【摘要】目的分析藥對(duì)荊芥-桂枝、單味藥荊芥，桂枝的揮發(fā)油成分。方法采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）檢測，通過化學(xué)計(jì)量學(xué)解析法對(duì)二維色譜/質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行解析，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)荊芥-桂枝、單味藥荊芥、桂枝的揮發(fā)油成分的分析。結(jié)果荊芥-桂枝、荊芥和桂枝揮發(fā)油成分分別定性得到51，47和61個(gè)結(jié)果，占總含量的88.72%,90.52%和88.37%。結(jié)論藥對(duì)揮發(fā)油成分的數(shù)目大致為荊芥和桂枝揮發(fā)油成分的加和，但相對(duì)含量有變化。
　　
　　【關(guān)鍵詞】藥對(duì)荊芥-桂枝揮發(fā)油氣相色譜-質(zhì)譜化學(xué)計(jì)量學(xué)解析法
　　
　　配伍理論是中藥復(fù)方的核心問題。藥對(duì)是中藥配伍的基本形式，是復(fù)方的最小組成單位，又是復(fù)方的一種特殊形式［1］。藥對(duì)的化學(xué)成分研究將為中藥復(fù)方的配伍研究提供基本的依據(jù)，并揭示配伍理論的化學(xué)本質(zhì)。荊芥-桂枝為常用辛溫解表藥對(duì)［1］。荊芥祛風(fēng)解表，宣毒透疹；桂枝散寒解表，溫經(jīng)通脈，通陽化氣［2］。兩者配伍使用，可增強(qiáng)祛風(fēng)解表、散寒止痛的效果，共收解肌發(fā)表祛風(fēng)散寒之功。揮發(fā)油成分是解表藥對(duì)的藥效物質(zhì)［3］，而藥對(duì)荊芥-桂枝的揮發(fā)油成分未見報(bào)道�；瘜W(xué)計(jì)量學(xué)解析法（Chemometricresolutionmethod,CRM）是對(duì)二維色譜/光譜矩陣數(shù)據(jù)進(jìn)行解析的一種有效方法，它利用二維矩陣數(shù)據(jù)包含的色譜/光譜信息，采用局部因子分析以分辨出單個(gè)組分的純色譜和光譜，其原理與解析參照文獻(xiàn)方法［4］,它已成功地應(yīng)用于中藥揮發(fā)油成分的分析［5］。本實(shí)驗(yàn)采用氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）和CRM分析藥對(duì)荊芥-桂枝的揮發(fā)油，并比較了單味藥與藥對(duì)的揮發(fā)油成分,討論了單味藥配伍后揮發(fā)油成分的變化。
　　
　　1器材與方法
　　
　　1.1器材儀器為日本島津QP2010型氣相色譜儀-質(zhì)譜儀。荊芥、桂枝均購自湖南中醫(yī)藥研究院，經(jīng)該院中藥研究所鑒定分別為荊芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥莖枝、肉桂CinnamomumcassiaPresl.的干燥嫩枝。
　　
　　1.2揮發(fā)油提取
　　
　　1.2.1藥對(duì)揮發(fā)油的提取稱取干燥的荊芥（HerbaSchizonepetae,HS），桂枝（RamulusCinnamomi,RC）各100g，混合，按《中國藥典》（2000年版）揮發(fā)油提取法提取［6］。
　　
　　1.2.2單味藥揮發(fā)油的提取分別稱取干燥的荊芥和桂枝各100g，按照上法提取。
　　
　　1.3揮發(fā)油的測定條件
　　
　　1.3.1色譜條件色譜柱OV-1（30m×0.25mm）。程序升溫：起始溫度40℃，以2℃·min-1升至120℃，再以10℃·min-1升至230℃，維持20min。載氣He；流速1.0ml·min-1；進(jìn)口溫度250℃，界面溫度280℃。
　　
　　1.3.2質(zhì)譜條件EI源電子能量70eV，離子源溫度230℃。倍增電壓1.28kV，掃描范圍20·600amu；掃描速率3.8scans.s-1，溶劑延遲2min。
　　
　　1.4數(shù)據(jù)分析數(shù)據(jù)分析在Celeron（R）2.66GHz（Intel）計(jì)算機(jī)上進(jìn)行，程序用Metlab6.5編寫，所分辨的質(zhì)譜在NIST107標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜庫中檢索。
　　
　　2結(jié)果
　　
　　2.1揮發(fā)油化學(xué)成分的定性分析圖1～3分別是荊芥、桂枝和荊芥-桂枝的揮發(fā)油的GC-MS總離子流圖（TIC），其中許多色譜峰產(chǎn)生重疊。圖2中A的保留時(shí)間段為53.05～53.50min，放大為圖4。
　　
　　圖1荊芥揮發(fā)油的總離子流圖（略）
　　
　　圖2桂枝揮發(fā)油的總離子流圖（略）
　　
　　圖3藥對(duì)荊芥-桂枝的揮發(fā)油總離子流圖（略）
　　
　　圖4A峰的總離子流圖（略）
　　
　　圖5解析后A峰的色譜圖（含化合物1，2，3，和4）（略）
　　
　　從圖4可見，A似乎是兩個(gè)分離很好的色譜峰。直接從色譜庫中進(jìn)行檢索，左側(cè)峰中不同位置質(zhì)譜變化很大，且檢索結(jié)果與被測物質(zhì)譜相似度都較低，其中左半部分中間部分檢測為Dodecanoicacid,2-phenylethylester，相似度為70％，右半部分檢測為1,2-Benzenedicarboxylicacid,diundecylester，相似度為81％，右側(cè)峰檢測結(jié)果為Pentadecanoicacid，相似度為64％�？梢姡�直接從色譜庫中進(jìn)行檢索的定性結(jié)果其可靠程度和準(zhǔn)確度都較低，同時(shí)由于色譜峰重疊，難以進(jìn)行定量分析。
　　
　　利用CRM分析，結(jié)果表明A是一個(gè)四組分體系（圖5）。根據(jù)各組分的純色譜和質(zhì)譜，再將它們與NIST標(biāo)準(zhǔn)庫進(jìn)行匹配，可檢索到4種組分，分別為①4-（phenylmethoxy）-Benzoicacid；②Phen-1,4-diol；③2,3-dimethyl-5-trifluoromethyl-Tridecanoicacid；④Benzoicacid,2-phenylethylester，相似度（相對(duì)含量）分別為97.9％（0.09%），94.4（0.05%）,91.5（0.07%）,93.8（0.02%）。由于得到的是純組分的質(zhì)譜，定性結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠程度大為提高。
　　
　　與上述解析A過程相似，對(duì)桂枝其它保留時(shí)間段的組分以及荊芥和荊芥－桂枝TIC圖，利用CRM逐步進(jìn)行分辨，可得到組分的純質(zhì)譜，再用質(zhì)譜庫對(duì)分辨出的組分進(jìn)行質(zhì)譜定性檢索，得到組分定性結(jié)果。荊芥-桂枝、荊芥和桂枝揮發(fā)油定性鑒定的組分分別為51，47和61個(gè),占總含量的88.72%,90.52%和88.37%。
　　
　　2.2揮發(fā)油化學(xué)成分的定量分析對(duì)解析后的所有色譜采用總體積積分法積分，可得到各個(gè)組分的定量分析結(jié)果，荊芥，桂枝和藥對(duì)荊芥-桂枝定性組分含量分別占總含量的90.52%，88.37%和88.72%,三者的揮發(fā)油主要化學(xué)成分見表1。
　　
　　3討論
　　
　　由表1可見，藥對(duì)荊芥-桂枝揮發(fā)油主要化學(xué)成分的數(shù)量大致是兩個(gè)單味藥荊芥和桂枝的加和，含量較高的主要成分或來自荊芥，如5-methyl-2-（1-methylethylidene）-Cyclohexanone，（2R-trans）-5-methyl-2-（1-methylethyl）-Cyclohexanone等；或來自桂枝，如3-（2-methoxyphenyl）-2-Propenal，Benzaldehyde等；或來自二者之疊加，如D-Limonene，Benzylidenemalonaldehyde等。這些主要成分在藥對(duì)中的含量與在單味藥中的不同。實(shí)驗(yàn)結(jié)果還表明，藥對(duì)荊芥-桂枝揮發(fā)油中還出現(xiàn)了多個(gè)單味藥中沒有的新的化學(xué)成分，如（E）-3,7-dimethyl-2,6-Octadien-1-olacetate，（S）-1-methyl-4-（5-methyl-1-methylene-4-hexenyl）-Cyclohexene，Octanal，3-phenyl-2-Propen-1-olacetate等，但它們的含量都較低。這些新化學(xué)成分的出現(xiàn)可能是由于合煎中的化學(xué)反應(yīng)和物理變化，如增溶作用、助溶作用等。由于這些物理作用，單味藥中的某些化學(xué)成分在配伍后溶出率將提高，因此，單味藥中含量很低而未能檢測到的揮發(fā)性成分，在藥對(duì)中含量提高而可被檢測。這些物理變化也會(huì)導(dǎo)致其它揮發(fā)性成分在藥對(duì)中的含量變化。
　　
　　每個(gè)單味藥含有特定的活性化合物群。兩個(gè)單味藥配伍形成藥對(duì)，在合煎過程中，由于化學(xué)反應(yīng)與物理變化，形成新的活性化合物群，它與單味藥的活性化合物群在量與質(zhì)方面均存在差別，從而導(dǎo)致藥效的不同。兩個(gè)單味藥在合煎過程發(fā)生什么物理變化與化學(xué)反應(yīng)，值得深入研究。
　　
　　表1荊芥、桂枝和藥對(duì)桂枝-荊芥的主要揮發(fā)油成分（略）
　　
　　rt為保留時(shí)間；rc為相對(duì)含量；-為未檢出