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標(biāo)題實驗制得細(xì)胞的樣本，您需做好這六步兩注意

   

提供者：上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司    發(fā)布時間：2019/7/18   閱讀次數(shù)：278次 >>進(jìn)入該公司展臺
    我們在做一項實驗的時候，需要了解的步驟與所需物品是必不可少的。而今天，上海遠(yuǎn)慕這里要給朋友們分享的就是實驗制得細(xì)胞的樣本，您需做好下文中的這六步兩注意。所謂的六步兩注意也就是操作的六個步驟，和兩條注意事項，下面我們就來詳細(xì)的看看吧。

實驗之前，我公司的吳為朋友們特別準(zhǔn)備說明了所需的物品有哪些：

1、培養(yǎng)基；不含酚紅的DMEM培養(yǎng)基

2、處理玻片：將多聚賴氨酸溶液（溶于1mol/L pH7.0 Tris-HCl緩沖液中），涂布于玻片上，干燥后即可使用�；蛘逜PES 2ml溶于100ml丙酮中，將玻片浸泡入內(nèi)，取出晾干，180℃干燥備用。

3、洗滌液；0.1M，pH7.2～7.4PBS

4、細(xì)胞固定液：4%多聚甲醛0.1MPBS(pH7.2～7.4)含有1/1000 DEPC。

5、乙醇：70%  90%  100%

6、胃蛋白酶溶液：用0.1N HCl將其稀釋為100μg/ml

7、設(shè)備：烤箱，CO2培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，玻璃載玻片，原位雜交專用蓋玻片，溫箱，加樣器和吸頭等。

操作步驟：

1、在37℃ 5% CO2條件下將細(xì)胞加在處理的載玻片上，用培養(yǎng)基培養(yǎng)，時間通過預(yù)實驗確定；

2、細(xì)胞長好后，用洗滌液洗2分鐘×3次，室溫下將其放入細(xì)胞固定液中固定30-60min，蒸餾水洗滌；
3、室溫下用洗滌液充分洗滌固定細(xì)胞，（干燥后-20℃冰凍保存2周以上）

4、雜交前將固定的細(xì)胞進(jìn)行如下處理；依次在70%，90%，100%的乙醇中浸泡，脫水每次5min，用二甲苯洗滌，除去殘留脂質(zhì)依次在100%，90%，70%乙醇中浸泡，進(jìn)行再水化，每次5min，zui后浸泡于洗滌液中；

5、在37℃用胃蛋白酶溶液10min處理固定的細(xì)胞，以增加細(xì)胞對大分子試劑的通透性，再用洗滌液洗5min；

6、用1%甲醛固定10min，用洗滌液洗凈。

注意！
    1、所有溶液都必須用RNA酶抑制劑處理。
    2、操作中zui重要的是及時固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對mRNA的分解作用。此外，過度固定對原位雜交有明顯的不利影響。

    您需購買實驗試劑產(chǎn)品歡迎進(jìn)入我公司，產(chǎn)品的質(zhì)量以及服務(wù)都是好的！了解一些產(chǎn)品的促銷、價格等信息可以來電給我公司業(yè)務(wù)員，也可以關(guān)注我公司的動態(tài)文章。

關(guān)鍵詞：培養(yǎng)基    

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