病毒分離是診斷ND最為確切的一種方法，并且可以為感染的毒株定性。通常采用雞胚接種的方法分離NDV，也可用鴨胚、鵪鶉胚或雞胚成纖維細(xì)胞等。病毒分離時(shí)最好取患病雞的腦、脾、肺等組織的勻漿混合物，加抗生素處理后，接種于雞胚或其他禽類(lèi)胚的尿囊腔或雞胚成纖維細(xì)胞中。組織樣品須反復(fù)凍融3次以上，以確保病毒分離的成功。病料接種雞胚后，一般培養(yǎng)36～96h雞胚發(fā)生死亡，可見(jiàn)胚體的頭、翅、頸、胸等處出血，尿囊液清朗，內(nèi)含大量病毒，呈現(xiàn)較高的血凝性。分離病毒時(shí)還應(yīng)結(jié)合相應(yīng)的血凝和血凝抑制試驗(yàn)等方法進(jìn)行檢測(cè)，以便使結(jié)果更加可靠。病毒分離后需要進(jìn)一步測(cè)其雞胚平均死亡時(shí)間（MDT）、腦內(nèi)致病指數(shù)（1CPl）、靜脈致病指數(shù)（1VPD等一系列生物學(xué)指標(biāo)。

該方法用于診斷ND，準(zhǔn)確、可靠，但整個(gè)過(guò)程較為繁雜，耗時(shí)較長(zhǎng)，因此，很難在基層獸醫(yī)工作中得到廣泛應(yīng)用。

（1）樣品采集 活禽用氣管拭子和泄殖腔拭子（或糞便）；死禽以腦為主；也可采心、肝、脾、腎、氣囊等組織。

（2）樣品處理 樣品用生理鹽水或磷酸鹽緩沖液（PBS）研成1；5乳液；拭子浸入2—3ml生理鹽水或PBS緩沖液中，反復(fù)吸擠壓至無(wú)水滴出，棄之。溶液中加入青霉素（使終濃度為1000單位／mi）鏈霉素（使終濃度為lmg／mi）泄殖腔拭子（或糞）樣品，青霉素、鏈霉素量提高5倍。然后調(diào)pH 7．0～7．4，37~C作用1h，再1000r／rain離心10min，取上清0．1ml備用。

（3）病毒分離和鑒定 將病料接種9～lo日齡SPF雞胚，經(jīng)孵化后，檢查尿囊液是否具有血凝性（HA）以及這種血凝性能否被新城疫特異抗血清所抑制（H1）。若有血凝性（HA效價(jià)>24）且血凝性能被特異血清所抑制，則證明分離到了新城疫病毒，但該病毒并不一定是致病的強(qiáng)毒，也有可能是疫苗毒÷因此必須對(duì)分離到的病毒進(jìn)行致病力測(cè)定。

血凝和血凝抑制是進(jìn)行新城疫病毒鑒定最確實(shí)，也是最有效的方法。至今OIE所采用的標(biāo)準(zhǔn)也一直是采用本方法進(jìn)行鑒定。