1．人無菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒雙手。

2．倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，確定細胞是否需要傳代及細胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預熱。

3．超凈臺臺面應整潔，用0.1％新潔爾滅溶液擦凈。

4．打開超凈臺的紫外燈照射臺面20min左右，關閉超凈臺的紫外燈，打開抽風機清潔空氣，除去臭氧。

5．點燃酒精燈；取出無菌試管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮頭；過酒精燈火焰略燒后插在無菌試管內。

6．將培養(yǎng)用液瓶口用75％酒精消毒，過酒精燈火焰后斜置于酒精燈旁的架子上。

7．倒掉培養(yǎng)細胞的舊培養(yǎng)基。酌情可用2—3mLHanks液洗去殘留的舊培養(yǎng)基，或用少量胰酶涮洗一下。

8．每個大培養(yǎng)瓶加入1mL胰酶，小瓶用量酌減，蓋好瓶蓋后在倒置顯微鏡下觀察，當細胞收回突起變圓時立即翻轉培養(yǎng)瓶，使細胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉。注意勿使細胞提早脫落入消化液中。

9．加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，反復吹打消化好的細胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基（7～10mL／大瓶，3～5mL／小瓶）制成細胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉，以利于CO2氣體的進入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。

10．對懸浮培養(yǎng)細胞，步驟7-9不做�？蓪⒓毎麘乙哼M行離心去除舊培養(yǎng)基上清，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。