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標(biāo)題二維平面內(nèi)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的檢測方法

   

提供者:上海遠(yuǎn)慕生物科技有限公司    發(fā)布時(shí)間:2019/4/4   閱讀次數(shù):456次 >>進(jìn)入該公司展臺

 1.劃痕試驗(yàn)  原理簡單,操作便捷,不需要借助特殊的實(shí)驗(yàn)儀器,適用于任何具有貼壁特性的細(xì)胞,因此在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的檢測中應(yīng)用廣泛。本方法中,細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的能力反映為劃痕寬度的變化,通常情況下劃痕由實(shí)驗(yàn)操作者以移液器的吸管端劃出,導(dǎo)致劃痕的寬度并不均一,因此在一定程度上影響了劃痕愈合度的評估。同時(shí),有觀點(diǎn)認(rèn)為超過24小時(shí)的檢測并不能排除細(xì)胞增殖對劃痕愈合的影響,盡管在實(shí)驗(yàn)過程中通過降低培養(yǎng)基的血清濃度可在一定程度上削弱細(xì)胞增殖的影響,但劃痕試驗(yàn)中觀察時(shí)間點(diǎn)的設(shè)置仍宜控制在24小時(shí)以內(nèi)。此外,在人為制造劃痕時(shí)可對周圍細(xì)胞產(chǎn)生一定的機(jī)械損傷,可能會影響劃痕邊界周圍細(xì)胞的活性和運(yùn)動(dòng)潛能。同時(shí),脫落的部分細(xì)胞可能在培養(yǎng)板靜置后重新在無細(xì)胞區(qū)域定植和遷移,從而制造劃痕愈合的假象。

目前,Applied BioPhysics公司推出了基于微電阻感應(yīng)系統(tǒng)的劃痕試驗(yàn)裝置。借助于整合在細(xì)胞培養(yǎng)板l的電極,通過電流的脈沖刺激可產(chǎn)生寬度恒定均一的無細(xì)胞區(qū)域。同時(shí)通過檢測無細(xì)胞區(qū)域的微電阻的增加,可以判斷細(xì)胞向內(nèi)遷移的數(shù)量。這種改良后的裝置實(shí)現(xiàn)了實(shí)驗(yàn)條件的標(biāo)準(zhǔn)化和實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)的精準(zhǔn)化,但其對設(shè)備器材的要求和成本均相對較高。

2.細(xì)胞排斥區(qū)檢測  該方法適宜于貼壁細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的檢測。與劃痕試驗(yàn)相比,由于阻礙物事先已置于細(xì)胞培養(yǎng)板中,因此該方法中形成的無細(xì)胞區(qū)域的邊界清晰,大小相對恒定,具有良好的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。目前,已有商品化的高通量實(shí)驗(yàn)裝置可供選擇。

3.柵欄式檢測  該方法的原理與間隙封閉法極為相似,僅僅是在種植細(xì)胞時(shí)的操作有所不同。其優(yōu)勢與不足與間隙封閉法相似。

4.微球載體檢測  該方法的核心技術(shù)是將待測細(xì)胞均勻包被于微球載體之上。因此,包被的成功率是制約該方法準(zhǔn)確度的主要原因。在實(shí)際操作中,應(yīng)對每個(gè)包被過的微球載體進(jìn)行細(xì)致的鏡下檢查以防止包被不充分的載體進(jìn)入實(shí)驗(yàn)體系。該方法的優(yōu)勢顯而易見,由于微球載體的表面積局限且恒定,因而當(dāng)細(xì)胞附著于載體上時(shí)其總數(shù)相對穩(wěn)定。同時(shí),包被于載體上的單層細(xì)胞排列緊密,可在一定程度上模擬體內(nèi)細(xì)胞的緊密連接狀態(tài)。但是該方法中用到的微球載體成本非常之高,因此目前該法僅用于極少數(shù)類型細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的檢測中。

5.細(xì)胞球遷移檢測  本方法與微球載體檢測法的原理類似,其不同在于不使用任何載體而構(gòu)建具有一定三維結(jié)構(gòu)的由多層細(xì)胞構(gòu)成的細(xì)胞球,因此適用于此法的細(xì)胞必須具備形成細(xì)胞球的能力。細(xì)胞球由多層細(xì)胞由內(nèi)向外依次組成,這可以更好地模擬生理狀態(tài)下細(xì)胞之間的連接與微結(jié)構(gòu)。同時(shí),細(xì)胞球中不同層次的細(xì)胞處于相對不同的微環(huán)境中,這也與體內(nèi)環(huán)境下的狀態(tài)相類似,特別是在模擬腫瘤細(xì)胞從原發(fā)灶中逐漸游離出來而發(fā)生轉(zhuǎn)移中具有明顯的優(yōu)勢。此外,在細(xì)胞培養(yǎng)板中預(yù)鋪基質(zhì)細(xì)胞(如纖維細(xì)胞等)后可以模擬腫瘤細(xì)胞球與基質(zhì)細(xì)胞相互作用而發(fā)生遷移和轉(zhuǎn)移。

6.微流體小室遷移檢測  本方法最早見于白細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的檢測中。該方法中所用的兩個(gè)相互連接的小室容量較小,因此該方法特別適合涉及稀有類型細(xì)胞或珍貴物化材料的實(shí)驗(yàn)。同時(shí),小室本身較小的容量會給實(shí)驗(yàn)帶來諸多不便之處,如操作中需要注意液體的蒸發(fā),小室內(nèi)的液體需高頻率地更換以保證細(xì)胞的生長環(huán)境相對穩(wěn)定。

7.毛細(xì)管遷移檢測  本方法適宜于白細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的粗略檢測,目前已被多種更為精確的檢測手段所取代。

8.瓊脂糖白細(xì)胞遷移試驗(yàn)  該方法的成本低廉,試驗(yàn)結(jié)果的記錄和分析較為簡單,僅適用于白細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力的檢測。

9.單細(xì)胞運(yùn)動(dòng)檢測  該方法最大的優(yōu)勢在于可實(shí)現(xiàn)對單細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的追蹤。通過記錄每個(gè)細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)路徑可以計(jì)算出細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的速率。然而,由于該體系內(nèi)的細(xì)胞數(shù)極少,難以完成涉及細(xì)胞數(shù)較多的實(shí)驗(yàn)。同時(shí),實(shí)現(xiàn)對細(xì)胞的實(shí)時(shí)追蹤依賴于全自動(dòng)的數(shù)字分析記錄系統(tǒng),且其中獲得的信息量相對較多,因此該方法的成本較高,對實(shí)驗(yàn)操作者的要求也相對較高。

關(guān)鍵詞:細(xì)胞運(yùn)動(dòng)    

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