水飽和酚和Tris飽和酚( Phenoi Water/Tris-phenol)的區(qū)別:
一、水飽和酚又叫水平衡酚。水飽和酚的PH小于7,一般是PH為5.0左右,通常與異硫氫酸胍一起使用,用于細(xì)胞RNA的提取,在酸性環(huán)境中,DNA在酚相,RNA在水相。兩者就分開了。
二、Tris飽和酚一般PH大于7.8,用于DNA的提取。其中,酚是強(qiáng)的蛋白變性劑,可以使細(xì)胞或組織中的蛋白質(zhì)變性析出。而Tris的主要作用是防治止酚類氧化,若酚類氧化,則會形成醌(兩個苯環(huán)),醌含有強(qiáng)自由基,會破壞核酸結(jié)構(gòu)。同時,由于PH值大于7,在堿性環(huán)境中DNA處于水相,RNA處于有機(jī)相。從而分離上清,即可得到DNA。
Tris飽和酚的配置:
1、冰箱取出重蒸酚,室溫放置---68度水浴溶化,切勿立即放入68度的水浴中,以防玻璃炸裂
2、加8-羥基喹啉至0.1%和β-巰基乙醇至0.2%,(原液14. 4MOL/ML),混勻,溶液呈現(xiàn)黃色,倒入分液漏斗中(也可在燒杯中進(jìn)行)
3、加入等溶劑的1MOL/ML的Tris(PH8.0),反復(fù)混勻后,靜至分層;放出下層黃色酚液,棄上層
4、加固體Tris約1g/100ml酚,搖勻,去水相
5、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)平衡數(shù)次,至PH為8.0
6、加0.1MOL/MLTris(PH8.0)于棕色瓶中4度保存
7、如黃色消失或呈粉紅色(說明酚已經(jīng)被氧化),則不能使用
注:重蒸酚為白色針狀結(jié)晶體,有較強(qiáng)的腐蝕性,應(yīng)盡量避免皮膚接觸或吸入體內(nèi)。如發(fā)現(xiàn)變?yōu)榧t色或棕色,表明發(fā)生氧化,不能使用。保存要求:-20℃,避光保存。
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