兔生長因子受體結(jié)合蛋白10(Grb10) ELISA 試劑盒

實驗原理

        1. 抗原抗體反應(yīng)
ELISA試劑盒中的抗原或抗體被固定在固相載體上，當(dāng)加入待測樣本時，樣本中的抗原或抗體與固相載體上的抗原或抗體發(fā)生反應(yīng)，形成抗原抗體復(fù)合物。
        2. 酶標(biāo)記物的結(jié)合
將酶標(biāo)記物與特異性抗體或抗原結(jié)合，形成酶標(biāo)記抗體或抗原。酶標(biāo)記物在反應(yīng)中起到催化作用，加速反應(yīng)進(jìn)程，提高檢測靈敏度。

3. 酶促反應(yīng)
在酶標(biāo)記物與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合后，加入底物溶液，底物在酶的催化下發(fā)生氧化還原反應(yīng)，產(chǎn)生顏色變化。顏色深淺與待測樣本中的抗原或抗體濃度成正比。

4. 吸光度檢測
將反應(yīng)體系中的吸光度進(jìn)行測量，通過比較標(biāo)準(zhǔn)品溶液與待測樣本溶液的吸光度值，即可計算出待測樣本中的抗原或抗體濃度。

實驗所需自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

試劑盒組成

 操作步驟

1)涂層:微孔板的孔涂上捕獲抗體或抗原。

2)封閉:孔內(nèi)加入封閉劑(如牛血清白蛋白或羧甲基纖維素)，阻止非特異性蛋白質(zhì)結(jié)合。

3)樣本添加:加入含有未知濃度的目標(biāo)抗原或抗體的樣本。

4)洗滌:去除未結(jié)合的物質(zhì)。

5)檢測抗體添加:加入對特定抗原有特異性的酶標(biāo)記檢測抗體。

6) 再次洗滌:再次去除未結(jié)合的檢測抗體。

7)底物添加:加入酶的底物，酶作用于底物產(chǎn)生顏色變化。

8)終止反應(yīng):加入終止溶液停止酶的反應(yīng)(在某些類型的ELISA中需要)。

9)讀數(shù):使用光譜光度計測定每個孔的吸光度(通常是在特定波長下)，吸光度與樣本中抗原或抗體的濃度成正比。