紫外可見分光光度計(jì)原理
分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團(tuán)吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團(tuán)的信息�？梢杂脴�(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進(jìn)行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律：A=εbc，（A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，為液池厚度，c為溶液濃度）可以對溶液進(jìn)行定量分析。

你可以用紫外可見分光光度計(jì)測定定三種農(nóng)藥的波長在某溶液中的最大、最小吸收波長。

配制溶液－在光譜檢測項(xiàng)下進(jìn)行－調(diào)整檢測光譜范圍及速度－－掃描光譜圖－－吸光度最大處對應(yīng)波長為最大吸收波長，吸光度最小處對應(yīng)的波長為最小吸收波長。

UV765紫外可見分光光度計(jì)操作規(guī)程

一、開機(jī)

開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān)，等待儀器自檢通過，自檢過程中禁止打開樣品室。

二、使用

自檢結(jié)束后（7個(gè)項(xiàng)目均出現(xiàn)OK字樣），儀器進(jìn)入主菜單，屏幕顯示如下七個(gè)功能項(xiàng)：1.光度測量；2.光譜測量；3.定量測量；4.動力學(xué)測量；5.數(shù)據(jù)處理；6.多波長測定；7.系統(tǒng)狀態(tài)設(shè)定。儀器經(jīng)30min熱穩(wěn)定后，就可以進(jìn)入正常測量。

1.光度測量   測定一定波長下的透光率（T％）或吸光度值(A)

在主菜單中選中[光度測量]項(xiàng)后，按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊 → 按[GOTO WL]鍵進(jìn)入波長設(shè)置用數(shù)字鍵輸入你所需的波長值→ 按[ENTER]鍵確認(rèn)→ 屏幕提示：請稍等……，儀器自動將波長移動到你所需測定的波長值→ 按[F1]鍵，選擇測定透光率（T％）或吸光度值(A) → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R位和S1位，關(guān)上樣品室蓋→ 按[F3]鍵，儀器自動將比色皿架R位置移動到光路中（即空白溶液），屏幕上顯示Cell=R → 按[AUTO ZERO]鍵，儀器自動對空白溶液調(diào)零。屏幕提示：請稍等…… → 按[F2]鍵，比色皿架移動到S1位 (待測樣品),屏幕上顯示Cell=S1 → 按[F4]鍵測量T％或A值

測量完成后

1）打印輸出數(shù)據(jù)，按[START/STOP]鍵

2）返回主菜單，按[MODE]鍵

2. 光譜測量  波長掃描或光譜掃描，可直接測定一段波長范圍內(nèi)的光譜圖和峰值谷值數(shù)據(jù)

在主菜單中選中[光譜測量]項(xiàng)后，按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊 → 根據(jù)需要設(shè)定測量模式、掃描范圍、記錄范圍、掃描速度、采樣間隔、掃描次數(shù)、顯示模式各參數(shù)。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達(dá)設(shè)定行，進(jìn)行參數(shù)的修改，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R位和S1位，關(guān)上樣品室蓋→ 按[F3]鍵，儀器自動將比色皿架R位置移動到光路中（即空白溶液），屏幕上顯示Cell=R → 按[F1]鍵進(jìn)行基線校正。屏幕提示：基線校正…… → 按[F2]鍵，比色皿架移動到S1位 (待測樣品),屏幕上顯示Cell=S1 → 按[START/STOP]鍵開始光譜掃描 → 屏幕顯示掃描圖譜

掃描結(jié)束后

1） 打印結(jié)果譜圖，按[F4]鍵

2） 直接讀取峰谷值，按[F2]鍵，屏幕顯示“請輸入峰/谷檢測靈敏度”（默認(rèn)值為3），按[ENTER]鍵確認(rèn)

3） 存儲圖譜，獲取整個(gè)波長范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)，按[F3]鍵，用[→]、[←]方向鍵選擇10個(gè)數(shù)字和26個(gè)字母組成文件名，按[ENTER]鍵確認(rèn)，按[F4]存儲，按1－8數(shù)字鍵確定文件序列號

4） 修改譜圖坐標(biāo)范圍，按[F1]鍵。修改完畢后，按[START/STOP]鍵確認(rèn)后，譜圖將按新設(shè)定坐標(biāo)被刷新

5） 返回上一級菜單，按[MODE]鍵

3. 定量測定  建立濃度曲線，直接測定樣品的濃度

主菜單中選中[定量測定]項(xiàng)后，按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊 → 根據(jù)需要設(shè)定測量波長、測量單位、測量方法各參數(shù)。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達(dá)設(shè)定行，進(jìn)行參數(shù)的修改，并按[ENTER]鍵確認(rèn)

3.1 K系數(shù)法 已知斜率k和截距b，測出樣品的吸光度值后待入公式就可算出濃度值

在測量方法中選擇K系數(shù)法，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[F2]鍵，將k值和b值輸入，按[ENTER]鍵確認(rèn) → 打開樣品室蓋，在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關(guān)上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調(diào)零 → 將樣品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]鍵進(jìn)入數(shù)據(jù)測量界面→ 按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處于光路中 →  按[START/STOP]鍵測量

3.2單點(diǎn)標(biāo)定法 測量一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度與坐標(biāo)零點(diǎn)建立工作曲線，測定未知樣品濃度

在測量方法中選擇單點(diǎn)標(biāo)定法，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[F2]鍵修改單點(diǎn) → 按數(shù)字鍵輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度值 → 按[ENTER]鍵 → 打開樣品室蓋，在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關(guān)上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調(diào)零 → 將空白樣品換成標(biāo)準(zhǔn)樣品→  按[START/STOP]鍵測量標(biāo)樣的吸光度并顯示 → 將樣品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]鍵進(jìn)入樣品測量界面 → 按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處于光路中 →  按[START/STOP]鍵測量

3.3多點(diǎn)標(biāo)定法 測量已知濃度的一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光度，建立工作曲線來測定未知濃度

在測量方法中選擇多點(diǎn)標(biāo)定法，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 打開樣品室蓋，在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關(guān)上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調(diào)零 → 按[F2]鍵重新標(biāo)定 → 按數(shù)字鍵輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù) → 按[ENTER]鍵確認(rèn) → 將標(biāo)準(zhǔn)樣品依次放入比色皿架R、S1、S2位……關(guān)上樣品室蓋 → 按[F3]移動比色皿架R位到光路 → 按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按數(shù)字鍵輸入標(biāo)樣濃度值，按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[START/STOP]鍵測量標(biāo)樣的吸光度→ 按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[F2]鍵移樣品位S1到光路，同樣的方法測量所有標(biāo)樣的吸光度 → 按[F1]鍵生成方程曲線，顯示該曲線的斜率k、截距b、相關(guān)系數(shù)R → 按[MODE]鍵返回定量測量菜單  → 按[START/STOP]鍵進(jìn)入數(shù)據(jù)測量菜單  → 放入樣品 →按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處于光路中 →  按[START/STOP]鍵測量

6.多波長測定  同時(shí)測定幾個(gè)波長下的透光率（T％）或吸光度值(A)

主菜單中選中[多波長測定]項(xiàng)后，按[ENTER]鍵進(jìn)入此功能塊 → 按[F3]鍵設(shè)定測量波長數(shù)目和樣品池個(gè)數(shù)，按[ENTER]鍵確定 → 按數(shù)字鍵輸入相應(yīng)波長值 → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R、S1、S2位……，關(guān)上樣品室蓋 → 按[START/STOP]鍵開始測量

測量完成后

1）打印輸出數(shù)據(jù)，按[F4]鍵

2）返回主菜單，按[MODE]鍵

三、關(guān)機(jī)

將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。


注意事項(xiàng)：

1.開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時(shí)應(yīng)保持比色皿清潔，池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時(shí)，需選用石英比色皿。
3.測定時(shí)，禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因?qū)�樣品槽弄臟，要盡可能及時(shí)清理干凈。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。

問題處理：
1、如果儀器不能初始化，關(guān)機(jī)重啟；如不成功，請向管理老師反映。
2、如果吸收值異常，依次檢查：波長設(shè)置是否正確（重新調(diào)整波長，并重新調(diào)零）、測量時(shí)是否調(diào)零（如被誤操作，重新調(diào)零）、比色皿是否用錯（測定紫外波段時(shí)，要用石英比色皿）、樣品準(zhǔn)備是否有誤（如有誤，重新準(zhǔn)備樣品）。  

UV-1102紫外可見分光光度計(jì)操作規(guī)程

一、開機(jī)

開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān)，等待儀器自檢通過，自檢過程中禁止打開樣品室。

二、使用
儀器自檢結(jié)束后（7個(gè)自檢項(xiàng)目均出現(xiàn)OK字樣），按[MAIN MENU]鍵（主菜單），屏幕顯示如下5個(gè)功能項(xiàng)： 1. Phtometry（定量運(yùn)算）；2.Wavelength Scan（波長掃描模式）；3.Time Scan（時(shí)間曲線掃描）；4.System（系統(tǒng)校正）；5.Data display（光度直接測量模式）。按相應(yīng)選項(xiàng)前的數(shù)字鍵，即可進(jìn)入該選項(xiàng)的下一級子菜單。

1. Phtometry（定量運(yùn)算）

1）按[MAIN MENU]鍵，再按數(shù)字[1]鍵進(jìn)入Phtometry子菜單下，選中對應(yīng)的數(shù)字來選擇所需的測定方式：①%T/ABS（透過率/吸光度測定模式）；②Ratio（比例測定模式）；③Concentration （濃度測定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式）；

2）按數(shù)字[1]鍵進(jìn)入%T/ABS（透過率/吸光度測定）子菜單，選中對應(yīng)的數(shù)字鍵來設(shè)定測定條件：①NUM WL(設(shè)定測試波長的數(shù)目，最多可設(shè)定6個(gè)不同波長)；②WL Setting（設(shè)定測試波長具體數(shù)值）③Data Mode(選擇測定吸光度或透光率)，設(shè)定完畢后點(diǎn)擊[Enter]鍵確定，所有項(xiàng)目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0] 鍵確定，等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài)，此時(shí)屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO，將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中，按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行零點(diǎn)的自動調(diào)整，自動調(diào)零完成后，將樣品置于光路中，再按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行測量，儀器的顯示屏自動給出對應(yīng)波長的數(shù)值。

3）按數(shù)字[3]鍵進(jìn)入③Concentration （濃度測定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式），選中對應(yīng)的數(shù)字來設(shè)定條件（波長數(shù)目，波長數(shù)值，標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)目及濃度），設(shè)定完畢后點(diǎn)擊[Enter]鍵確定，所有項(xiàng)目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定，等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài)，此時(shí)屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO，將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中，按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行零點(diǎn)的自動調(diào)整，自動調(diào)零完成后，將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于光路中，按照濃度從低到高順序依次按[Start/Stop] 鍵進(jìn)行測量，測量完畢后儀器將自動給出標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線下方有三項(xiàng)供選擇：①Process(更改標(biāo)準(zhǔn)曲線的坐標(biāo)和觀察濃度回歸曲線的數(shù)據(jù))；②Measure（直接進(jìn)入樣品的測量）；③Print(打印濃度回歸曲線譜圖和數(shù)據(jù))，選中對應(yīng)的數(shù)字就可執(zhí)行相應(yīng)的功能。
4）如果希望返回上一級菜單，按[CLEAR RETURN] 鍵返回，返回主菜單直接按[MAIN MENU]鍵。
2. Wavelength Scan（波長掃描模式）

1）參數(shù)修改：按[MAIN MENU]鍵，再按數(shù)字[2]鍵進(jìn)入②Wavelength Scan（波長掃描模式）子菜單下，選中對應(yīng)的數(shù)字來選擇所需修改的內(nèi)容， 修改掃描的起始波長，測量模式，圖譜坐標(biāo)的上下限，掃描速度等等。修改完畢按數(shù)字[0]鍵確定。

2）波長掃描：分別將兩個(gè)比色皿裝上空白溶液和樣品溶液，放入比色槽中，按[Start/Stop]鍵進(jìn)行譜圖掃描（如想終止掃描再次按按[Start/Stop]鍵），待儀器自動進(jìn)行基線校正，提示拉入樣品自動測試，測試完畢后有掃描圖譜出現(xiàn)，下方有相應(yīng)的數(shù)據(jù)處理選項(xiàng)①Process②Baseline③Print；

3）數(shù)據(jù)處理：按數(shù)字[1]鍵進(jìn)入①Process（數(shù)據(jù)處理），可以讀峰谷值，修改坐標(biāo)，顯示所有數(shù)據(jù)，求一階倒數(shù)等等功能。

3.Time Scan（時(shí)間曲線掃描）同上（二）操作。

4.System（系統(tǒng)校正），一般不做。

5.Data display（光度直接測量模式）同上（二）操作。

三、 關(guān)機(jī)

將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈；關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。

注意事項(xiàng)：

1.開機(jī)前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時(shí)應(yīng)保持比色皿清潔，池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時(shí)，需選用石英比色皿。
3.測定時(shí)，禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因?qū)�樣品槽弄臟，要盡可能及時(shí)清理干凈。

4.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機(jī)溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。

問題處理：
1、如果儀器不能初始化，關(guān)機(jī)重啟；如不成功，請向管理老師反映。
2、如果吸收值異常，依次檢查：波長設(shè)置是否正確（重新調(diào)整波長，并重新調(diào)零）、測量時(shí)是否調(diào)零（如被誤操作，重新調(diào)零）、比色皿是否用錯（測定紫外波段時(shí)，要用石英比色皿）、樣品準(zhǔn)備是否有誤（如有誤，重新準(zhǔn)備樣品）。