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冷凍離心機(jī)單核細(xì)胞分離技術(shù)
點(diǎn)擊次數(shù)：1352 發(fā)布時(shí)間：2008/2/19 13:32:18
單核細(xì)胞分離技術(shù)
（一）鐵粉吸附法
1．材料及試劑
（1）鐵粉或羰基鐵粉（Atomergic chemetals）99％的純度，顆粒小于60µm（Goodfellow Metals）。
（2）強(qiáng)磁鐵（馬蹄形）。
（3）一塊小棒狀磁鐵（約1cm長(zhǎng)）。
（4）毛細(xì)吸管等。
2．操作方法
（1）稱取一定量的鐵粉，一般為10g，用100ml生理鹽水洗滌4次，去除任何可溶性有毒物質(zhì)。在倒去鹽水時(shí)，用強(qiáng)磁鐵吸住鐵粉。
（2）用50ml生理鹽水混懸鐵粉。搖勻后，分裝于10個(gè)瓶中，包扎瓶口，121℃滅菌20min，拿出后立即輕輕搖勻，防止鐵粉結(jié)塊，儲(chǔ)藏備用。
（3）臨用前，倒去瓶中的生理鹽水，加入適量的單個(gè)核細(xì)胞懸液（3ml～5ml，細(xì)胞總數(shù)為8×107個(gè)／瓶）。37℃溫育45min，中間不時(shí)晃動(dòng)，使鐵粉懸浮起來(lái)。
（4）加入一塊小磁鐵棒于瓶中，讓其吸住鐵粉以及附著在鐵粉上的細(xì)胞。
（5）倒出懸液，此懸液主要是淋巴細(xì)胞，離心，收集。
（6）在鐵粉瓶?jī)?nèi)倒入一定量的Hank’s液，用力振搖后，以強(qiáng)磁鐵吸附，幾分鐘后，倒出液體。
（7）2 000r/min離心液體，管底即為單核細(xì)胞。
（二）玻璃板吸附法
將分離的單個(gè)核細(xì)胞傾于無(wú)菌潔凈的玻璃平皿內(nèi)，置37℃ 30 min～40min，用毛細(xì)吸管輕輕吸取懸液，即為淋巴細(xì)胞。用適量的Hank’s液沖洗平皿，收獲即為單核細(xì)胞懸液。
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