待測血漿加入過量的含鈣組織凝血活酶，重新鈣化的血漿在組織因子存在時激活因子成為X成為Xa。后者使凝血酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槟�血酶，凝血酶使纖維蛋白原轉(zhuǎn)變?yōu)槟�血不溶性纖維蛋白，測定凝固所需時間、即為待測血漿凝血酶時間(PT)、PT測定是外源性系統(tǒng)理想和常用的篩選實驗，也可作為外源性途徑凝血固定做定量試驗，同時也可用于口服抗凝劑治療的監(jiān)控。標本的來源與保存：

　　靜脈采血，置于含有1/10體積0.109mol/L枸櫞酸鈉抗凝液(1份抗凝液+9份全血)的塑料管或硅化玻璃管中，輕輕顛倒混勻。3000rpm(或25O0)離心15分鐘，收集上層液(血漿，黃色)，標本在不同條件下保存時間如下：-80℃保存，不宜超過3O天，一20℃保存，不宜超過14天，2一8℃保存，不宜超過6小時，22-24℃保存，不宜超過2小時測定。

　　實驗步驟

　　1. 試劑重建：

　　于保存每瓶PT試劑加人2.0ml蒸餾水輕搖溶解。注意：試劑溶解后2-8℃可保存7天，室溫(15-25℃)可保存24小時，勿凍結(jié)。

　　2. 手工測定：

　　取待測血漿(參比血漿)0.1ml.37℃孵育2分鐘，加入37℃預(yù)溫凝血活酶0.2ml;混勻，立即啟動秒表，記錄凝固時間，即為PT值。

　　3. 血凝儀測定：

　　請按儀器提供的參數(shù)操作

　　正常值：

　　1. 以時間表示11-15秒

　　2. 以PTD表示0.95-1.24

　　3. 以INR表示0.94-1.30

　　注意事項

　　l. 采血必須使用一次性塑料注射器或硅化玻璃注射器，貯血必須使用塑料試管或硅化玻璃管不宜使用普通玻璃管，避免凝血因子活化。

　　2. 采血時止血帶不可束縛過緊并不應(yīng)超過5分鐘，否則導致凝血及纖溶因子活化。

　　3. 血液應(yīng)立即加抗凝劑，血漿制備必須及時，血漿分離應(yīng)盡快去除血小板血漿分離后應(yīng)盡快測定。

　　4. 血漿預(yù)溫不宜超過10分鐘。

　　5. 凝血活酶預(yù)溫不宜超過30分鐘。

　　6. 用濁度法測定終點的自動化凝血儀，溶血和較明顯的黃疸及脂血會影響測定結(jié)果，此時宜用手工法或電子機械或凝血儀測定。

　　7. 紅細胞比容超過55%或小于20%時，應(yīng)調(diào)整抗凝劑用量，抗凝劑體積(ml)=0.00185×血液體積(ml)×(100-比容)。

　　8. 不宜使EDTA·Na2. 肝素，草酸鹽抗凝，應(yīng)使用0.109mol/L拘櫞酸鈉抗凝。

　　9. 一80℃及一20℃保存樣品，測定時37℃迅速融化，不可反復凍融。

　　10. 樣品采集避免溶血及組織液污染。

　　11. 建議各實驗室建立自己的參考值范圍。

　　12. 手工操作時，凝血酶原時間的終點計算以出現(xiàn)混濁的初期凝固為準。

　　13. 測定溫度36.5-38.5℃過低或過高溫度均使PT延長。