推薦:Femto ECL 特超敏發(fā)光液
中文名稱:特超敏ECL發(fā)光液
英文名稱:Super Sensitive ECL luminescence reagent
產(chǎn)品規(guī)格:10mL|100mL|500mL
發(fā)貨周期:1~3天
本產(chǎn)品應(yīng)用于免疫印跡實(shí)驗(yàn),以化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)蛋白質(zhì)。其原理是以辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的抗體直接或間接結(jié)合膜上的目的蛋白質(zhì),在洗膜后加入本試劑盒配制的ECL工作液,即可由HRP催化發(fā)出熒光。
本產(chǎn)品對(duì)抗原的 檢測(cè)限可達(dá)到中飛克,在Western blot實(shí)驗(yàn)中,一抗(1mg/mL)儲(chǔ)存液可稀釋1:1,000至1:50,000倍,二抗(1mg/mL)儲(chǔ)存液可稀釋1:50,000至1:200,000倍。發(fā)光信號(hào)持久,結(jié)果可以通過(guò)X光膠片曝光或者其他適當(dāng)熒光成像設(shè)備進(jìn)行檢測(cè)。
推薦:Femto ECL 特超敏發(fā)光液
注意事項(xiàng):
- 本ECL試劑盒靈敏度高,需要優(yōu)化好上樣量、一抗、二抗?jié)舛群拖♂屢、印跡膜及封閉試劑,并按照蛋白表達(dá)豐度,參考推薦的抗體稀釋比例,來(lái)獲得 實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
- 如果印跡膜上條帶過(guò)亮?xí)r,建議使用膜再生液去除抗體后重新封閉孵育,
并提高一抗二抗稀釋比例。如果條帶過(guò)暗也可將二抗稀釋比例降低至1:5000至1:10,000倍,以達(dá)到 效果。 - 本試劑盒A液和B液不可以相互污染,否則會(huì)降低產(chǎn)品的使用效果。
- 發(fā)光強(qiáng)度會(huì)隨時(shí)間緩慢減弱,建議在兩小時(shí)內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)。
- 孵育二抗后,洗膜緩沖液應(yīng)避免使用疊氮鈉,疊氮鈉是HPR的抑制劑。
- 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿戴實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
操作步驟:
- 進(jìn)行常規(guī)Western Blot。
- ECL工作液按照1:1的比例等體積混合適量A液和B液制備。
注:工作液 在臨近使用配制,推薦使用劑量:0.1mL工作液/cm2膜。 - 用鑷子取出洗好的膜,瀝干膜上洗膜液,將結(jié)合有蛋白的一面朝上,放置于潔凈保鮮膜上。
- 加上配好的ECL工作液,孵育時(shí)確保工作液覆蓋整張膜,室溫孵育1~2min。
- 棄去印跡膜上ECL工作液,將一張潔凈的保鮮膜平整的鋪在印跡膜上。
- 將處理好的印跡膜置于X光片盒中,在暗室中取一張膠片小心置于膜上,曝光時(shí)間取決于膜上的發(fā)光強(qiáng)度,曝光后立即顯影定影,或?qū)⒂≯E膜放置到熒光成像儀內(nèi),按儀器說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。

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