檢測(cè)三聚氰胺用高速冷凍離心機(jī)

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三鹿奶粉事件沸沸揚(yáng)揚(yáng)，各地致病患兒的致命成份——三聚氰胺檢測(cè)方法匯總

　　GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺

　　Spectra-Quad實(shí)現(xiàn)三聚氰胺含量在線檢測(cè)

　　超高效液相色譜_電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中殘留的三聚氰胺

　　反相高效液相色譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺的含量

　　高效液相色譜-二極管陣列法測(cè)定高蛋白食品中的三聚氰胺

　　高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定飼料中三聚氰胺的含量

　　高效液相色譜-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定飼料中三聚氰胺含量

　　固相萃取與高效液相色譜聯(lián)用測(cè)定寵物食品中三聚氰胺

　　液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MSMS)分析寵物食品中三聚氰胺

　　液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定飼料中三聚氰胺殘留

　　GC-MS法測(cè)定動(dòng)物食品中的三聚氰胺

　　2.1儀器與條件

　　Agilent1100高效液相色譜儀(美國(guó)，Agilent公司);二極管陣列檢測(cè)器(DAD)，檢測(cè)波長(zhǎng)240nm，柱溫：40℃。

　　(1)AgelaVenusilTMASBC18(4.6×250mm);緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動(dòng)相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min。

　　(2)AgelaVenusilTMASBC8(4.6×250mm);流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào)pH為3.0;流速：1.0mL/min;

　　離子交換固相萃取柱AgelaClearnertTMPCX(北京艾杰爾科技有限公司)

　　2.2試劑與樣品

　　寵物飼料樣品(農(nóng)業(yè)部飼料供應(yīng)中心提供);甲醇、乙腈為北京艾杰爾科技有限公司提供;氨水、乙酸鉛、三氯乙酸、均購(gòu)于北京化學(xué)試劑公司;三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品、檸檬酸、辛烷磺酸鈉(Sigma公司);甲醇為色譜純，其他均為化學(xué)純。

　　3實(shí)驗(yàn)方法

　　3.1樣品前處理方法

　　(1)標(biāo)準(zhǔn)樣品配制：

　　取50mg三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品，以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的標(biāo)準(zhǔn)溶液，使用時(shí)，以提取液(0.1%三氯乙酸)稀釋至所要的濃度。

　　(2)提�。�

　　稱取飼料樣品5g，加入50ml0.1%三氯乙酸提取液，充分混勻，加入2mL2%乙酸鉛溶液，超聲20min。

　　然后取部分溶液轉(zhuǎn)移至10mL離心管中，8000rpm/min離心10min，取上清液3mL過(guò)混合型陽(yáng)離子交換小柱(PCX)。

　　(3)凈化(PCX小柱，60mg/3mL)：

　　a)活化及平衡：3mL甲醇，3mL水

　　b)上樣：加入提取液3mL

　　c)淋洗：3mL水;3mL甲醇;棄去淋洗液并將小柱抽干。

　　d)洗脫：5mL5%氨化甲醇(v/v)洗脫。(5%氨化甲醇的配制：5mL氨水+95mL甲醇)。

　　e)濃縮：50℃，氮?dú)獯蹈桑?0%甲醇/水定容至2mL，HPLC分析或衍生后GC/MS分析。

　　3.2HPLC檢測(cè)方法

　　3.2.1三聚氰胺HPLC-UV檢測(cè)方法

　　三聚氰胺是強(qiáng)極性化合物，在傳統(tǒng)的反相C18柱上保留很差，需要用離子對(duì)試劑色譜方法才能有良好的保留與分離，按照美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)的三聚氰胺檢測(cè)方法和中國(guó)農(nóng)業(yè)部公布的三聚氰胺檢測(cè)方法，采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，可以得到良好的分離效果，分析色譜圖如下：

　　圖2VenusilASB色譜柱分離三聚氰胺的譜圖

　　(a)色譜柱：VenusilASBC84.6×250mm;標(biāo)準(zhǔn)：FDA方法;流動(dòng)相：緩沖液：乙腈=85：15;緩沖液：10mM檸檬酸，10mM辛烷磺酸鈉，調(diào)pH為3.0;流速：1.0mL/min;柱溫：40oC;波長(zhǎng)：240nm

　　(b)色譜柱：VenusilASB-C184.6×250mm;標(biāo)準(zhǔn)：中國(guó)農(nóng)業(yè)部頒標(biāo)準(zhǔn)方法;緩沖液：10mM檸檬酸,10mM庚烷磺酸鈉;流動(dòng)相：緩沖溶液:乙腈=85:15;流速：1.0mL/min;柱溫：40℃;波長(zhǎng)：240nm

　　空白加水平(mg/L)回收率0.01116%0.1108%0.592%296%

　　3.2.2三聚氰胺LC-MS檢測(cè)方法

　　由于FDA公布的HPLC-UV方法中，流動(dòng)相添加了離子對(duì)試劑，因此限制了液質(zhì)聯(lián)用方法的使用;但不用離子對(duì)試劑色譜方法，三聚氰胺在傳統(tǒng)的C18柱上保留很差，不能得到較好的分離定量〔3〕。

　　基于此問(wèn)題，艾杰爾科技公司自主開(kāi)發(fā)了新的方法，采用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱，不用離子對(duì)試劑也能得到有效的保留與分離。因此方法中流動(dòng)相不含離子對(duì)試劑，可以用于質(zhì)譜檢測(cè)。

　　與FDA2007年4月公布的《UpdatedFCCDevelopmentalMelamineQuantitation(HPLC-UV)》相比較，該方法大大降低了檢測(cè)限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)，提高了檢測(cè)靈敏度。

　　以該方法分別在ASB-C84.6×250mmASB-C184.6×250mm得到的譜圖如下：

　　圖3LC-MS方法檢測(cè)三聚氰胺的譜圖

　　緩沖液：10mM的NH4AC;流動(dòng)相：Buffer:：ACN=95：5;流速：1.0mL/min;進(jìn)樣量：樣品先用70%ACN溶解成約1mg/mL，用ACN稀釋成0.1mg/mL，進(jìn)10uL;柱溫：40℃;波長(zhǎng)：240nm

　　4結(jié)果與討論

　　4.1陽(yáng)離子交換柱(PCX)

　　三聚氰胺呈弱堿性(弱陽(yáng)離子化合物)，凈化過(guò)程一般應(yīng)選擇陽(yáng)離子交換柱。混合型的陽(yáng)離子交換柱(PCX)通過(guò)將磺酸基團(tuán)(-SO3H)鍵合在極性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附劑上，具有陽(yáng)離子交換和反相吸附兩種機(jī)理，并具有以下優(yōu)點(diǎn)：

　　a)可通過(guò)兩種不同溶液的洗滌(水/一定pH值的緩沖溶液和有機(jī)溶劑)，使樣品更干凈，提高檢測(cè)的靈敏度。

　　b)批次重復(fù)性好。

　　c)回收率高，重現(xiàn)性好，即使小柱跑干也可以得到較高回收率。

　　4.2LC-MS方法優(yōu)點(diǎn)：

　　(1)檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)便：無(wú)須添加離子對(duì)試劑，三聚氰胺就可得到良好的保留與分離，避免了配制離子對(duì)流動(dòng)相的復(fù)雜過(guò)程。

　　(2)提高了檢測(cè)的靈敏度：無(wú)離子對(duì)試劑，可以用于質(zhì)譜檢測(cè)器，大大降低了檢測(cè)限(MSD：0.5ppm;UV：2ppm)。

　　(3)降低了檢測(cè)成本：不用離子對(duì)試劑，就不再需要買價(jià)格較貴的離子對(duì)試劑了，從而降低了檢測(cè)成本。

　　(4)延長(zhǎng)了色譜柱的使用壽命：避免了使用離子對(duì)試劑減少色譜柱壽命的影響。

　　(5)該方法所使用的色譜柱具有通用性：無(wú)論是用FDA方法、中國(guó)農(nóng)業(yè)部部頒標(biāo)準(zhǔn)方法和本公司開(kāi)發(fā)的LC-MS方法，使用艾杰爾(Agela)ASB系列親水色譜柱均能得到一個(gè)很好的檢測(cè)結(jié)果，從而給客戶提供了多種選擇空間。

　　國(guó)家食品質(zhì)量監(jiān)督檢測(cè)中心有關(guān)人士說(shuō)，在現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)奶粉檢測(cè)中，主要進(jìn)行蛋白質(zhì)、脂肪、細(xì)菌等檢測(cè)。三聚氰胺屬于化工原料，是不允許添加到食品中的，所以現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)不會(huì)包含相應(yīng)內(nèi)容。也就是說(shuō)，三聚氰胺不屬于常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目，正常情況下，很少有人會(huì)想到去檢測(cè)它。

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