了解更多：http://www.elisa668.com/jmswkj-ParentList-148060/（上海勁馬ELISA試劑盒供應(yīng)商）
BIM網(wǎng)：http://www.servicebim.com
聯(lián)系電話：18221290082
上海勁馬福利：下單享豪禮，買ELISA試劑盒送免費代測，技術(shù)指導(dǎo)服務(wù)！
IDE,大鼠胰島素降解酶酶聯(lián)免疫試劑盒
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預(yù)先包被大鼠胰島素降解酶（IDE）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠胰島素降解酶（IDE）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過一夜后于1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2. 血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注：標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
標(biāo)本處理
1. 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé)，不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé)，請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量，預(yù)留充足的樣本。
2. 實驗前應(yīng)預(yù)測標(biāo)本含量，如果標(biāo)本濃度過高，應(yīng)對標(biāo)本進(jìn)行稀釋，使稀釋后的標(biāo)本符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。標(biāo)本使用0.01mol/L的PBS稀釋(PH=7.0-7.2)。
3. 若所檢樣本不包含在說明書所列樣本之中，建議進(jìn)行預(yù)實驗驗證其有效性，并注意留存樣本。
4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。
5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清，因該類樣本干擾因素較多，如：細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況。
6. 某些天然蛋白或重組蛋白，包括原核及真核重組蛋白，可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配，而不被檢測出。
7. 建議使用新鮮樣本，保存時間過長可能會存在蛋白降解或變性導(dǎo)致實驗結(jié)果偏差。
需要而未提供的試劑和器材
酶標(biāo)儀（450nm）
高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒溫箱
蒸餾水或去離子水
注意事項
嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。
底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。
在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。
平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
不能使用過期產(chǎn)品。
如果可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
操作步驟
1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
3. 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
實驗結(jié)果計算
以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并得到直線回歸方程，將樣品的OD值代入方程，計算出樣品的濃度。
上海勁馬實驗設(shè)備有限公司于2010年成立，注生命科學(xué)和生物醫(yī)學(xué)域多年，是集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售于一體的生物科技公司。我司為各大高校，科研單位、醫(yī)院、制藥與診斷試劑生產(chǎn)廠家等客戶提供多種生物學(xué)檢測試劑盒，酶聯(lián)免疫試驗代測、酶聯(lián)免疫試劑盒、TSZelisa試劑盒、原裝elisa試劑盒、elisa試劑盒實驗代測、進(jìn)口常規(guī)生化試劑、抗體、化學(xué)試劑、藥典試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、血清等科研產(chǎn)品，覆蓋分子生物學(xué)、生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、蛋白組學(xué)、生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等域。經(jīng)過多年的高速發(fā)展，我們先后取得了BIM、ABCAM、RD、TSZ、SIGMA、GIBCO、SPECTRUM、AMRESCO、HYCLONE、NQBB等眾多品牌的中國區(qū)的代理。 公司自成立以來，就非常注重企業(yè)信息化的建設(shè)，我們采用了先進(jìn)的內(nèi)部供應(yīng)鏈信息處理平臺，保證客戶訂單的準(zhǔn)確、高效處理。我們的客戶關(guān)系管理系統(tǒng)和客戶關(guān)系管理團(tuán)隊，能第一時間響應(yīng)客戶的售、售后需求，關(guān)注客戶體驗及滿意度。我們擁有上百名業(yè)的客戶服務(wù)工程師，為您提供業(yè)、耐心的服務(wù)。我們業(yè)，所以值得信賴；我們注，所以我們高速發(fā)展；我們信奉“客戶至上”，我們堅持“誠信創(chuàng)新，合作共贏”；我們將竭盡所能，為您提供便捷、業(yè)的采購服務(wù)，節(jié)省您的時間和成本。 我們堅信，經(jīng)過我們的不懈努力，上海勁馬實驗設(shè)備有限公司將成為“生命科學(xué)及化學(xué)域業(yè)、規(guī)模大、品種全及配套服務(wù)完善的業(yè)供應(yīng)商”，為用戶在生化科學(xué)域提供“一站式”服務(wù)，成為這個行業(yè)的dao者。
