目的建立益智藥材中圓柚酮的含量測(cè)定方法，并對(duì)不同產(chǎn)地藥材進(jìn)行含量測(cè)定。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為Diamonsil�睠18（5 μm，250 mm×4.6 mm），流動(dòng)相為乙腈�菜�（65∶35），檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm，流速為1.00 ml·min��1，柱溫為40℃。結(jié)果圓柚酮在0.115 2～0.268 8μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r=0.999 9；平均回收率為97.34%，RSD=1.48%（n=6）。不同產(chǎn)地益智藥材中圓柚酮的含量在1.50～2.10 mg·g��1之間。結(jié)論該法可靠、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便，可作為益智藥材的質(zhì)量控制方法。

　　【關(guān)鍵詞】 益智； 圓柚酮

　　ChinaAbstract：ObjectiveTo establish a method for determination of the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae，and to determine the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places by this new method.MethodsThe Diamonsil�睠18（5 μm，250 mm×4.6 mm） column was used. The mobile phase was CH3CN�睭2O（65:35） ａnd the detection wavelength was set at 235 nm.The flow rate was 1.00 ml·min-1 ａnd the column temperature was 40℃. ResultsThe Nootkatone content showed a good linear relationship within the range of 0.115 2～0.268 8μg（r=0.999 9）.The average recovery was 97.34% ａnd RSD was 1.48%（n=6）. the content of Nootkatone in Fructus Alpinia oxyphyllae from different places was within the range of 1.50～2.10 mg·g-1.ConclusionThe method is simple ａnd the result was reliable. It can be used for the quality control of this herbal medicine.

　　Key words： Fructus Alpinia oxyphyllae； Nootkatone

中藥益智，為姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果實(shí)，主產(chǎn)于我國(guó)的海南和廣東，為四大南藥之一。其功效為溫脾止瀉，攝唾涎，暖腎，固精縮尿，主治脾寒泄瀉，腹中冷痛，口多涎唾，腎虛遺尿，小便頻數(shù)，遺精白濁［1］。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，益智石油醚提取部位為其縮尿作用的有效部位，并且通過(guò)氣相色譜�操|(zhì)譜聯(lián)用分析，發(fā)現(xiàn)此部位中的主要化學(xué)成分為圓柚酮（Nootkatone）［2］。國(guó)外已有研究報(bào)道，從益智藥材中分離得到的圓柚酮，在抗實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍、抑制脂多糖活化巨噬細(xì)胞中NO的產(chǎn)生和抑制由抗原引發(fā)的RBL��2H3細(xì)胞的脫落等方面具有顯著的活性，為益智藥材的有效成分之一［3］。而對(duì)于益智藥材中圓柚酮的含量情況還未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。為了更好地控制藥材質(zhì)量，我們采用高效液相色譜法建立了益智藥材中圓柚酮的含量測(cè)定方法，并測(cè)定不同產(chǎn)地藥材中圓柚酮的含量。

　　1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀，HPChemStation 6.04軟件包（美國(guó)Agilent公司）；賽多利斯Bp211DAG電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；超聲波清洗器CX��100（北京醫(yī)療設(shè)備二廠）。圓柚酮對(duì)照品由美國(guó)Sigma公司提供（批號(hào)：10112423，純度>98%）。乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。不同產(chǎn)地的藥材由成都中醫(yī)藥大學(xué)謝秀瓊教授從各產(chǎn)地收集，并經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)盧先明教授鑒定為姜科植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的干燥成熟果實(shí)。

　　2 方法與結(jié)果

　　2.1 色譜條件

　　色譜柱為Diamonsil�睠18柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相為乙腈�菜�（65∶35）；檢測(cè)波長(zhǎng)為235 nm；流速為1.00 ml·min-1；柱溫為40℃。靈敏度為0.005AUFS。在選定條件下，圓柚酮與樣品中其他色譜峰達(dá)基線分離，其理論塔板數(shù)（N）大于4 000。對(duì)照品溶液和供試品溶液色譜圖見(jiàn)圖1～2。

　　2.2 對(duì)照品溶液的制備

　　取圓柚酮對(duì)照品適量，精密稱定，置25 ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制成含圓柚酮0.480 0 mg·ml-1的對(duì)照品溶液。

　　2.3 供試品溶液的制備

　　取益智藥材，除去雜質(zhì)及外殼，粉碎，過(guò)40目篩。取粉末約0.2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加甲醇25 ml，稱定重量，超聲提�。�360 W，35 kHz）30 min，放冷至室溫，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，即得。

　　2.4 線性關(guān)系考察

　　精密吸取圓柚酮對(duì)照品溶液（0.480 0 mg·ml-1） 0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml，分別置25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣10 μl測(cè)定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，則回歸方程為：A=3 237.2C 4.33，r=0.999 9。表明圓柚酮在0.115 2～0.268 8 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

　　2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

　　精密吸取上述對(duì)照品溶液10 μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，峰面積RSD=0.20%，表明儀器的精密度良好。

　　2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

　　取同一批樣品（海南省瓊中縣出產(chǎn)）5份，分別按供試品溶液的制備方法制備，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。其RSD=1.23%，表明該方法重復(fù)性良好。

　　2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

　　取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8 h進(jìn)樣10 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量。其RSD=0.32%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

　　2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

　　取6份已知含量的樣品（海南省瓊中縣出產(chǎn)，含量為2.10 mg·g-1）約0.1 g，精密稱定，分別加入圓柚酮對(duì)照品溶液（0.480 0mg·ml-1） 0.5 ml。按供試品溶液的制備方法制備，進(jìn)樣10 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1，平均回收率為97.34%，RSD=1.48%。表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （略）

　　2.9 樣品的含量測(cè)定取不同產(chǎn)地的益智藥材,用本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 不同產(chǎn)地益智藥材中圓柚酮含量測(cè)量結(jié)果（略）

　　3 討論

圓柚酮（Nootkatone）又稱諾卡酮，是屬于雅檻藍(lán)烷（eremophilane）系的雙環(huán)倍半萜酮。其甲醇溶液在200～400 nm波長(zhǎng)下掃描，結(jié)果在235 nm波長(zhǎng)處存在最大吸收峰，故選擇235 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

　　益智從《中國(guó)藥典》1963版Ⅰ部即開(kāi)始收載，現(xiàn)行版《中國(guó)藥典》的含量測(cè)定項(xiàng)下只要求本品種子含揮發(fā)油不得少于1.0%（ml·g-1），對(duì)于其中指標(biāo)性成分的含量限度暫無(wú)規(guī)定。本文建立了益智藥材中圓柚酮的高效液相色譜含量測(cè)定方法，并對(duì)不同產(chǎn)地藥材樣品進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果重復(fù)性好、精密度高、操作簡(jiǎn)便，效果滿意，可作為益智藥材的質(zhì)量控制方法，也可為益智藥材的栽培及收購(gòu)等提供參考。