用洗刷的辦法使固相載體上構(gòu)成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分隔。再參加酶符號的抗原或抗體，也經(jīng)過反響而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈必定的份額。參加酶反響的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)品，產(chǎn)品的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色。

使用雙抗體夾心法測定標本中人可溶性粘附分ELISA試劑盒水平。用純化的人可溶性粘附分ELISA試劑盒抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次參加可溶性粘附分ELISA試劑盒，再與HRP符號的可溶性粘附分ELISA試劑盒抗體結(jié)合，構(gòu)成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過完全洗刷后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終究的黃色。色彩的深淺和樣品中的可溶性粘附分ELISA試劑盒呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），經(jīng)過規(guī)范曲線核算樣品中人可溶性粘附分濃度。