試劑： 

（1）　包被緩沖液（PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液）: Na2CO3 1.59克 NaHCO3　 2.93克 加蒸餾水至1000ml

（2）　洗滌緩沖液（PH7.4PBS）：0.15M KH2PO4 　0.2克 Na2HPO4·12H2O　2.9克 NaCl　8.0克 KCl　0.2克 Tween-20　0.05%　0.5ml 加蒸餾水至1000ml

（3）　稀釋液： 牛血清白蛋白（BSA） 0.1克 加洗滌緩沖液至100ml 或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

（4）　終止液（3M　H2SO4）： 蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。

（5）　底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）: 0.2MNa2HPO4（28.4克/L）25.7ml 0.1M檸檬酸（19.2克/L）　 24.3ml 加蒸餾水50ml。

（6）　TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液: TMB（10mg/5ml無(wú)水乙醇）0.5ml 底物緩沖液（PH5.5）　 10ml 0.75%H2O2　 　32μl

（7）　ABTS使用液: ABTS　0.5mg 底物緩沖液（PH5.5）　 1ml 3%H2O2　 　2μl

（8）　抗原、抗體和酶標(biāo)記抗體。

（9）　正常人血清和陽(yáng)性對(duì)照血清。

 器材 ：

（1）　聚苯乙烯塑料板（簡(jiǎn)稱酶標(biāo)板）40孔或96孔，ELISA檢測(cè)儀，50μl及100μl加樣器，塑料滴頭，小毛巾，洗滌瓶。

（2）　小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。

（3）　4℃冰箱，37℃孵育箱。 試驗(yàn)原理 試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

 自備材料 ：

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

 3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性 ：

1． 避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗。

2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。 5． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

10． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。 11． 加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。 12． 按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

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