用色譜分析法建立獸藥殘留分析方法的基本方法：

摘 要 ： 從分析獸藥殘留的現(xiàn)狀引出色譜分析應(yīng)用的
普遍性 ， 著重介紹 了以色譜分析法建立獸藥殘留分析方法
的基本步驟 ， 供從事獸藥殘留分析的色譜工作者參考。 
關(guān)鍵詞 ： 獸藥殘留； 高效液相色譜法 ： 色譜法
近 2 0年來(lái) ， 獸藥（ 包括藥物添加劑 ） 在畜牧
業(yè) 中的應(yīng)用 日益廣泛 ， 但是獸藥 的使用無(wú)疑會(huì)導(dǎo)
致動(dòng)物體 內(nèi)藥物的滯留或蓄積， 并以殘留的方式
進(jìn)入人體及生態(tài)系統(tǒng)。獸藥殘留對(duì)人類及環(huán)境的
危害主要是慢性 、 遠(yuǎn)期和累積性 的， 如致癌、 發(fā)育
毒性、 體內(nèi)蓄積 、 免疫抑制 、 致敏和誘導(dǎo)耐藥菌株
等。動(dòng)物性食品中的獸藥殘留已成為公認(rèn)的農(nóng)業(yè)
和環(huán)境問(wèn)題 ， 因此對(duì)殘留的監(jiān)測(cè)與控制 已經(jīng)是 目 
前 國(guó)內(nèi)外獸藥研究 、 開發(fā) 、 使用和管理中的重要
內(nèi)容。 
隨著獸醫(yī)學(xué)和獸藥科學(xué)的迅速發(fā)展 ， 經(jīng)過(guò)十
幾年的積累 ， 基于分析化學(xué) 、 藥物化學(xué) 、 臨床藥理
與毒理學(xué) 以及管理科學(xué)之上的獸藥殘 留分析 已
成為一門新興學(xué)科， 其中心任務(wù)是為動(dòng)物和動(dòng)物
性食品中的獸藥殘留監(jiān)控提供分析手段 ． 內(nèi)容包
括食 品殘留（ 藥物原形及代謝產(chǎn)物） 的含量測(cè)定
與結(jié)構(gòu)鑒定 （ 靜態(tài)殘留分析 ） 以及組織分布與代
謝（ 動(dòng)態(tài)殘留分析） 。殘留分析不僅是獸藥殘留研
究和監(jiān)控的重要基礎(chǔ) ， 而且是獸藥代謝 、 臨床藥
理和生物藥劑學(xué)等獸藥理論及應(yīng)用研究 的必要
手段。與藥品分析不同， 殘留分析的特殊性和復(fù)
雜性在于痕量 、 動(dòng)態(tài)的待測(cè)物存在于復(fù)雜的生物
樣品中，在于將分析手段與獸藥的理化性質(zhì)、 體
內(nèi)過(guò)程 、 存在狀態(tài)以及藥理毒理相結(jié)合 ， 在于樣
品基質(zhì)和待測(cè)組分的不確定性 ， 所以分離和檢測(cè)
是殘留分析的兩個(gè)基本方面， 高分辨率和高靈敏
度是其發(fā)展的兩大精髓 �，F(xiàn)代色譜和光譜技術(shù) ． 
特別是 2 0世紀(jì) 8 0年代 以來(lái)高效液相色譜 、 毛細(xì)
管區(qū)域 電泳 、 質(zhì)譜 、 免疫分析及聯(lián)用技術(shù)在殘留
分析方面的研究與應(yīng)用取得 了長(zhǎng)足進(jìn)展， 利用這
些技術(shù)可以測(cè)定 p p b （ 1 0 _ 9 ） ～ p p t （ 1 0 — 2 ） 水平的殘留 
組分。人們?cè)谂�力改進(jìn)殘留分析效能的同時(shí)更注
重提高分析效率 、降低分析成本和減少環(huán)境污
染。 
色譜法是近代分析化學(xué)中發(fā)展最快 、 應(yīng)用最
廣的分離分析技術(shù) ， 在化學(xué) 、 生物學(xué)等領(lǐng)域發(fā)揮
著越來(lái)越重要的作用 ， 并正發(fā)展成為一門新興學(xué)
科�，F(xiàn)代色譜分析將分離和連續(xù)測(cè)定結(jié)合。 也可
以濃縮 、 分離 、 測(cè)定聯(lián)用 ， 對(duì)復(fù)雜體系中組分、 價(jià)
態(tài)、 化學(xué)性質(zhì)相近的元素和化合物進(jìn)行分析 。色
譜分析仍是殘留分析技術(shù)發(fā)展的主流。下面以色
譜分析法為例說(shuō)明殘留分析方法建立的基本步
驟
1 文獻(xiàn)檢索
殘留分析過(guò)程十分復(fù)雜 ，所用的操作方法 、 
試劑和儀器較多，方法設(shè)計(jì)帶有較多經(jīng)驗(yàn)成分 。 
所 以無(wú)論是移植 、 改進(jìn)或設(shè)計(jì)新的分析方法都具
有較高難度。殘留分析中極少存在可供直接移植
使用的“ 標(biāo)準(zhǔn)方法” 。文獻(xiàn)檢索通常僅能顯示最適
宜 的分析方法 ， 并提供樣品處理 、 分離和檢測(cè)方
面的粗略信息。通過(guò)查閱文獻(xiàn)可以對(duì)以往分析方
法進(jìn)行比較和借鑒 ， 了解與方法設(shè)計(jì)相關(guān) 的背景
資料。這些工作對(duì)于研究者根據(jù)具體的試驗(yàn)條件
調(diào)整 、 改進(jìn)或新建立符合要求的分析方法都十分
重要 。設(shè)計(jì)全新的分析方法時(shí) ， 如針對(duì)新對(duì)象或
采用新技術(shù)， 可以從較早發(fā)表的化學(xué)合成文獻(xiàn)得
到待測(cè)物理化性質(zhì)或分離方面的原始資料。 或從
具有相近結(jié)構(gòu)或官能團(tuán)化合物 的分析方法 中獲
得某些信息或啟示。 
通過(guò)查 閱文獻(xiàn) ， 除掌握有關(guān)分析方法研究與
應(yīng)用的動(dòng)態(tài)和存在的問(wèn)題之外 ． 還需要 了解 以下
內(nèi)容 ： 待測(cè)物的理化性質(zhì) ， 如極性 、 溶解性 、 酸堿 
性 、 穩(wěn)定性 、 熔點(diǎn)或蒸汽壓 、 波譜學(xué)性質(zhì)等 ； 體 內(nèi)
代謝過(guò)程 ， 包括代謝產(chǎn)物 、 組織分布 、 排泄途徑和
藥動(dòng)學(xué)性質(zhì)（ 生物利用度 、 t i t 2   V   、 蛋 白結(jié)合率 ） ； 藥
理毒理學(xué) ， 如殘留毒性 、 MP 【 J s 、 WT D等。 
2 建立測(cè) 定方法
首先建立測(cè)定方法和線性范圍． 為各種后續(xù)
工作提供分析手段 ． 最后根據(jù)干擾和使用情況逐
步確立測(cè)定條件和建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。 
多數(shù)獸藥及其代謝產(chǎn)物屬 中等極性或較高
極性化合物 ， 不能直接進(jìn)行 GC（ 氣相色譜） 分離 ， 
HP L C是首選的測(cè)定方法 ．目前比較成熟和常用
的檢測(cè)器 有紫外檢測(cè)器 （ UV D） 、熒 光檢測(cè)器
（ F L D） 和電化學(xué)檢測(cè)器（ E C H D） ， 要求待測(cè)組分具
有紫外／ 可見(jiàn)或熒光發(fā)色團(tuán)（ 共軛雙鍵結(jié)構(gòu)） ， 或電
化學(xué)活性基團(tuán)。對(duì)絕大多數(shù)獸藥而言， 反相（ R P） 
HP L C是標(biāo)準(zhǔn)的分離方法 ， 操作方便 ， 易獲得尖銳
的峰形和 良好分離。根據(jù)待測(cè)物 的極性或酸堿
性 ， 通過(guò)優(yōu)化流動(dòng)相的有機(jī)溶劑比例、 p H、 離子強(qiáng)
度 、 離子對(duì)試劑和柱溫達(dá)到分離 目的。必要時(shí)可
以改變反相色譜柱的類型， 如 C  C   、 交聯(lián)聚苯乙
烯等。 
G C有許多靈敏的選擇性和通用檢測(cè)器供選
擇， 如氫火焰離子化檢測(cè)器 （ F I D） 、 電子俘獲檢測(cè)
器（ EC D） 、 氮磷檢測(cè)器 （ N P D） 、 火焰光 度檢測(cè)器
（ F P D） 和液相層析質(zhì)譜儀（ MS ） ， 但大部分獸藥需
經(jīng)過(guò)衍生化使極性降低后才能進(jìn)行分析。 
3 建立樣 品處理方 法
一
般采用純水作為樣品基質(zhì)進(jìn)行預(yù)試 ， 目的
是了解液一 液萃�。� UJ E） 或 固相萃�。� S P E） 條件 、 
試劑干擾和回收率情況． 然后再依次用空白樣品
和標(biāo)準(zhǔn)品添加樣品進(jìn)行研究。 
提取與凈化方法的選擇決定于待測(cè)物 的理
化性質(zhì) 、 樣品基質(zhì)的性質(zhì)（ 水分、 蛋白質(zhì)和脂肪含
量） 、 是否需要衍生化以及測(cè)定方法。無(wú)論最終用
何種提取或凈化方法 ， 一般均包含專門或兼有的
脫蛋 白質(zhì) 、 脫脂肪和脫水步驟 ． 這些常見(jiàn)的基質(zhì)
成分會(huì)干擾分析過(guò)程 、 污染色譜柱和檢測(cè)器。 
HP L C測(cè)定中，溶解樣品所用溶劑要與流動(dòng)
相互溶 ， 最好與流動(dòng)相接近， 以免干擾色譜平衡 ， 
圉
導(dǎo)致色譜峰變形或保留值改變。當(dāng) RP — HP L C流
動(dòng)相中水的含量高于 3 0 ％時(shí) ， 用純甲醇和乙腈制
備的終樣品溶液進(jìn)樣會(huì)嚴(yán)重影響分離和峰形。 
4 標(biāo) 準(zhǔn) 曲線
測(cè)定條件確定后 ， 即可配制系列濃度的標(biāo)準(zhǔn)
液制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。至少設(shè) 4個(gè)濃度 ， 每個(gè)濃度水
平設(shè) 3次重復(fù)。制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的濃度須涵蓋樣品
可能的濃度范圍． 不進(jìn)行外推計(jì)算�？梢圆捎猛�
標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法定量。殘留樣品濃度波動(dòng)范圍和測(cè)
定誤差較大 ． 宜采用標(biāo)準(zhǔn)曲線或回歸方程計(jì)算含
量。在使用過(guò)程中需每 日對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行校正。 
5 穩(wěn)定性試驗(yàn)
一
般包括標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣 品在貯存條件下的
穩(wěn)定性試驗(yàn) ， 如室溫 、 冷凍和反復(fù)冷凍一解凍條
件下的穩(wěn)定性。 
6 分析方 法評(píng) 價(jià)
為保證分析結(jié)果 的質(zhì)量 ， 任何一種分析方法
根據(jù)分析對(duì)象和要求都必須滿足一定的效能指
標(biāo) ， 如準(zhǔn)確度 、 精密度 、 靈敏度等。根據(jù)這些指標(biāo)
可以對(duì)分析方法的設(shè)計(jì)進(jìn)行質(zhì)量控制和評(píng)價(jià) ． 也
便于不同分析方法間進(jìn)行 比較。 
這項(xiàng)試驗(yàn)一般采用標(biāo)準(zhǔn)添加樣品進(jìn)行 ． 是研
究建立新分析方法的重要組成部分和試驗(yàn)依據(jù)。 
一
般至少設(shè)立 3個(gè)濃度（ 1 0 、 1 、 0 ． 1 MR L） ， 每個(gè)濃
度水平設(shè) 4次重復(fù) ． 經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理后可以同時(shí)獲得
各種效能指標(biāo)。 
7 分析方法報(bào)告
分析方法報(bào)告主要包括以下內(nèi)容 ： 
7 ． 1概述 對(duì)象的分析方法發(fā)展現(xiàn)狀及存在
的問(wèn)題 。 
7 ． 2 操作方法 穩(wěn)定性試驗(yàn)方法 ， 提取方法 ， 
凈化方法， 測(cè)定方法（ 分離方法 、 檢測(cè)方法） 。 
7 ． 3 方法評(píng)價(jià) 標(biāo)準(zhǔn)曲線 ，回收率 ，變異系
數(shù) ， 檢測(cè)限， 定量限， 選擇性 。 
7 ． 4 應(yīng)用
7 ． 5 附件 標(biāo)準(zhǔn)品 、 空 白樣品、 添加樣品和實(shí)
測(cè)樣品的色譜圖， 參考文獻(xiàn)。 
摘  要 ：通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)外飼料加工工藝現(xiàn)狀的研究 ， 提
出“ 先配后粉” 工藝在我國(guó)實(shí)施的可行性 ； 和膨化和制粒技
術(shù)在我國(guó)運(yùn)用的必要性， 并探討了飼料加工 自動(dòng)化的發(fā)展
趨 勢(shì) 。 
關(guān)鍵詞 ： 后 粉 工藝 ； 后 置添加 ：自動(dòng) 化
改革開放 2 0年來(lái) ，我 國(guó)飼料工業(yè) 已建立較
為完善的飼料工業(yè)體系 ， 作為飼料工業(yè)發(fā)展 的硬
件——飼料機(jī)電工業(yè) ， 在經(jīng)過(guò)“ 七· 五” 、 “ 八 · 五” 、 
“ 九 · 五” 飼料科技攻關(guān) ， 飼料機(jī)械的設(shè)計(jì)制造水
平顯著提高 ， 部分設(shè)備的工藝技術(shù)性能已接近國(guó)
際先進(jìn)水平 ，基本滿足生產(chǎn)各種飼料產(chǎn) 品的需
要 ， 為我國(guó)飼料工業(yè)上質(zhì)量 、 上水平 、 上規(guī)模 、 上
效益打下了良好的基礎(chǔ)。我們應(yīng)抓住機(jī)遇 ， 借鑒
國(guó)外先進(jìn)的技術(shù)和管理經(jīng)驗(yàn) ．依照企業(yè) 自身實(shí)
力 ， 開發(fā)應(yīng)用新工藝、 新設(shè)備和新技術(shù)。 
1 國(guó)內(nèi)外粉碎與配料工藝的現(xiàn)狀
根據(jù)粉碎與配料先后關(guān)系的不同， 飼料加工
工藝可分為“ 先粉碎后配料” 和“ 先配料后粉碎” 
兩大工藝。前者以北美和亞洲一些國(guó)家為代表 ， 
后者多為西歐國(guó)家的飼料廠所采用 。目前 ， 國(guó)內(nèi)
外飼料機(jī)械公司都在尋求兩者最佳結(jié)合點(diǎn)， 相互
彌補(bǔ)缺陷， 從而使工藝流程更加合理。在國(guó)外， 這
種“ 混合式” 的工序已經(jīng)實(shí)施 ， 但沒(méi)有達(dá)到最佳 的
效果。在國(guó)內(nèi)， 也有人曾提出“ 粉碎一 配料一 粉碎” 
的工藝 ， 但因其產(chǎn)量低、 適應(yīng)性不強(qiáng) ， 仍需進(jìn)一步
探索。 
我國(guó)飼料廠大都采用“ 先粉碎后配料” 工藝 ， 
原 因在于該工藝對(duì)技術(shù)和設(shè)備及控制元件質(zhì)量
要求不高 ， 同時(shí)， 可節(jié)約能耗， 縮短生產(chǎn)過(guò)程 。隨
著飼料配方采用原料品種增多 ， 工廠添置費(fèi)用的
提高 ， 研究“ 先配料后粉碎” 在我國(guó)的適應(yīng)性很有
必要 ． 或者將兩種工藝結(jié)合起來(lái) ， 探索更佳的“ 混
合型” 工藝。 
1 ． 1后粉（ 先配料后粉碎） 工藝
1 ． 1 ． 1后粉工藝的優(yōu)缺點(diǎn)
后粉工藝的優(yōu)點(diǎn)為 ： 料倉(cāng)少 ， 倉(cāng)中物料不易
結(jié)拱 。 原料立筒庫(kù)可以作為配料倉(cāng) ； 生產(chǎn)過(guò)程更
換配方較容易 ， 受原料的影響較小 ； 原料變化對(duì)
粉碎機(jī)影響小 ， 針對(duì)不同混合料 ， 粉碎機(jī)有時(shí)利
用效率高； 具有初步混合作用 ， 顆粒質(zhì)量好 ， 粒度
均勻． 有利于混合均勻度和制粒效果的提高。 
后粉工藝的缺點(diǎn)為 ： 由于此工藝的粉碎間隔
周期性進(jìn)行 ， 因而粉碎機(jī)工作負(fù)荷不平穩(wěn) ； 配料
與粉碎兩工序生產(chǎn)能力匹配性較高， 工序之間制
約性強(qiáng) ， 因而要求 自動(dòng)化控制水平較高； 裝機(jī)容
高效液相色譜儀