紫外可見分光光度計原理
分子的紫外可見吸收光譜是由于分子中的某些基團吸收了紫外可見輻射光后，發(fā)生了電子能級躍遷而產(chǎn)生的吸收光譜。它是帶狀光譜，反映了分子中某些基團的信息�？梢杂脴�(biāo)準(zhǔn)光圖譜再結(jié)合其它手段進行定性分析。
根據(jù)Lambert-Beer定律：A=εbc，（A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，為液池厚度，c為溶液濃度）可以對溶液進行定量分析。

你可以用紫外可見分光光度計測定定三種農(nóng)藥的波長在某溶液中的、*小吸收波長。

配制溶液－在光譜檢測項下進行－調(diào)整檢測光譜范圍及速度－－掃描光譜圖－－吸光度處對應(yīng)波長為吸收波長，吸光度*小處對應(yīng)的波長為*小吸收波長。

UV765紫外可見分光光度計操作規(guī)程

一、開機

開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān)，等待儀器自檢通過，自檢過程中禁止打開樣品室。

二、使用

自檢結(jié)束后（7個項目均出現(xiàn)OK字樣），儀器進入主菜單，屏幕顯示如下七個功能項：1.光度測量；2.光譜測量；3.定量測量；4.動力學(xué)測量；5.數(shù)據(jù)處理；6.多波長測定；7.系統(tǒng)狀態(tài)設(shè)定。儀器經(jīng)30min熱穩(wěn)定后，就可以進入正常測量。

1.光度測量   測定一定波長下的透光率（T％）或吸光度值(A)

在主菜單中選中[光度測量]項后，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 按[GOTO WL]鍵進入波長設(shè)置用數(shù)字鍵輸入你所需的波長值→ 按[ENTER]鍵確認(rèn)→ 屏幕提示：請稍等……，儀器自動將波長移動到你所需測定的波長值→ 按[F1]鍵，選擇測定透光率（T％）或吸光度值(A) → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R位和S1位，關(guān)上樣品室蓋→ 按[F3]鍵，儀器自動將比色皿架R位置移動到光路中（即空白溶液），屏幕上顯示Cell=R → 按[AUTO ZERO]鍵，儀器自動對空白溶液調(diào)零。屏幕提示：請稍等…… → 按[F2]鍵，比色皿架移動到S1位 (待測樣品),屏幕上顯示Cell=S1 → 按[F4]鍵測量T％或A值

測量完成后

1）打印輸出數(shù)據(jù)，按[START/STOP]鍵

2）返回主菜單，按[MODE]鍵

2. 光譜測量  波長掃描或光譜掃描，可直接測定一段波長范圍內(nèi)的光譜圖和峰值谷值數(shù)據(jù)

在主菜單中選中[光譜測量]項后，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 根據(jù)需要設(shè)定測量模式、掃描范圍、記錄范圍、掃描速度、采樣間隔、掃描次數(shù)、顯示模式各參數(shù)。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達(dá)設(shè)定行，進行參數(shù)的修改，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R位和S1位，關(guān)上樣品室蓋→ 按[F3]鍵，儀器自動將比色皿架R位置移動到光路中（即空白溶液），屏幕上顯示Cell=R → 按[F1]鍵進行基線校正。屏幕提示：基線校正…… → 按[F2]鍵，比色皿架移動到S1位 (待測樣品),屏幕上顯示Cell=S1 → 按[START/STOP]鍵開始光譜掃描 → 屏幕顯示掃描圖譜

掃描結(jié)束后

1） 打印結(jié)果譜圖，按[F4]鍵

2） 直接讀取峰谷值，按[F2]鍵，屏幕顯示“請輸入峰/谷檢測靈敏度”（默認(rèn)值為3），按[ENTER]鍵確認(rèn)

3） 存儲圖譜，獲取整個波長范圍內(nèi)的數(shù)據(jù)，按[F3]鍵，用[→]、[←]方向鍵選擇10個數(shù)字和26個字母組成文件名，按[ENTER]鍵確認(rèn)，按[F4]存儲，按1－8數(shù)字鍵確定文件序列號

4） 修改譜圖坐標(biāo)范圍，按[F1]鍵。修改完畢后，按[START/STOP]鍵確認(rèn)后，譜圖將按新設(shè)定坐標(biāo)被刷新

5） 返回上一級菜單，按[MODE]鍵

3. 定量測定  建立濃度曲線，直接測定樣品的濃度

主菜單中選中[定量測定]項后，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 根據(jù)需要設(shè)定測量波長、測量單位、測量方法各參數(shù)。按[→]、[←]、[↑]、[↓]方向鍵到達(dá)設(shè)定行，進行參數(shù)的修改，并按[ENTER]鍵確認(rèn)

3.1 K系數(shù)法 已知斜率k和截距b，測出樣品的吸光度值后待入公式就可算出濃度值

在測量方法中選擇K系數(shù)法，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[F2]鍵，將k值和b值輸入，按[ENTER]鍵確認(rèn) → 打開樣品室蓋，在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關(guān)上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調(diào)零 → 將樣品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]鍵進入數(shù)據(jù)測量界面→ 按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處于光路中 →  按[START/STOP]鍵測量

3.2單點標(biāo)定法 測量一個標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度與坐標(biāo)零點建立工作曲線，測定未知樣品濃度

在測量方法中選擇單點標(biāo)定法，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[F2]鍵修改單點 → 按數(shù)字鍵輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度值 → 按[ENTER]鍵 → 打開樣品室蓋，在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關(guān)上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調(diào)零 → 將空白樣品換成標(biāo)準(zhǔn)樣品→  按[START/STOP]鍵測量標(biāo)樣的吸光度并顯示 → 將樣品放入比色皿架中 → 按[START/STOP]鍵進入樣品測量界面 → 按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處于光路中 →  按[START/STOP]鍵測量

3.3多點標(biāo)定法 測量已知濃度的一系列標(biāo)準(zhǔn)樣品吸光度，建立工作曲線來測定未知濃度

在測量方法中選擇多點標(biāo)定法，并按[ENTER]鍵確認(rèn) → 打開樣品室蓋，在當(dāng)前光路的比色皿架位中放入空白樣品，關(guān)上樣品室蓋 → 按[AUTO ZERO]鍵調(diào)零 → 按[F2]鍵重新標(biāo)定 → 按數(shù)字鍵輸入標(biāo)準(zhǔn)樣品數(shù) → 按[ENTER]鍵確認(rèn) → 將標(biāo)準(zhǔn)樣品依次放入比色皿架R、S1、S2位……關(guān)上樣品室蓋 → 按[F3]移動比色皿架R位到光路 → 按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按數(shù)字鍵輸入標(biāo)樣濃度值，按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[START/STOP]鍵測量標(biāo)樣的吸光度→ 按[ENTER]鍵確認(rèn) → 按[F2]鍵移樣品位S1到光路，同樣的方法測量所有標(biāo)樣的吸光度 → 按[F1]鍵生成方程曲線，顯示該曲線的斜率k、截距b、相關(guān)系數(shù)R → 按[MODE]鍵返回定量測量菜單  → 按[START/STOP]鍵進入數(shù)據(jù)測量菜單  → 放入樣品 →按[F2]鍵移動比色皿架，使被測樣品處于光路中 →  按[START/STOP]鍵測量

6.多波長測定  同時測定幾個波長下的透光率（T％）或吸光度值(A)

主菜單中選中[多波長測定]項后，按[ENTER]鍵進入此功能塊 → 按[F3]鍵設(shè)定測量波長數(shù)目和樣品池個數(shù)，按[ENTER]鍵確定 → 按數(shù)字鍵輸入相應(yīng)波長值 → 打開樣品室蓋，將空白溶液和待測樣品分布放置比色皿架R、S1、S2位……，關(guān)上樣品室蓋 → 按[START/STOP]鍵開始測量

測量完成后

1）打印輸出數(shù)據(jù)，按[F4]鍵

2）返回主菜單，按[MODE]鍵

三、關(guān)機

將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。


注意事項：

1.開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應(yīng)保持比色皿清潔，池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。
3.測定時，禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K，要盡可能及時清理干凈。

4.實驗結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。

問題處理：
1、如果儀器不能初始化，關(guān)機重啟；如不成功，請向管理老師反映。
2、如果吸收值異常，依次檢查：波長設(shè)置是否正確（重新調(diào)整波長，并重新調(diào)零）、測量時是否調(diào)零（如被誤操作，重新調(diào)零）、比色皿是否用錯（測定紫外波段時，要用石英比色皿）、樣品準(zhǔn)備是否有誤（如有誤，重新準(zhǔn)備樣品）。  

UV-1102紫外可見分光光度計操作規(guī)程

一、開機

開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，確認(rèn)電源是否連接。打開儀器電源開關(guān)，等待儀器自檢通過，自檢過程中禁止打開樣品室。

二、使用
儀器自檢結(jié)束后（7個自檢項目均出現(xiàn)OK字樣），按[MAIN MENU]鍵（主菜單），屏幕顯示如下5個功能項： 1. Phtometry（定量運算）；2.Wavelength Scan（波長掃描模式）；3.Time Scan（時間曲線掃描）；4.System（系統(tǒng)校正）；5.Data display（光度直接測量模式）。按相應(yīng)選項前的數(shù)字鍵，即可進入該選項的下一級子菜單。

1. Phtometry（定量運算）

1）按[MAIN MENU]鍵，再按數(shù)字[1]鍵進入Phtometry子菜單下，選中對應(yīng)的數(shù)字來選擇所需的測定方式：①%T/ABS（透過率/吸光度測定模式）；②Ratio（比例測定模式）；③Concentration （濃度測定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式）；

2）按數(shù)字[1]鍵進入%T/ABS（透過率/吸光度測定）子菜單，選中對應(yīng)的數(shù)字鍵來設(shè)定測定條件：①NUM WL(設(shè)定測試波長的數(shù)目，*多可設(shè)定6個不同波長)；②WL Setting（設(shè)定測試波長具體數(shù)值）③Data Mode(選擇測定吸光度或透光率)，設(shè)定完畢后點擊[Enter]鍵確定，所有項目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0] 鍵確定，等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài)，此時屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO，將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中，按[Start/Stop] 鍵進行零點的自動調(diào)整，自動調(diào)零完成后，將樣品置于光路中，再按[Start/Stop] 鍵進行測量，儀器的顯示屏自動給出對應(yīng)波長的數(shù)值。

3）按數(shù)字[3]鍵進入③Concentration （濃度測定模式或標(biāo)準(zhǔn)曲線模式），選中對應(yīng)的數(shù)字來設(shè)定條件（波長數(shù)目，波長數(shù)值，標(biāo)準(zhǔn)溶液數(shù)目及濃度），設(shè)定完畢后點擊[Enter]鍵確定，所有項目設(shè)定完畢后按數(shù)字[0]鍵確定，等待儀器調(diào)整至準(zhǔn)備狀態(tài)，此時屏幕上出現(xiàn)AUTOZERO，將盛有空白溶液的比色皿放入樣品室中，按[Start/Stop] 鍵進行零點的自動調(diào)整，自動調(diào)零完成后，將標(biāo)準(zhǔn)溶液置于光路中，按照濃度從低到高順序依次按[Start/Stop] 鍵進行測量，測量完畢后儀器將自動給出標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線下方有三項供選擇：①Process(更改標(biāo)準(zhǔn)曲線的坐標(biāo)和觀察濃度回歸曲線的數(shù)據(jù))；②Measure（直接進入樣品的測量）；③Print(打印濃度回歸曲線譜圖和數(shù)據(jù))，選中對應(yīng)的數(shù)字就可執(zhí)行相應(yīng)的功能。
4）如果希望返回上一級菜單，按[CLEAR RETURN] 鍵返回，返回主菜單直接按[MAIN MENU]鍵。
2. Wavelength Scan（波長掃描模式）

1）參數(shù)修改：按[MAIN MENU]鍵，再按數(shù)字[2]鍵進入②Wavelength Scan（波長掃描模式）子菜單下，選中對應(yīng)的數(shù)字來選擇所需修改的內(nèi)容， 修改掃描的起始波長，測量模式，圖譜坐標(biāo)的上下限，掃描速度等等。修改完畢按數(shù)字[0]鍵確定。

2）波長掃描：分別將兩個比色皿裝上空白溶液和樣品溶液，放入比色槽中，按[Start/Stop]鍵進行譜圖掃描（如想終止掃描再次按按[Start/Stop]鍵），待儀器自動進行基線校正，提示拉入樣品自動測試，測試完畢后有掃描圖譜出現(xiàn)，下方有相應(yīng)的數(shù)據(jù)處理選項①Process②Baseline③Print；

3）數(shù)據(jù)處理：按數(shù)字[1]鍵進入①Process（數(shù)據(jù)處理），可以讀峰谷值，修改坐標(biāo)，顯示所有數(shù)據(jù)，求一階倒數(shù)等等功能。

3.Time Scan（時間曲線掃描）同上（二）操作。

4.System（系統(tǒng)校正），一般不做。

5.Data display（光度直接測量模式）同上（二）操作。

三、 關(guān)機

將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈；關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。

注意事項：

1.開機前將樣品室內(nèi)的干燥劑取出，儀器自檢過程中禁止打開樣品室蓋。
2.比色皿內(nèi)溶液以皿高的2/3～4/5為宜，不可過滿以防液體溢出腐蝕儀器。測定時應(yīng)保持比色皿清潔，池壁上液滴應(yīng)用擦鏡紙擦干，切勿用手捏透光面。測定紫外波長時，需選用石英比色皿。
3.測定時，禁止將試劑或液體物質(zhì)放在儀器的表面上，如有溶液溢出或其它原因?qū)悠凡叟K，要盡可能及時清理干凈。

4.實驗結(jié)束后將比色皿中的溶液倒盡，然后用蒸餾水或有機溶劑沖洗比色皿至干凈，倒立晾干。關(guān)電源將干燥劑放入樣品室內(nèi)，蓋上防塵罩，做好使用登記，得到管理老師認(rèn)可方可離開。

問題處理：
1、如果儀器不能初始化，關(guān)機重啟；如不成功，請向管理老師反映。
2、如果吸收值異常，依次檢查：波長設(shè)置是否正確（重新調(diào)整波長，并重新調(diào)零）、測量時是否調(diào)零（如被誤操作，重新調(diào)零）、比色皿是否用錯（測定紫外波段時，要用石英比色皿）、樣品準(zhǔn)備是否有誤（如有誤，重新準(zhǔn)備樣品）。
 

原創(chuàng)作者：上海帥寧儀器有限公司