D＝kCL

式中k為比例常數(shù)，當(dāng)溶液濃度以重量百分濃度為單位，液層厚度為 1 厘米時，k稱為該物質(zhì)的比吸收系數(shù)。

如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此溶液在某一波長下的總光密度等于各組分在相應(yīng)波長下光密度的總和，這就是光密度的加和性。

葉綠素a、b在紅光區(qū)的最大吸收峰分別位于663 nm 和 645 nm，在波長663 nm 下，葉綠素a、b的80％丙酮溶液的比吸收系數(shù)分別為82.04和9.27，在波長645nm下分別為16.75和45.6，可據(jù)此列出下列關(guān)系式：

式中的D₆₆₃和D₆₄₅為葉綠素溶液在波長663nm和645nm時的消光度，C_a和C_b分別為葉綠素a和b的濃度，以毫克/升為單位。

將C_a與C_b相加，即得葉綠素總量CT。

實驗儀器耗材: 新鮮葉片    丙酮    研缽    漏斗   天平    剪刀    燒杯    濾紙     量筒    分光光度計

實驗步驟:
稱取新鮮葉片0.5克，剪碎置研缽中，加少量碳酸鈣和石英砂，并加入2-3 ml  80％丙酮，研成勻漿，再加入10 ml  80％丙酮，繼續(xù)研磨充分，用一層加丙酮濕潤過的濾紙過濾，再用少量丙酮將濾紙和研缽上的色素沖洗干凈，定容至25 ml 容量瓶中，搖勻。

吸取葉綠素丙酮提取液2 ml ，加80%丙酮2 ml 稀釋后，倒入1 cm 比色杯中，用分光光度計分別在波長645nm、663nm和652nm下測定光密度，以80％丙酮為空白對照。

按公式（3）、（4）、（6）分別計算葉綠素a、b濃度及總濃度（毫克/升）

按下式計算葉綠素在葉片中的含量：