① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加入待檢抗原及一定量的酶標(biāo)抗原（對(duì)照孔僅加酶標(biāo)抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

④ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

被結(jié)合的酶標(biāo)抗原的量由酶催化底物反應(yīng)產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結(jié)合的標(biāo)記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就減少，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測(cè)；其主要不足在于每種抗原都要進(jìn)行酶標(biāo)記，而且因?yàn)榭乖�的結(jié)構(gòu)不同，還需應(yīng)用不同的結(jié)合方法。此外，試驗(yàn)中應(yīng)用酶標(biāo)抗原的量較多。

阻斷ELISA

本法主要用于檢測(cè)型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬�。≒R）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測(cè)方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測(cè)法為例介紹其操作程序：

① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 用200μl阻斷緩沖液進(jìn)行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑦ 用ELISA檢測(cè)儀測(cè)定OD值。

本試驗(yàn)同時(shí)設(shè)標(biāo)準(zhǔn)陰、陽性血清對(duì)照、兔抗AP2型陽性對(duì)照、空白對(duì)照。

抗體捕捉ELISA

本法主要用于檢測(cè)IgM抗體。由于IgM抗體出現(xiàn)于感染早期，所以檢測(cè)出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷�？贵w捕捉ELISA根據(jù)所用標(biāo)記方式不同可分為標(biāo)記抗原、標(biāo)記抗體、標(biāo)記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標(biāo)記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序?yàn)椋?/div>