中藥新藥研究過程中，藥品安全性評價是新藥研究開發(fā)的重要前提。而長期毒性試驗(yàn)（以下簡稱長毒）又是安全性評價中的重中之重。長毒血液生化的檢測結(jié)果常常是評判肝腎等重要臟器功能是否正常的客觀而又靈敏的指標(biāo)。但是，血液生化檢測結(jié)果卻受到諸多因素的影響。由于長期以來長毒動物血液生化檢測缺乏一個大家認(rèn)可的規(guī)范化（標(biāo)準(zhǔn)化）操作規(guī)程（SOP），各實(shí)驗(yàn)室在血液生化檢測的取材、標(biāo)本保存直至*后的測定上均有各自一套方法和習(xí)慣，加之實(shí)驗(yàn)動物在種屬、飼養(yǎng)條件上的差異，致使各實(shí)驗(yàn)室長毒血液生化指標(biāo)差異甚大。
　　我國實(shí)驗(yàn)動物血液生化值迄今尚無參考價值很強(qiáng)的正常值與正常范圍，這嚴(yán)重影響了藥物安全性評價的客觀性與準(zhǔn)確性�；诖�，我們課題組在國家科技部科技基礎(chǔ)性工作和社會公益研究專項“長毒試驗(yàn)動物血液生化測定規(guī)范化研究”項目的支持下，使用SPF級大鼠及健康Beagle犬，應(yīng)用全自動生化測定儀對影響血液生化測定的各項條件進(jìn)行系統(tǒng)的考查，并在*終制定的SOP條件下，建立不同種屬、年齡、性別SPF級大鼠（SD、Wistar大鼠）及Beagle犬血液生化指標(biāo)的正常值與正常范圍。從而為中藥新藥的安全性評價提供一個參考價值很強(qiáng)的數(shù)據(jù)評判體系。具體研究內(nèi)容如下：
　　影響因素的考查
　　1．采血方法對血液生化值的影響
　　大鼠長毒試驗(yàn)中，采血部位多種多樣，如股動脈采血、股靜脈采血、頸外靜脈采血、眶后靜脈叢采血、摘眼球采血、斷頭及剪尾采血（后三種屬動靜脈混合血）等方法。這些部位采血其血液生化值是否存在差異，無人進(jìn)行過系統(tǒng)研究，課題對動-靜脈血、前腔靜脈與后腔靜脈血及眶后靜脈與股靜脈血液生化值的比較，結(jié)果表明不同部位采血，其部分血液生化值存在明顯差異，動靜脈血清及頸外靜脈與后腔靜脈血液生化值主要在總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）上存在明顯區(qū)別，表現(xiàn)為股動脈或頸外靜脈血清中總蛋白、白蛋白明顯高于后腔靜脈血；大鼠眶靜脈與股靜脈血液生化值在多項指標(biāo)上存在明顯區(qū)別。這可能與采血時眼內(nèi)液的混入有關(guān)。
　　2．樣品制備方法對血液生化值的影響
　　采用全自動生化儀對不同制備方法血液中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、尿素 （Urea）、肌酐（Cre）、葡萄糖（Glu）、總膽固醇（CHO）、總膽紅素（TBil）等生化值進(jìn)行測定，以探討血液不同制備方法對其血液生化值的影響。結(jié)果表明，血液樣品制備過程中，抗凝與否，離心條件（溫度、速度）以及動物禁食時間長短，除常規(guī)離心速度（相對離心力1000～4000g）對血液生化值未見明顯影響外，其余各項條件均不同程度影響測定值。
　　3．血樣存放時間對生化值的影響
　　采用全自動生化儀對存放不同時間動物血液中ALT、AST、TP、ALB、TBIL、ALP、UREA、CRE、GLU、CHO等生化值進(jìn)行測定，探討不同存放時間對所測定血液樣本生化值的影響。結(jié)果表明，相同溫度存放不同時間對部分血液生化值存在明顯影響，在溫度一定的條件下，存放時間愈長，血液生化值變化愈多或愈大。其中，存放時間對TP、ALB及CHO影響*明顯，而TBIL、ALT、AST在低溫條件下較存放4℃條件更為穩(wěn)定，尤其保存時間在5天以上者。但試驗(yàn)也顯示，無論是-18℃、-30℃還是-80℃存放，部分生化指標(biāo)均與放置前有明顯區(qū)別。相對而言，不經(jīng)凍融，4℃保存相對較短時間（如48小時內(nèi)）更能反映血液生化的“真值”。不同溫度放置大鼠血清2天，4℃條件存放明顯優(yōu)于低溫凍存，表明短期存放（2天內(nèi)）不宜冷凍只宜冷藏。
　　4．存放溫度對生化值的影響
　　采用全自動生化儀對存放不同溫度動物血液中ALT、AST、TP、ALB、TBIL、ALP、UREA、CRE、GLU、CHO等生化值進(jìn)行測定，探討不同存放溫度對所測定血液樣本生化值的影響。結(jié)果表明，不同溫度存放相同時間，血清生化值出現(xiàn)不同程度的變化。其中，存放時間對TP、ALB 、ALT、CHO及TBIL影響*為明顯。
　　標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）制定
　　動物采血前12小時禁食（不禁水）。大鼠乙醚淺麻醉后于頸外靜脈、Beagle犬從前肢皮下頭副靜脈采血。每批次試驗(yàn)，采血時間應(yīng)控制在2～3小時內(nèi)。采血后室溫（20～22℃）放置4～5小時（已有足量血清析出）后離心分離血清。血樣4℃條件常規(guī)離心。分離的血清不宜冷凍保存，可臨時4℃冷藏待測。Beagle犬血清宜當(dāng)日測定。大鼠血清4℃冷藏時間不宜超過2天。
　　應(yīng)采用可靠性高的測定儀器（全自動生化測定儀及電解質(zhì)測定儀）進(jìn)行血液生化測定，測定前應(yīng)采用定值質(zhì)控血清對儀器進(jìn)行檢查，必要時應(yīng)先采用標(biāo)準(zhǔn)（校正血清）先定標(biāo)，然后進(jìn)行測定。
　　長毒試驗(yàn)動物血液生化正常值及正常范圍的確定
　　在所確定的SOP條件下，分別對不同性別、不同年齡SPF級環(huán)境條件下SD大鼠、Wistar大鼠及健康Beagle犬（I級）血液生化指標(biāo)ALT、AST、ALP、TP、ALB、Urea、Cre、Glu、CHO、Tbil、甘油三酯（TG）、γ-谷氨�；D(zhuǎn)移酶（γ-GT）、肌酸激酶（CK）和鉀（K）、鈉（Na）、氯（Cl）等共計16項進(jìn)行了測定。并根據(jù)嚴(yán)格的統(tǒng)計學(xué)分析與計算，求出長毒試驗(yàn)動物正常參考值范圍。該參考值將為中藥新藥安全性評價提供一個參考價值很強(qiáng)的數(shù)據(jù)評判體系（具體數(shù)據(jù)略）。

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