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標(biāo)題Western Blot實驗所用到的基本試劑

   

提供者:上海宜騰生物科技有限公司    發(fā)布時間:2011/11/17   閱讀次數(shù):848次 >>進(jìn)入該公司展臺

1、 十二烷基硫酸鈉SDS溶液:10%(w/v)0.1gSDS1mlH2O去離子水配制,室溫保存。
2
、 丙烯酰胺N,N’-亞甲雙丙烯酰胺,應(yīng)以溫?zé)?span lang="EN-US">(
以利于溶解雙丙稀酰胺的去離子水配制含有29%(w/v)丙稀酰胺和1%(w/v)N,N’-亞甲雙丙烯酰胺儲存液丙稀酰胺29g,NN-亞甲叉雙丙稀酰胺1g,加H2O100ml儲于棕色瓶,4℃避光保存。嚴(yán)格核實PH不得超過7.0,因可以發(fā)生脫氨基反應(yīng)是光催化或堿催化的。使用期不得超過兩個月,隔幾個月須重新配制。如有沉淀,可以過濾。
3
、 濃縮膠緩沖液:0.5mmol/LTris-HCL(pH6.8):6.05gTris溶于40mlH2O中,用約48ml 1mol/L HCL調(diào)至pH6.8加水稀釋到100ml終體積。過濾后40C保存。這兩種緩沖液必須使用Tris堿制備,再用HCL調(diào)節(jié)PH值,而不用 Tris.CL。
4
、 分離膠緩沖液:1.5mmol/LTris-HCL(pH8.8):18.15gTris48ml1mol/LHCL混合,加水稀釋到100ml終體積。過濾后40C保存。
5
、 SDS- PAGE加樣緩沖液:pH6.8 0.5mol/L Tris緩沖液8ml,甘油6.4ml,10%SDS 12.8ml,巰基乙醇3.2ml0.05%溴酚藍(lán)1.6ml,H2O 32ml混勻備用。按1:11:2比例與蛋白質(zhì)樣品混合,在沸水終煮3min混勻后再上樣,一般為20-25ul,總蛋白量100μg
6
、 TEMED原溶液N,NN’N’四甲基乙二胺催化過硫酸銨形成自由基而加速兩種丙稀酰胺的聚合。PH太低時,聚合反應(yīng)受到抑制。10%(w/v)過硫酸胺溶液。提供兩種丙稀酰胺聚合所必須的自由基。去離子水配制數(shù)ml,臨用前配制.
7
、 轉(zhuǎn)移緩沖液:配制1L轉(zhuǎn)移緩沖液,需稱取2.9g甘氨酸、5.8gTris堿、0.37g SDS,并加入200ml甲醇,加水至總量1L。

8
、 Tris-甘氨酸電泳緩沖液:30.3gTris,188g甘氨酸,10gSDS,用蒸餾水溶解至1000ml,得0.25mol/L Tris-1.92mol/L甘氨酸電極緩沖液。臨用前稀釋10倍。
9
、 脫脂奶粉5%(w/v)。
10
、 麗春紅染液儲存液:麗春紅S 2g 三氯乙酸30g 磺基水楊酸 30g 加水至100ml 用時上述儲存液稀釋成10倍即成麗春紅S使用液。使用后應(yīng)予以廢棄。
11
、 Tris緩沖鹽溶液(TBS):20mmol/LTris/HCL(pH7.5),500mmol/LnaCl。
12
、 NaN3 0.02% 疊氮鈉有毒,戴手套操作,溶于磷酸緩沖鹽溶液(PBS)
13
、 過氧化物酶標(biāo)記的第二抗體。
14
Tween20(15)鼠抗人-MMP-9(16)鼠抗人-TIMP-1。
15
BCIP(溶于100%二甲基甲酰胺,50mg/ml)。
16
NBT(溶于70%二甲基甲酰胺,75mg/ml)
17
、 100mmol/L NaCl
18
、 100mmol/LTris-HCL(pH9.5)。
19
、 50mmol/LTris-HCL(pH7.5)5mmol/L EDTA。
 

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