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利用小鼠或大鼠具有趨暗避明的習(xí)性設(shè)計的裝置,一半是暗室,一半是明室,中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵。動物進入暗室即受到電擊。本實驗簡單易行,反應(yīng)箱越多,同時訓(xùn)練的動物越多。以潛伏期為指標(biāo),動物的差異性比較小。對記憶過程特別是記憶再現(xiàn)有較高的敏感度。
1、采用視頻攝像跟蹤技術(shù),實現(xiàn)了實驗過程的自動化,避免了人工計數(shù)引入的主觀誤差和對實驗動物 的干擾,增加了實驗結(jié)果的真實性和可靠性
2、軟件系統(tǒng)功能強大,指標(biāo)參數(shù)豐富
3、標(biāo)準(zhǔn)化工業(yè)設(shè)計,硬件堅固耐用
4、先的核心算法,有效保證識別的抗干擾性和準(zhǔn)確性
5、用戶可設(shè)置彼此獨立的實驗數(shù)據(jù)存檔文件夾, 便于實驗資料管理
6、可定時錄制視頻圖象,以多種方式顯示指標(biāo),提供軌跡圖、軌跡坐標(biāo)點和指標(biāo)結(jié)果的導(dǎo)出功能
7、視頻文件格式支持AVI壓縮格式,壓縮比率高,能夠有效減少存儲空間,并有利于進行長時間的實驗觀察
8、可順利接入面向科研和計算機輔助教學(xué)(CAI),能夠記錄原始的視頻圖像, 并提供完整的實驗數(shù)據(jù)庫功能,作為研究的真實記錄和后進行教學(xué)演示的素材
1、硬件系統(tǒng)采用嵌入式單片機為主要控制核心,實驗恒流、恒壓刺激。
2、電壓及電流值采用軟件直接設(shè)置。
3、每個電上都具有峰值可調(diào)的方波信號。
4、各電都采用循環(huán)移位脈動刺激方式,使動物承受的電流為恒定值,與傳統(tǒng)的固定電刺激相比,避免了因動物站立在相同電上而不能刺激的缺點。
5、本刺激系統(tǒng)適合不同大小的動物。
1、大鼠活動箱外部尺寸:685× 380× 440mm,框架采用鋁合金,黑白箱活動區(qū)域尺寸:290× 290× 360mm
2、小鼠活動箱外部尺寸:425× 250× 300mm,框架采用鋁合金,黑白箱活動區(qū)域尺寸:160× 160× 195mm
3、輸入電壓:AC220V
4、電柵限流調(diào)整范圍:0.04~3.5mA
5、調(diào)整步長:0.02mA,電流誤差小于0.04mA
6、電柵電壓調(diào)整范圍:30~120V(方波峰值),調(diào)整步長1V
7、各電柵上的方波刺激頻率:96Hz,誤差1%
8、攝像機品牌:SONY槍式攝像機
9、色彩:黑白或彩色
10、低照度:<0.005Lux
11、視頻采集卡:USB2.0外置式
12、攝像針頻速率:28/30貞1200X
13、攝像分辨率:1280×1024
14、攝像機電源:12V 5A
15、攝像機類型:2.8~4mm
16、加密狗類型:USB2.0接口
17、信號傳輸方式:信號電源一體線5米
18、視頻采集模塊:USB采集卡
19、數(shù)據(jù)指標(biāo):潛伏期、錯誤次數(shù)、明箱活動時間、暗箱活動時間、穿梭次數(shù)、明箱活動路程、暗箱活動路程
20、隔音箱:選配
序號 | 名稱 | 數(shù)量 |
1 | 避暗箱體 | 1個 |
2 | 刺激電器 | 1臺 |
3 | 攝像機 | 2個 |
4 | 畫面分割器 | 1個 |
5 | 數(shù)據(jù)線及攝像機電源線 | 2根 |
6 | 接糞盒 | 1個 |
7 | USB視頻采集卡 | 1塊 |
8 | USB數(shù)據(jù)加密狗 | 1個 |
9 | 分析系統(tǒng)安裝盤及說明書 | 1本 |
實驗器材:
小白鼠常用手術(shù)器械、亞硝酸鈉、東莨菪堿(scopolamine,Scop.)、生理鹽水、35 %酒精。
實驗步驟:
1、實驗儀器小動物學(xué)習(xí)記憶行為檢測技術(shù)--避暗法
小鼠避暗自動測試儀由控制器和活動箱兩部分組成,可同時對6只小鼠進行實驗。明暗實驗箱之間有一小門供動物進出,當(dāng)動物進入暗室被電擊時,它可自動記錄小鼠第一次從明室進入暗室的潛伏期和受到電擊的次數(shù),還可通過按鍵靈活地選擇刺激電壓和設(shè)置實驗時間。
2、實驗程序:
2.1適應(yīng):將動物頭朝室壁放入明室,兩室之間的門洞敞開,讓動物在兩室內(nèi)自由活動2-3分鐘,取出后放回飼養(yǎng)籠。
2.2訓(xùn)練:第二天,
將動物放入明室, 它很快鉆入暗室, 連接兩室的門洞關(guān)閉,同時啟動電刺激器, 動物足部受電擊。如果動物在第一次訓(xùn)練時超過100不進暗室, 淘汰之或用手把它輕輕趕進暗室。
記錄指標(biāo):
(1)記錄動物自明室進入暗室的潛伏期,可作為判斷給藥后動物行為是否有變的一個指標(biāo)。若藥物致使動物鎮(zhèn)靜,則潛伏期顯著長于對照組。
(2)記錄動物受到電擊后的反應(yīng),如劇烈嘶叫并跳躍,評為A反應(yīng);微弱尖叫,評為B反應(yīng);不叫,評為C反應(yīng)。受到電擊后動物一般均跳躍。C反應(yīng)常伴動物跳躍,動物雖不尖叫,但正常動物均能感受電擊疼痛,顯示好的記憶成績。C反應(yīng)多見于雄性動物。A反應(yīng)多見于雌性動物。該記錄可作為動物痛域是否變化的一個輔助觀察指標(biāo)。
2.3重測試:訓(xùn)練后24小時(第三天),再次將動物放入明室,進行重測試。
記錄指標(biāo):
(1)記錄動物進入暗室的潛伏期,為步入潛伏期(step through latency, STL)。大潛伏期設(shè)為300。
(2)記錄動物300內(nèi)進入暗室的錯誤次數(shù),包括:第一次錯誤、進入暗室的次數(shù)。
實驗設(shè)計舉例:
按照信息論將記憶簡單劃分為:記憶的獲得(也即學(xué)習(xí)過程、信息的獲得過程)、記憶的鞏固(信息的保持過程)、記憶的再現(xiàn)(信息的提取過程)時,我們可依此來篩選作用于記憶不同階段的認(rèn)知藥物。
在訓(xùn)練、后或重測給損傷動物記憶的藥物,可分別觀察該藥物對記憶不同階段的影響,在此之給動物待檢測認(rèn)知藥物,即可依據(jù)實驗結(jié)果判斷該認(rèn)知藥物對抗損傷藥物的效果。為簡化篩選工作,常選用實驗步驟較少的小動物學(xué)習(xí)記憶測試方法,現(xiàn)以步入法為例說明如下。
一、記憶獲得過程
1、建立記憶獲得障礙模型:
在動物進行電擊訓(xùn)練之15-20分鐘,給動物腹腔注射氫溴酸東莨菪堿(膽堿能M受體拮抗劑,HBr-Scopalamine),小鼠:3mg/kg,可見給藥組動物出現(xiàn)探究行為,訓(xùn)練時在明室內(nèi)駐留時間略長于對照組,進入暗室后受到電刺激時的反應(yīng)與對照組相似:嘶叫或跳躍。24小時后當(dāng)再次將動物放入明室時,動物進入暗室的潛伏期顯著低于對照組,即制備成功記憶障礙模型。
2、待測藥物的服用:
根據(jù)待檢測藥物在動物體內(nèi)的作用高峰時間,于相應(yīng)時間給動物服藥,如口服藥物,可于訓(xùn)練1小時給動物灌服待檢測藥物,然后再于訓(xùn)練15-20分鐘給動物損傷記憶獲得的藥物,如氫溴酸東莨菪堿等。
二、記憶鞏固過程
1、建立記憶鞏固障礙模型:
動物電擊訓(xùn)練結(jié)束后立即給動物腹腔注射蛋白質(zhì)合成抑制劑環(huán)己酰亞胺(Cycloheximide,小鼠:90-100mg/kg)抑制蛋白質(zhì)合成,或皮下注射NaNO2(小鼠:120mg/kg)導(dǎo)致動物短暫性缺氧,或給動物施行頭部瞬間電休克。然后放回飼養(yǎng)盒內(nèi),24小時后重測試。
2、待測藥物的服用:
若是口服藥物,于電擊訓(xùn)練藥物作用高峰期(一般選1小時)給動物灌服藥物。若是腹腔注射藥物,一般于訓(xùn)練半小時注射。然后給動物電擊訓(xùn)練,訓(xùn)練后立即給損傷記憶鞏固藥物或其它實驗因素,24小時后重測試,可檢測認(rèn)知藥物對記憶鞏固障礙的對抗作用。
三、記憶再現(xiàn)過程小動物學(xué)習(xí)記憶行為檢測技術(shù)--避暗法
1、建立記憶再現(xiàn)障礙模型于動物重測試之15分鐘給小鼠灌服酒精(35%,0.1ml/10g鼠重),15分鐘后進行重測試?梢娦∈笥洃浱崛∵^程受到損傷。
2、待測藥物的服用:于動物重測試之1小時給動物口服待檢藥物。
1、該損傷只有在重測10-30分鐘灌胃酒精才起作用
2、時間長于30分鐘則無效
3、該劑量酒精只對較不鞏固、一次性記憶有損傷作用,而對小鼠需經(jīng)多次訓(xùn)練而獲得的較鞏固的記憶的再現(xiàn)無影響
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