色譜常見問題問答 問：用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化，原因何在如何解決 答：關于漂移問題：�� 1、溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定 2、流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應等 3、柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡 關于快速變化問題�� 1、流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩(wěn)定 2、泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。 3、流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進行適當混合 問：色質(zhì)聯(lián)用中毛細柱的選擇應注意什么問題 答：1、柱效要高 2、熱穩(wěn)定性好 3、化學惰性強 具體選擇應注意： 1、柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進行分析 2、柱子內(nèi)徑。內(nèi)徑大小決定柱容量 3、液膜厚度。分析樣品溫度一不一樣，對膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄 4、柱長度。柱越長，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問題，柱子過長，分析時間長，因此要根據(jù)樣品考慮柱子長度 5、外涂層(柱體)的選擇 6、另外還有儀器型號、分析對象等因素 問：液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么 答：1、篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。 2、存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子 問：從那些方面可以簡單判別毛細管柱子的熱穩(wěn)定性好壞 答：1、分配容量(或容量因子)K，好的柱子在高溫運行后，分配容量K不應有明顯的下降，否則，說明柱子的熱穩(wěn)定性不好。 2、理論塔板數(shù)n，熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后，理論塔板數(shù)應基本保持恒定 3、柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒有大的變化。 4、噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加. 5、柱子的去活層，毛細管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細管柱子高溫后，去活層不應該變化，表現(xiàn)在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。 問：為什么進樣器內(nèi)的玻璃襯套會對色譜行為造成影響 答：進樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用： 1、提供一個溫度均勻的汽化室，防止局部過熱。 2、玻璃的惰性不如不銹鋼好，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。 3、易于拆換清洗 ，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發(fā)性組分會逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會慢慢分解，使基流增加，噪聲增大，通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響。 4、可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個進樣加熱塊。從以上幾個方面可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因。 問：毛細管色譜分流進樣時，非線性分流的主要原因是什么 答：1、進樣器溫度太低，樣品汽化不，發(fā)生分級分流。 2、進樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進樣器內(nèi)表面上。 3、在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分。 4、系統(tǒng)的進樣墊，柱接頭等地方漏氣。 問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法 答：1、樣品量不足：解決辦法為增加樣品量 2、樣品未從柱子中流出：可根據(jù)樣品的化學性質(zhì)改變流動相或柱子 3、樣品與檢測器不匹配：根據(jù)樣品化學性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器 4、檢測器衰減太多：調(diào)整衰減即可。 5、檢測器時間常數(shù)太大：解決辦法為降低時間參數(shù) 6、檢測器池窗污染：解決辦法為清洗池窗。 7、檢測池中有氣泡：解決辦法為排氣。 8、記錄儀測壓范圍不當：調(diào)整電壓范圍即可。 9、流動相流量不合適：調(diào)整流速即可。 10、檢測器與記錄儀超出校正曲線：解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。 問：做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在如何解決 答：原因可能有：�� 1、泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進行脫氣處理； 2、比例閥失效，更換比例閥即可。 3、泵密封墊損壞，更換密封墊即可。 4、溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法； 5、系統(tǒng)檢漏，找出漏點，密封即可。 6、梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。 問：做PGS／MS分析時，如何防止焦油狀污染物進入毛細柱 答：聚合物，尤其是一些含氮、硫及鹵素的高分子裂解時，常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生。為防止這種焦油狀物質(zhì)進入毛細柱造成污染而使柱性能下降，可采用保護預柱，即在裂解器與毛細柱之間接一填充預柱，通過控制預柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預柱內(nèi)，預注可置于GC氣化室內(nèi)，這樣既容易控制溫度，又減少系統(tǒng)的死體積，當然，預柱填料需經(jīng)常更換。 問：我最近更換了另一種牌號的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時間不能重現(xiàn)，為什么 答：這是因為被分析物可能具有形成氫健的能力。盡管過去幾年來，填料的制造技術有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物，如三乙基胺(TEA)，將會使硅醇基的成鍵能力飽和，從而不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現(xiàn)性。 問：我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高，請問為什么 答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。 1、拆去保護柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查； 2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查。 3、將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，(此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動性)。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查； 4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne 7315型過濾器就是解決這一問題的選擇。 問：高溫毛細柱的使用壽命一般為多長 答：毛細柱壽命除決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況，比如使用溫度、樣品狀態(tài)，進樣量等，如果在其使用溫度范圍內(nèi)，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2—3年之間。 問：如毛細管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢復是否可通過老化來解決 答：根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來解決，如果污染不嚴重，污染物沸點不是太高，可通過老化來解決，但老化溫度不可超過柱子的使用溫度，且一般要較長時間(8—30小時)，如果污染較嚴重，或通過老化仍不能使柱性能恢復，那就必須采用溶劑清洗，通常是用5倍柱容積的溶劑(如正戊烷，二氯甲烷等)通過色譜柱。 當然，清洗溶劑用的越多，對柱性能的損壞越大，清洗完后，在通載氣老化一定時間，如果柱性能恢復，便可繼續(xù)使用。 必須指出：只有交聯(lián)柱才能清洗，對于非交聯(lián)柱，清洗柱會失效，因為固定液被洗掉了，至于清洗用溶劑的選擇，可參考說明書。