故障 | 可能原因 | 解決方法 |
(一) 保留時(shí)間變化 | 1 柱溫變化 | 柱恒溫,必要時(shí)需配置恒溫箱 |
2 等度與梯度間未能充分平衡 | 至少用10倍柱體積的流動(dòng)相平衡柱 |
3 緩沖液容量不夠 | 用>25mmol/L的緩沖液 |
4 柱污染 | 每天沖洗柱 |
5 柱內(nèi)條件變化 | 穩(wěn)定進(jìn)樣條件,調(diào)節(jié)流動(dòng)相 |
6 柱快達(dá)到壽命 | 采用保護(hù)柱 |
(二) 保留時(shí)間縮短 | 1 流速增加 | 檢查泵,重新設(shè)定流速 |
2 樣品超載 | 降低樣品量 |
3 鍵合相流失 | 流動(dòng)相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向 |
4 流動(dòng)相組成變化 | 防止流動(dòng)相蒸發(fā)或沉淀 |
5 溫度增加 | 柱恒溫 |
(三) 保留時(shí)間延長(zhǎng) | 1 流速下降 | 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內(nèi)氣泡 |
2 硅膠柱上活性點(diǎn)變化 | 用流動(dòng)相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱 |
3 鍵合相流失 | 同前(二)3 |
4 流動(dòng)相組成變化 | 同前(二)4 |
5 溫度降低 | 同前(二)5 |
(四) 出現(xiàn)肩峰或分叉 | 1 樣品體積過大 | 用流動(dòng)相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% |
2 樣品溶劑過強(qiáng) | 采用較弱的樣品溶劑 |
3 柱塌陷或形成短路通道 | 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件 |
4 柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效 | 更換燒結(jié)不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 |
5 進(jìn)樣器損壞 | 更換進(jìn)樣器轉(zhuǎn)子 |
(五) 鬼峰 | 1.進(jìn)樣閥殘余峰 | 每次用后用強(qiáng)溶劑清洗閥,改進(jìn)閥和樣品的清洗 |
2.樣品中未知物 | 處理樣品 |
3.柱未平衡 | 重新平衡柱,用流動(dòng)相作樣品溶劑 (尤其是離子對(duì)色譜) |
4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽譜) | 每天新配,用抗氧化劑 |
5.水污染(反相) | 通過變化平衡時(shí)間檢查水質(zhì)量,用HPLC級(jí)的水 |
(六) 基線噪聲 | 1 氣泡(尖銳峰) | 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓 |
2 污染(隨機(jī)噪聲) | 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級(jí)試劑 |
3 檢測(cè)器燈連續(xù)噪聲 | 更換氘燈 |
4 電干擾(偶然噪聲) | 采用穩(wěn)壓電源,檢查干擾的來源(如水浴等) |
5 檢測(cè)器中有氣泡 | 流動(dòng)相脫氣,加柱后背壓 |
(七) 峰拖尾 | 1 柱超載 | 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相 |
2 峰干擾 | 清潔樣品,調(diào)整流動(dòng)相 |
3 硅羥基作用 | 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度,降低流動(dòng)相PH值,鈍化樣品 |
4 同前(四)4 | 同前(四)4 |
5 同前(四)3 | 同前(四)3 |
6 死體積或柱外體積過大 | 連接點(diǎn)降至最低,對(duì)所有連接點(diǎn)作合適調(diào)整,盡可能采用細(xì)內(nèi)徑的連接管 |
7 柱效下降 | 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護(hù)柱 |
(八) 峰展寬 | 1 進(jìn)樣體積過大 | 同(四)1 |
2 在進(jìn)樣閥中造成峰擴(kuò)展 | 進(jìn)樣前后排出氣泡以降低擴(kuò)散 |
3 數(shù)據(jù)系統(tǒng)采樣速率太慢 | 設(shè)定速率應(yīng)使每峰大于10點(diǎn) |
4 檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)過大 | 設(shè)定時(shí)間常數(shù)為感興趣第一峰半寬的10% |
5 流動(dòng)相粘度過高 | 增加柱溫,采用低粘度流動(dòng)相 |
6 檢測(cè)池體積過大 | 用小體積池,卸下熱交換器 |
7 保留時(shí)間過長(zhǎng) | 等度洗脫時(shí)增加溶劑含量也可用梯度洗脫 |
8 柱外體積過大 | 將連接管徑和連接管長(zhǎng)度降至最小 |
9 樣品過載 | 進(jìn)小濃度小體積樣品 |