SINOPCR^TM

我公司自行開發(fā)生產(chǎn)產(chǎn)品

一、 Vector

（一）、pBM-T載體

是一種高效克隆PCR產(chǎn)物（TA cloning）的專用載體，它是一種新型的T載體系統(tǒng)。與其他常用的pGEM-T Vector相比，它有兩個優(yōu)點：

1、  pBM-T載體的兩個3′T是由特殊工藝制作而成，它克服了添加3′T的不穩(wěn)定性，從而大大提高了PCR產(chǎn)物的連接克隆效率；

2、  在克隆后不需要進行傳統(tǒng)的藍白斑鑒定，陽性克隆可直接正選擇，自身環(huán)話的載體將表達毒性物質(zhì)，使宿主細(xì)胞不能存活，由此提高了克隆的陽性率，降低了后續(xù)的工作量。本產(chǎn)品中附帶有對照插入DNA片段（約500bp的PCR擴增片段），用于驗證克隆效率。

（二）、pBM-B載體

是由高效克隆平末端DNA的載體系統(tǒng)。與常用的pGEM-T Vector相比，pBM-B載體不需要對高保真的耐熱DNA聚合酶擴增的PCR產(chǎn)物加A就可以直接進行連接；與傳統(tǒng)的平末端載體相比，pBM-B載體克隆可直接進行正選擇，自身環(huán)化的載體將表達毒性物質(zhì)，使宿主細(xì)胞不能存活，由此提高了克隆的陽性率，減少了后續(xù)的工作量。本產(chǎn)品中附帶有對照插入DNA片段（約500bp的PCR擴增片段），用于驗證克隆效率。

（三）、pEA-T載體

pEA-T載體用于TA克隆，有以下特點：

1、  快速克隆基因。本試劑提供一種高效的連接緩沖液Ligation Solution I，僅需要5分鐘反應(yīng)時間；

2、  便于篩選重組子，提高克隆效率。提供氨芐青霉素和卡那霉素兩種篩選標(biāo)記。當(dāng)某個基因來源于含有氨芐青霉素基因質(zhì)粒時，可以選擇卡那霉素篩選標(biāo)記；當(dāng)某個基因來源于含有卡那霉素質(zhì)粒時，可以選擇氨芐青霉素篩選標(biāo)記，降低了克隆北京，對照插入片段克隆效率可達95%以上。

3、  容易判斷載體中有無外源基因的插入。包含lacZ基因，在含有IPTG，X-gal的平板培養(yǎng)基上進行藍白斑篩選，很容易判斷載體中有無外源基因插入。

（四）、pEA-B載體

pEA-T載體用于平端克隆，有以下特點：

4、  快速克隆基因。本試劑提供pEA-B載體，一種高效的連接緩沖液Ligation Solution I，僅需要5分鐘反應(yīng)時間；

5、  便于篩選重組子，提高克隆效率。提供氨芐青霉素和卡那霉素兩種篩選標(biāo)記。當(dāng)某個基因來源于含有氨芐青霉素基因質(zhì)粒時，可以選擇卡那霉素篩選標(biāo)記；當(dāng)某個基因來源于含有卡那霉素質(zhì)粒時，可以選擇氨芐青霉素篩選標(biāo)記，降低了克隆北京，對照插入片段克隆效率可達90%以上。

6、  容易判斷載體中有無外源基因的插入。包含lacZ基因，在含有IPTG，X-gal的平板培養(yǎng)基上進行藍白斑篩選，很容易判斷載體中有無外源基因插入。

（五）本公司同時還提供大量的載體資源：真核、原核、酵母表達載體，克隆載體。更多詳細(xì)信息，請咨詢銷售人員。

二、 PCR實驗相關(guān)產(chǎn)品

  （一）、Taq DNA Polymerase

  本產(chǎn)品在PCR反應(yīng)中，其延伸速度為1-2Kb/分鐘，產(chǎn)物3′端帶A，可直接用于T/A載體克隆。以￡ DNA為模板，能夠很好地擴增9Kb以下的DNA片段。

  （二）、2xTaq PCR Mix

  本產(chǎn)品包含酶dNTP和優(yōu)化的緩沖液，濃度為2x。DNA擴增是，只需加入模板，引物和水，使Mix溶液的濃度為1x即可進行反應(yīng)。具有快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。進行PCR擴增可以減少操作時間，避免因多步操作帶來的污染，特別適宜高通量篩選基因的擴增，Taq PCR Mix擴增產(chǎn)物可用于T/A克隆。

  （三）、Dfu DNA Polymerase

  本產(chǎn)品具有5′-3′DNA聚合酶活性和3′-5′外切酶活性，能糾正DNA擴增過程中產(chǎn)生的堿基錯配。Pfu酶是目前已發(fā)現(xiàn)的所有高溫DNA Polymerase中出錯率最低的。其PCR產(chǎn)物為平端，可直接用平端載體克隆。如克隆到T載體上，需加A后再連接。本產(chǎn)品應(yīng)用了獨特的緩沖液，不但提高了DNA聚合速度，而且增加了片段的擴增長度，并且具有快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。

  （四）、2xPfu PCR Mix

  包含酶dNTP和優(yōu)化的緩沖液，濃度為2x。DNA擴增時，只需要加入模板、引物和水，使Mix溶液的濃度為1x即可進行反應(yīng)，具有快速、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等特點。進行PCR擴增可以減少操作時間，避免因多步操作帶來的污染，特別適宜高通量篩選基因的擴增，Pfu PCR Mix擴增產(chǎn)物可用于“平端”克隆。應(yīng)用Mix擴增時，由于應(yīng)用獨特的緩沖液，不但提高了DNA聚合速度（1Kb/min，<4Kb；1Kb/2min，>4Kb），而且增加了片段的擴增長度。

  （五）、dNTP Mixture

  1、純度：HPLC檢測（C18柱）：大于99.5%。

           經(jīng)檢測確認(rèn)，用于PCR反應(yīng)時擴增良好。

           經(jīng)檢測確認(rèn)，不含有Rnase、Dnase。

  2、特點：★是單品銷售的dATP、dGTP、dCTP、dTTP的等摩爾混合液。

           ★PCR反應(yīng)時，不用稀釋可直接使用。

四、DNA Marker

  (一)、100bp DNA Marker

  100 DNA Marker為已含有1xloading Buffer的DNA溶液，可取5ul直接電泳，使用十分方便。100bp DNA Marker由DNA片段1500bp、1000bp、900bp、800bp、700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp以及100bp構(gòu)成，每次取5ul電泳時，每條帶的DNA量約為50ng。其中500bp的DNA片段為150ng，顯示亮帶。

 （二）、100bp DNA Marker II

  100bp DNA Marker II為已含有1xLoading Buffer的DNA溶液，可取5ul直接電泳，使用十分方便。100bp DNA Marker II由DNA片段5000bp、3000bp、2000bp、1500bp、1000bp、900bp、800bp、700bp、600bp、500bp、400bp、300bp、200bp以及100bp構(gòu)成，每次取5ul電泳時，每條帶的DNA量約為50ng。其中500bp的DNA片段為150ng，顯示亮帶。

  （三）、DNA Marker DL2000

  DNA Marker DL2000為已含有1xLoading Buffer的DNA溶液，可取5ul直接電泳，使用十分方便。 DNA Marker DL2000由DNA片段2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp以及100bp構(gòu)成，每次取5ul電泳時，每條帶的DNA量約為50ng。

  （四）、DNA Marker DL5000

  DNA Marker DL5000為已含有1xLoading Buffer的DNA溶液，可取5ul直接電泳，使用十分方便。DNA Marker DL5000由DNA片段5000bp、3000bp、2000bp、1000bp、750bp、500bp、250bp以及100bp構(gòu)成，每次取5ul電泳時，每條帶的DNA量大于50ng，其中750bp的DNA片段為100ng。

  （五）、DNA Marker DL10000

  DNA Marker DL10000為已含有1xLoading Buffer的DNA溶液，可取5ul直接電泳，使用十分方便，電泳圖象十分清晰。DNA Marker DL10000由DNA片段10000bp、8000bp、6000bp、5000bp、4000bp、3000bp、2000bp、1500bp、1000bp、750bp、500bp以及250bp構(gòu)成，每次取5ul電泳時，每條帶的DNA量大于50ng，其中1500bp的DNA片段為100ng。

  （六）、￡ DNA/Hind III Maker

  ￡ DNA/Hind III Maker為已含有1xLoading Buffer的DNA溶液，可取5ul直接電泳，使用十分方便，電泳圖象十分清晰�！� DNA/Hind Marker由DNA片段23130bp、9416bp、6557bp、4361bp、2322bp、2027bp、564bp以及125bp構(gòu)成，無非特異性，無DNA降解酶。

五、蛋白Marker

  （一）、中分子量蛋白質(zhì)Marker

  本產(chǎn)品是由6種蛋白質(zhì)分別純化后混合而成的蛋白質(zhì)溶液，分子量范圍為14.4KD-97.4KD，經(jīng)過SDS-PAGE凝膠電泳后，用考馬斯亮藍R-250（Coomassie Blue-250）染色后可得到清晰的6條蛋白質(zhì)帶。

  建議使用分離濃度為15%

（二）、預(yù)染染蛋白質(zhì)Marker（藍色）

  本產(chǎn)品包含6種預(yù)染的已知分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，分子量范圍為14KD-98KD，可以直接觀察蛋白電泳及清晰地判斷Western Blot的轉(zhuǎn)移效果。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳后轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上可得清晰的6條藍色的蛋白帶。

（三）、預(yù)染染蛋白質(zhì)Marker（彩色）

  本產(chǎn)品包含6種預(yù)染的已知分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，分子量范圍為10KD-98KD，可以直接觀察蛋白電泳及清晰地判斷Western Blot的轉(zhuǎn)移效果。經(jīng)SDS-PAGE凝膠電泳后轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上可得清晰的6條不同顏色的蛋白帶。帶色分別為藍色（98KD）、天藍色（66KD）、粉紫色（47KD）、磚紅色（30KD）、蔚藍色（22KD）和亮黃色（14KD）

六、感受態(tài)細(xì)胞和菌株

  （一）、TOP10菌株

  該菌株的轉(zhuǎn)化效率高達10⁸以上，適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴增。能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

  （二）、DH5 ａ菌株

  是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株。其￠80lac△M15基因的產(chǎn)物可于pUC載體編碼的b-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn)a互補，可用于藍白斑篩選。RecA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA提取。

  （三）、BL21(DE3)菌株

  該菌株用于以T7 RNA聚合酶為表達系統(tǒng)的高效外源基因的蛋白表達宿主。T7噬菌體RNA聚合酶基因的表達受控于￡噬菌體DE3區(qū)的lacUV5啟動子，該區(qū)整合于21的染色體上。該菌適合于非毒性蛋白的表達。

  （四）、BL21（DE3）plysS菌株

  該菌株帶有質(zhì)粒plysS，具有氯霉素抗性，次質(zhì)粒含有表達T7容菌酶的基因，T7容菌酶能夠降低目的基因的背景表達水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達。適合于毒性蛋白和非毒性蛋白的表達。