從FFPE樣本材料中分離低至中等通量的RNA。

高純度RNA石蠟試劑盒從石蠟包埋的新鮮冷凍組織中分離總RNA。所獲得的RNA的質(zhì)量適合于用RT-PCR對mRNA進行相對定量，特別是在基于Lightcycler^® Carousel的系統(tǒng)上。其他應(yīng)用包括：

• RT-PCR
• 差異顯示RT-PCR
• cDNA合成
• 引物延伸

高純度RNA石蠟試劑盒從福爾馬林固定、石蠟包埋的組織以及新鮮冷凍組織研究樣本中分離總RNA，直接用于RT-PCR。

• 從存檔石蠟組織（長15年）中分離適合RT-PCR的RNA。
• 獲得即用型濃縮產(chǎn)物（無需RNA沉淀）。
• 在大約2小時內(nèi)（過夜消化后）從組織切片中快速制備總RNA。
• 獲得高純度的RNA，用于相對mRNA定量程序（例如，使用Lightcycler^®系統(tǒng)）。
• 無需使用危險的有機化合物，如氯化銫、苯酚、和溴化乙錠。

將福爾馬林固定、石蠟包埋的組織切片通過過夜蛋白酶K消化進行勻漿，并按照描述進行純化。核糖核酸產(chǎn)量是通過測量260納米的光密度來確定的。RNA洗脫液用于一步式RT-PCR，并帶有ß2M基因的特異性引物。在以下LightCycler^® PCR中，使用LightCycler^® RNA擴增試劑盒SYBR Green I和ß2M的特異性引物，在小于24的cp值下獲得預期的擴增信號。通過無逆轉(zhuǎn)錄酶步驟的LightCycler ^® PCR檢查是否存在污染性基因組DNA；未獲得擴增產(chǎn)物。

在與蛋白酶K（石蠟樣品）或使用合適的組織勻漿器（新鮮冷凍的組織）過夜孵育期間，將組織樣品破碎并勻漿。核酸在離液鹽的存在下特異性結(jié)合到預先包裝在高純度純化過濾管（1）中的玻璃纖維表面。由于水分子的有組織結(jié)構(gòu)的破壞以及與核酸的相互作用，結(jié)合反應(yīng)在幾鐘內(nèi)發(fā)生。結(jié)合過程通常對核酸具有特異性，但結(jié)合條件針對RNA進行了優(yōu)化。在一系列短暫的洗滌和旋轉(zhuǎn)步驟中純化結(jié)合的RNA，以去除細胞成分。從柱上洗脫后，通過將洗脫液與DNase I孵育來消化殘留的DNA。用蛋白酶K進行第二個孵育步驟可提高RNA的純度。，低鹽洗脫將RNA從玻璃纖維羊毛中釋放出來。

在離液鹽（鹽酸胍）存在下，核酸可與玻璃羊毛狀物的表面結(jié)合。這使得高純過濾管能夠特異性地固定核酸（DNA和RNA），同時不含污染物。對于RNA分離，結(jié)合條件可以優(yōu)化，以確保所有RNA的固定化。

容量：高純旋轉(zhuǎn)過濾管多可容納800 μL的樣品體積。

樣品材料：

• 5-10 μm切片來自福爾馬林固定，石蠟包埋的組織（例如，哺乳動物物種的結(jié)腸，乳房，肝臟，腎臟，脾臟，包括人類研究樣品）。
• 20-30 mg新鮮冷凍的固體組織。
• 3 × 5 μm新鮮冷凍組織的組織切片。
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