1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上發(fā)表文章首次準確、精煉、客觀的闡述了PCR方法，1976年一種從嗜熱水生菌（Thermus aquaticus）分離得到的熱穩(wěn)定的DNA依賴的DNA聚合酶的應用大大增加了PCR的效率。而現(xiàn)今所發(fā)展出來的PCR則是源于由Saiki和Mullis等人于1988年發(fā)表在Science上的一篇論文，Mullis當時服務于Perkin Elmer（PE）公司，因此PE公司在PCR界有著特殊的地位。后來PE被Applied Biosystems Inc.（ABI）公司收購、分拆、再轉賣，而PCR的和倍受信賴的PCR儀器生產(chǎn)和銷售就留在ABI名下。到如今，PCR方法愈發(fā)趨向自動化，并從中衍生出更多的新技術方法，可以說，PCR技術是支撐現(xiàn)代分子生物學發(fā)展的一塊重要基石。這種技術的廣泛應用催生了一個龐大的市場，多個公司均有各種類型的商品化PCR儀出售。PCR的目前依然掌握在ABI和Roche（羅氏）兩大公司手中，去年業(yè)界頗為引人矚目ABI訴MJ公司侵犯侵犯PCR儀知識產(chǎn)權案*終以MJ敗訴并宣布破產(chǎn)、*終被Bio-rad收購暫告一段落。其后還會不會有后繼的故事還需拭目以待。

PCR原理

DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶的作用下，以單鏈為模版，根據(jù)堿基互補配對原則復制成新的單鏈，與模版配對成為雙鏈分子挎貝。在體外實驗中發(fā)現(xiàn)，DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計與模板DNA的5’端結合的兩條引物，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制，多次重復“變性解鏈—退火—合成延伸”的循環(huán)就可以以幾何級數(shù)大量擴增特定的基因。

發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該類酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環(huán)加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。

從PCR原理可以看出，PCR儀的關鍵是升降溫的步驟�，F(xiàn)在偶爾還能聽到一些前輩們笑談早年的PCR實驗如何在3個水浴鍋中完成的趣聞。經(jīng)過不斷改進，今天的PCR已經(jīng)越來越完善和智能化。出于市場推廣的戰(zhàn)略需要，各廠家的PCR儀型號不同，著力宣傳的技術指標和參數(shù)也不盡統(tǒng)一，生物通的編者在這里簡單列出選購時我們認為應該考慮的常用指標，希望有助于大家選購PCR儀的選購技巧。

PCR儀介紹及其選購

PCR儀的種類總體來說可以分為兩大類：PCR擴增儀和實時熒光定量PCR儀，普通的PCR擴增儀又衍生出帶梯度PCR功能的梯度PCR儀、和帶原位擴增功能的原位PCR儀等等。1996年由ABI公司首先推出將擴增和檢測融為一體的實時熒光定量PCR儀，此后很多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的定量PCR儀.

原創(chuàng)作者：長沙駿逸實驗儀器有限公司