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雞蛋白相關(guān)蛋白樣蛋白2(CNTNAP2)ELISA試劑盒
酶聯(lián)吸附法(ELISA)在多個(gè)行業(yè)都有應(yīng)用,特別是在醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)域中了廣泛應(yīng)用。以下是一些應(yīng)用ELISA的行業(yè):1.醫(yī)學(xué)診斷:ELISA被廣泛應(yīng)用于各種和等的診斷,如、、結(jié)核病等。在動(dòng)物檢疫方面,ELISA已為廣泛采用的,例如用于診斷豬傳染性胃腸炎、牛副結(jié)核病、牛傳染性鼻氣管炎、豬偽、藍(lán)舌病等。2.生物技術(shù)研發(fā):ELISA可以用于檢測(cè)生物分子,如蛋白質(zhì)、多肽、等,在生物醫(yī)學(xué)研究域廣泛應(yīng)用。例如,在研發(fā)中,ELISA可以用于檢測(cè)的生物活性、與靶點(diǎn)的結(jié)合情況等。3.食品安全檢測(cè):ELISA可以用于檢測(cè)食品中的有害,如殘留、獸藥殘留等,保障食品安全。4.監(jiān)測(cè):ELISA可以用于評(píng)估水質(zhì)、空氣等指標(biāo),監(jiān)測(cè)狀況?傊嘎(lián)吸附法在醫(yī)學(xué)、生物技術(shù)、食品安全和監(jiān)測(cè)等域都有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
ELISA試劑盒用法
試劑盒操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始,請(qǐng)?zhí)崤渲煤盟性噭噭┗驑悠废♂寱r(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做曲線。如樣品濃度過高時(shí),用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍。
1.加樣:分別設(shè)空白孔、孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。 為實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的品溶液。
2.棄去,甩干,不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記加99μl生物素標(biāo)記稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用小時(shí)內(nèi)配制),37℃,60分鐘。
3.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi),甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
4.每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5.溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi),甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干。
6.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)可見品的3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7.依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8.用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。
雞蛋白相關(guān)蛋白樣蛋白2(CNTNAP2)ELISA試劑盒
ELISA試劑盒基于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng),以用于測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而則為純化抗原動(dòng)物后的多克隆和使用雜交瘤技術(shù)的單克隆,而抗原或的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成制備。ELISA試劑盒的作用ELISA試劑盒是一種用于體外定性檢測(cè)人或中的特定的試劑盒,例如抗人類戊型(HEV)IgMELISA檢劑盒。ELISA試劑盒具有靈敏度高、特好、操作簡(jiǎn)便、安全、快速等優(yōu)點(diǎn),可以用于檢測(cè)類因子、、等,在臨床診斷、科研和生物制品檢測(cè)等域具有廣泛的應(yīng)用。
標(biāo)本的采集及保存:
:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過一晚后于1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞物上清或其它生物標(biāo)本:1000 x g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注:標(biāo)本溶血會(huì)影響**檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。)
標(biāo)本的稀釋原則:通過文獻(xiàn)檢索的了解待測(cè)樣本的大致含量,確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至曲線的范圍內(nèi),檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的中,應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計(jì)算濃度時(shí),稀釋了“N”倍,標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
品的稀釋原則:2瓶,每瓶臨用以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為300 pg/ml,做系列倍比稀釋后,分別稀釋300 pg/ml,150 pg/ml,75 pg/ml,37.5 pg/ml,18.5 pg/ml,9 pg/ml,4.5 pg/ml,樣品稀釋液直接作為濃度0 pg/ml,臨用15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml品:取0.5ml(不要少于0.5ml)300 pg/ml的上述品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
生物素標(biāo)記的稀釋原則:臨用以生物素標(biāo)記稀釋液稀釋,稀釋根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記加990μl生物素標(biāo)記稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用小時(shí)內(nèi)配制。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則:臨用以辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋,稀釋根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔100μl),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用小時(shí)內(nèi)配制
注意事項(xiàng):
1.當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩,避免起泡。
2.洗滌非常重要,不充分的洗滌易造成假陽性。
3.一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,建議使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做曲線,做復(fù)孔。
5.如標(biāo)本中待測(cè)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以稀釋倍數(shù)。
6.在配制品、檢測(cè)溶液工作液時(shí),請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。
7.底物請(qǐng)避光保存。
8.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
試劑盒性能
1.準(zhǔn)確性:品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。
2.靈敏度檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。
3.特:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.重復(fù)性:批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和15%。
關(guān)鍵詞:ELISA試劑盒 靈敏度高 特異性強(qiáng) 重復(fù)性好
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