單位定義
來(lái)自Roche的膠原酶以Wünsch單位(在+25°C下每分鐘用Wünsch底物形成μmol的產(chǎn)物)進(jìn)行測(cè)定。
通常,膠原酶活性是以Mandl單位(在+37℃下5小時(shí)內(nèi)從膠原釋放的1 μmol亮氨酸)給出的。
不幸的是,兩個(gè)活性單位之間沒(méi)有統(tǒng)一的轉(zhuǎn)換因子,因?yàn)镸andl單位部分取決于膠原酶制劑中污染性蛋白酶的濃度,而這是一個(gè)不確定的變量。較純的膠原酶制劑相對(duì)于粗制劑在Mandl單位中實(shí)際上具有更低的比活性。梭菌制劑通常具有約1:1800的轉(zhuǎn)換因子(如某個(gè)特定批次的梭菌膠原酶所含有的約0.15 Wünsch U/mg和250 Mandl U/mg)。
制備說(shuō)明
激活劑:Ca2+
工作濃度:0.5 - 2.5mg/ml
儲(chǔ)存條件(工作溶液):-15至-25°C
Roche建議僅重懸需要立即使用的凍干粉的量。重新配制的溶液可以在-15至-25℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)一周。因?yàn)橹匦屡渲坪蠡钚越档土,所以要避免反?fù)凍融。
抑制劑:
膠原酶抑制劑:EDTA, EGTA, Cys, His, DTT,
膠原酶不會(huì)被血清所抑制。
梭菌蛋白酶抑制劑:TLCK
胰蛋白酶抑制劑:抑肽酶,胰蛋白酶抑制劑(蛋清,大豆)
酶活:
膠原酶活性:>0.15 U/mg (基于Wünsch) (+25°C, 4-苯基-偶氮芐基-氧基羰基-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg作為底物)
污染性酶活:胰蛋白酶,梭菌蛋白酶和總蛋白水解活性
膠原酶D具有正常至高的膠原酶活性,以及非常低的胰蛋白酶活性(通常<0.2單位/mg,BAEE作為底物)。