一、原理

免疫磁珠法分離細(xì)胞基于細(xì)胞表面抗原能與連接在磁珠上的特異性單抗相結(jié)合，在外磁場中，通過抗體與磁珠相連的細(xì)胞被吸附而滯留在磁場中，無該種表面抗原的細(xì)胞由于不能與相連著磁珠的特異性單抗結(jié)合而沒有磁性，不在磁場中停留，從而使細(xì)胞得以分離。免疫磁珠法分正選法和負(fù)選法，也稱陽性分選法和陰性分選法。正選法-磁珠結(jié)合的細(xì)胞就是所要分離獲得的細(xì)胞；負(fù)選法-磁珠結(jié)合的細(xì)胞為不需要細(xì)胞。一般負(fù)選法分選較為常見，因?yàn)榇朔椒ǐ@得的所需要的細(xì)胞表面不含有抗體及磁珠的干擾�，F(xiàn)以兩步法分選小鼠CD4+ CD25+ T細(xì)胞的分選為例分別介紹負(fù)選法、正選法如下。

1、材料試劑：

<1>、生物素化的，小鼠CD4陰性分選抗體混合物[cocktail，內(nèi)含抗B細(xì)胞（CD45R，B220）、CD8+T細(xì)胞（CD8a，Ly-2）、造血細(xì)胞（CD11b,Mac-1），NK細(xì)胞（CD49b,DX5）等非CD4+T細(xì)胞表面標(biāo)志的抗體]。

<2>、結(jié)合有磁珠的抗生物素抗體（Scimall科學(xué)在線提供）；含0.5%BSA（或0.5%FCS）及2mmol/L EDTA的PBS緩沖液；抗小鼠CD25-PE抗體；結(jié)合有磁珠的抗PE抗體（Scimall科學(xué)在線提供）；磁珠分離器或分離柱。

<1>、負(fù)性分選小鼠CD4+T細(xì)胞

<2>、陽性分選小鼠CD25+ T細(xì)胞

二、注意事項(xiàng)：

1、如果分離細(xì)胞用作培養(yǎng)，全過程注意無菌操作。

2、磁珠分離系統(tǒng)分離的細(xì)胞 純度可以達(dá)到80%-99%，得率在60%-90%左右，僅次于或相當(dāng)于流式細(xì)胞儀的分選效率，與FACS相比，MACS設(shè)備簡單，耗時極短，故而應(yīng)用廣泛。設(shè)定不同的程序（細(xì)胞得率或純度不可兼得），連續(xù)兩次過柱分選可進(jìn)一步提高分選細(xì)胞純度，通�？蛇_(dá)到95%-95%。

3、由于陽性分選得到的細(xì)胞表面結(jié)合有抗體及磁珠，有可能影響細(xì)胞的功能，故目前常用陰性分選的方法分離細(xì)胞。如果只能用陽性分離的方法，Scimall科學(xué)在線建議在分離后培養(yǎng)1-2天，使結(jié)合在細(xì)胞表面的抗體脫落。

4、抗體包被磁珠對死細(xì)胞、紅細(xì)胞常有非特異性結(jié)合。故而分選前去除死細(xì)胞、紅細(xì)胞（如通過Ficoll分離去除）可以提高分離的效果。

 

三、陽性分選法和陰性分選法的優(yōu)缺點(diǎn)比較