對(duì)標(biāo)記該抗體，制成穩(wěn)定的環(huán)形PAP復(fù)合物。標(biāo)本先后經(jīng)一抗、二抗和PAP復(fù)合物處理后再以DAB顯色抗原存在部位可見棕黃色產(chǎn)物。

10年來，免疫細(xì)胞學(xué)技術(shù)有了很大進(jìn)展，各種新方法相繼建立。單克隆抗體（monoclonal antibody）制備技術(shù)極大地提高抗體的特異性與免疫組化染色的精確性。繼PAP法之后由于生物素-親合素等試劑的應(yīng)用，為檢測微量抗原、受體、抗體提供了更精確的技術(shù)。目前常用的生物素-親合方法有:標(biāo)記親合素-生物素法（labelled avidin-biotin method LAB法）、橋連親合素-生物素法（bridged avidin-biotin method, BAB法）及親素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物法（avidin-biotin-peroxidase complex method，ABC法）；現(xiàn)市上有配制成的ABC藥盒供應(yīng)，使用簡便，是目前廣泛應(yīng)用的一種方法。

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