【摘要】［目的］測定夏枯草藥材中總皂苷的含量。［方法］甲醇超聲提取夏枯草樣品溶液，5％香草醛－冰醋酸顯色，分光光度法測定樣品中總皂苷含量。［結(jié)果］總皂苷在26.95～94.31μg范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，回收率在97.0％～100.5％之間；三批夏枯草樣品中總皂苷的含量在2.02%～2.56%之間。［結(jié)論］分光光度法測定夏枯草中總皂苷的含量，方法準(zhǔn)確可靠、操作簡便。
　　
　　【關(guān)鍵詞】夏枯草;總皂苷;分光光度法;含量測定
　　
　　夏枯草為唇形科植物夏枯草（BrunellaecumfructuL.）的干燥果穗，具有清火、明目、散結(jié)、消腫之功效，用于目赤腫痛，頭痛眩暈，瘰疬，乳癰腫痛，高血壓，急性黃疸型傳染性肝炎等病癥［1］。夏枯草含有齊墩果酸等三萜類成分、β�补如薮嫉如摅w類成分、木犀草素等黃酮類成分、香豆素、苯丙素、有機(jī)酸、揮發(fā)油等成分，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，其具有降壓、降糖、抗炎、免疫抑制、抗菌、抗病毒等作用［2］。本文采用紫外分光光度法測定夏枯草中總皂苷的含量，為夏枯草研究的進(jìn)一步完善及質(zhì)量控制提供實驗依據(jù)。
　　
　　1實驗材料
　　
　　1.1實驗儀器與試劑
　　
　　3300pro紫外�部梢姺止夤舛扔嫞�安瑪西亞中國有限公司；水浴鍋：上海；所用試劑均為分析純；對照品：齊墩果酸（1107092－200304，供含量測定用，中國藥品生物制品檢定所）；夏枯草藥材：取自本院藥房，產(chǎn)地浙江。
　　
　　2實驗方法與結(jié)果
　　
　　2.1對照品溶液的制備
　　
　　取齊墩果酸對照品適量，精密稱定，置于25ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液（每ml相當(dāng)于0.135mg齊墩果酸）。
　　
　　2.2供試品溶液的制備
　　
　　夏枯草藥材，粉碎，取藥材粉末約0.5g，稱定重量，置于50ml容量瓶中，加入甲醇50ml，稱重，超聲45min，取出，甲醇補足失重，過濾，取續(xù)濾液。
　　
　　2.3最大吸收波長的選擇
　　
　　取適量供試品和對照品溶液，分別置具塞試管中，揮干溶劑，加入5％香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴15min，取出置冰水浴冷卻后加入5ml冰醋酸，搖勻，在400～700nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明，樣品與對照品在550nm附近均有最大吸收峰，綜合考慮，選擇550nm作為測定波長。
　　
　　2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
　　
　　分別取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml置具塞試管中，揮干溶劑，精密加入5％香草醛－冰醋酸溶液0.2ml，高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴15分鐘，取出置冰水浴冷卻后加入5ml冰醋酸，搖勻，在550nm處測定吸光度。回歸方程為Y=0.008x-0.0146（r=0.9991），在26.95～94.31μg范圍內(nèi)總皂苷（以齊墩果酸計）與吸光度線性關(guān)系良好。
　　
　　2.5顯色穩(wěn)定性試驗
　　
　　取供試品溶液0.2ml置具塞試管中，揮干溶劑，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項的方法測定吸光度，連續(xù)測定2h，結(jié)果表明2h內(nèi)穩(wěn)定。
　　
　　2.6精密度試驗
　　
　　取同一供試品溶液0.2ml加入具塞試管中，揮干溶劑，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項的方法測定吸光度，連續(xù)測定6次，吸光度依次為0.395、0.395、0.394、0.394、0.394、0.395，表明儀器精密度良好（RSD=0.17％）。
　　
　　2.7重復(fù)性試驗
　　
　　分別取同一批夏枯草樣品五份，按“供試品溶液制備”項下方法制成供試液，取0.2ml置具塞試管中，揮干溶劑，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法測定吸光度，計算樣品中總皂苷的含量依次為2.59％、2.59％、2.50％、2.47％、2.49％，表明，重復(fù)性良好（RSD=2.28%）。
　　
　　2.8加樣回收率試驗
　　
　　取已知含量的同批樣品，分別添加一定量的齊墩果酸對照品，按“供試品溶液制備”項下方法制成供試液，取供試液溶液適量加入具塞試管中，揮干溶劑，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下方法測定吸光度，計算回收率，結(jié)果見表1，本實驗方法回收率在97.0～100.5％之間，符合回收率要求（95％～105％）。表1總皂苷加樣回收結(jié)果（略）
　　
　　回收率=（實測量�矘悠分械牧浚�/對照品加入量×100%
　　
　　2.9樣品中總皂苷含量測定
　　
　　取不同批次夏枯草藥材，按“供試品溶液制備”項下方法制成供試液，取0.2ml置具塞試管中，揮干溶劑，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項下的方法測定吸光度，計算樣品中總皂苷的含量，見表2。表2不同批夏枯草藥材中總皂苷含量測定結(jié)果（略）
　　
　　3討論
　　
　　夏枯草研究以藥理學(xué)研究居多，其藥學(xué)的研究主要以苯丙素、三萜類成分等的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定以及齊墩果酸和熊果酸、咖啡酸和迷迭香酸等成分等的含量測定為主；總類成分的研究較少，僅限于總黃酮及多糖的分離純化等工藝研究，而對另一類成分皂苷的研究則少之又少。夏枯草含有的以齊墩果酸和熊果酸為主的三萜皂苷類成分具有降壓［3］等藥理作用，這些成分含量的高低將直接影響夏枯草的生理活性。中藥的療效并不是單一成分引起的，可能是一組或是一群物質(zhì)共同引起的藥理作用。藥效指導(dǎo)下的部位分離是中藥新藥研發(fā)的一條有效途徑。本文建立了夏枯草中總皂苷的含量測定方法，為夏枯草有效部位的提取工藝研究及制劑的開發(fā)提供一個質(zhì)量控制手段。本文僅測定了本院藥房三批藥材中總皂苷的含量，三批藥材間皂苷的含量雖有差異但比較接近；不同產(chǎn)地夏枯草中總皂苷的含量及差異將在下一步實驗中進(jìn)行，以期為夏枯草藥材的產(chǎn)地選擇及質(zhì)量控制提供另一衡量標(biāo)準(zhǔn)。
　　
　　目前尚不能得到夏枯草皂苷的對照品，夏枯草中皂苷的苷元基本是齊墩果烷型，采用齊墩果酸作為標(biāo)準(zhǔn)對照品可行。