欧美三级欧美成人高清,麻豆网神马久久人鬼片,男同gay自慰网站,欧美日韩精品一区二区三区激情,在线,男人的天堂av

企業(yè)檔案

  • 會(huì)員類型：免費(fèi)會(huì)員
  • 工商認(rèn)證： 【已認(rèn)證】
  • 最后認(rèn)證時(shí)間：
  • 法人：
  • 注冊(cè)號(hào)：
  • 企業(yè)類型：經(jīng)銷商
  • 注冊(cè)資金：人民幣萬(wàn)

聯(lián)系我們

技術(shù)文章

細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)（二）冷凍離心機(jī)

點(diǎn)擊次數(shù)：1021 發(fā)布時(shí)間：2008/2/19 13:23:34
細(xì)胞培養(yǎng)知識(shí)（二）
無(wú)菌操作基本技術(shù) 
1. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前，無(wú)菌室及無(wú)菌操作臺(tái)laminar flow 以紫外燈照射30-60 分鐘滅菌，以70% ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面，并開(kāi)啟無(wú)菌操作臺(tái)風(fēng)扇運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘后，才開(kāi)始實(shí)驗(yàn)操作。每次操作只處理一株細(xì)胞株，且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基，以避免失誤混淆或細(xì)胞間污染。實(shí)驗(yàn)完畢后，將實(shí)驗(yàn)物品帶出工作臺(tái)，以70% ethanol 擦拭無(wú)菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無(wú)菌操作臺(tái)運(yùn)轉(zhuǎn)10 分鐘以上后，再進(jìn)行下一個(gè)細(xì)胞株之操作。 
2. 無(wú)菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞，必要物品，例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時(shí)放置，其它實(shí)驗(yàn)用品用完即應(yīng)移出，以利于氣流之流通。實(shí)驗(yàn)用品以70% ethanol 擦拭后才帶入無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在抬面之中央無(wú)菌區(qū)域，勿在邊緣之非無(wú)菌區(qū)域操作。 
3. 小心取用無(wú)菌之實(shí)驗(yàn)物品，避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口，亦不要在打開(kāi)之容器正上方操作實(shí)驗(yàn)。容器打開(kāi)后，以手夾住瓶蓋并握住瓶身，傾斜約45°角取用，盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。 
4. 工作人員應(yīng)注意自身之安全，須穿戴實(shí)驗(yàn)衣及手套后才進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。對(duì)于來(lái)自人類或是病毒感染之細(xì)胞株應(yīng)特別小心操作，并選擇適當(dāng)?shù)燃?jí)之無(wú)菌操作臺(tái)至少Class II。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起aerosol 之產(chǎn)生，小心毒性藥品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖銳針頭之傷害等。 
5. 定期檢測(cè)下列項(xiàng)目： 5.1. CO2 鋼瓶之CO2 壓力 5.2. CO2 培養(yǎng)箱之CO2 濃度、溫度、及水盤是否有污染水盤的水用無(wú)菌水，每周更換。 5.3. 無(wú)菌操作臺(tái)內(nèi)之a(chǎn)irflow 壓力，定期更換紫外線燈管及HEPA 過(guò)濾膜，預(yù)濾網(wǎng)300小時(shí)/預(yù)濾網(wǎng)，3000 小時(shí)/HEPA。 
6. 水槽可添加消毒劑Zephrin 1:750，定期更換水槽的水。

實(shí)驗(yàn)用品 
1. 種類? 
  1.1. 細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用品均為無(wú)菌，除了玻璃容器與pasteur pipet 外，其它均為塑料無(wú)菌制品。 
  1.2. TC 級(jí)培養(yǎng)盤表面均有coating 高分子物質(zhì)以讓細(xì)胞吸附，培養(yǎng)容器種類有Tflask,plates, dishes, roller bottle 等，依實(shí)驗(yàn)需要使用。 
  1.3. plastic sterile pipet: 1ml, 2ml,5ml, 10ml, 25ml 
  1.4. 塑料離心管: 15ml, 50ml，均有2 種不同材質(zhì)，其中polypropylene PP 為不透明材質(zhì)，polystyrene PS 為透明材質(zhì)，可依實(shí)驗(yàn)需要而選擇適合材質(zhì)之離心管。 
  1.5. glass pastuer pipet: 9 inch，用以抽掉廢棄培養(yǎng)液等。 
  1.6. 玻璃血清瓶Pyrex or Duran glassware：100ml, 250ml,500ml,1000ml 
2. 清洗? 2.1. 新購(gòu)玻璃血清瓶先以0.1~0.05 N HCl 浸泡數(shù)小時(shí)，洗凈后才開(kāi)始使用。 2.2. 用過(guò)之玻璃血清瓶，以高壓蒸汽滅菌，洗凈后分別用一次與二次去離子水沖洗干凈，勿加清潔劑清洗。 
3. 滅菌? 
  3.1. 實(shí)驗(yàn)用玻璃血清瓶以鋁箔紙包覆瓶蓋，高壓蒸汽滅菌121℃, 15 lb, 20 分鐘，置于oven 中烘干。 
  3.2. 實(shí)驗(yàn)用玻璃pasteur pipet 以干熱滅菌170℃, 4 小時(shí)。   
  3.3. 液體或是固體廢棄物可用10% hypochloride 溶液次氯酸，即漂白水 或是蒸汽高壓滅菌121℃, 15 lb, 20 分鐘處理。

培養(yǎng)基 
1. 液體培養(yǎng)基貯存于4℃冰箱，避免光照，實(shí)驗(yàn)進(jìn)行前放在37℃水槽中溫?zé)帷?nbsp;
2. 液體培養(yǎng)基加血清 存放期為六個(gè)月，期間glutamine 可能會(huì)分解，若細(xì)胞生長(zhǎng)不佳，可以再添加適量glutamine。 
3. 粉末培養(yǎng)基配制以1 升為例： 
  3.1. 細(xì)胞培養(yǎng)基通常須添加10% 血清，因此粉末培養(yǎng)基之配制體積為900ml，pH 為7.2 - 7.4。NaHCO3 為另外添加，若將NaHCO3 粉末直接加入液體培養(yǎng)基中會(huì)造成pH 之誤差，或局部過(guò)堿。因此粉末培養(yǎng)基及NaHCO3 粉末應(yīng)分別溶解后才混合，然后用CO2 氣體調(diào)整pH，而非用強(qiáng)酸HCl或強(qiáng)堿NaOH，因?yàn)槁入x子對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)可能有影響，且貯存時(shí)培養(yǎng)基的pH 易發(fā)生改變。   3.2. 材料： 
   3.2.1. 純水milli-Q 水或二次至三次蒸餾水，水品質(zhì)非常重要 
   3.2.2. 粉末培養(yǎng)基 
   3.2.3. NaHCO3 Sigma S-4019 
   3.2.4. 電磁攪拌器 
   3.2.5. 無(wú)菌血清瓶 
   3.2.6. 0.1 或0.2 mm無(wú)菌過(guò)濾膜 
   3.2.7. pH meter 
   3.2.8. 真空幫浦 
   3.2.9. CO2 氣體
  3.3. 步驟： 
   3.3.1. 取粉末培養(yǎng)基溶于700ml milli-Q 水中，攪拌使其溶解。 
   3.3.2. 稱取適量之NaHCO3 粉末數(shù)量依培養(yǎng)基種類而異，表一溶于200ml milli-Q 水中，攪拌使其溶解，然后通入CO2 氣體至飽和，約3-5 分鐘。 
   3.3.3. 將溶解且含飽和CO2 之NaHCO3 溶液加入溶解之液體培養(yǎng)基中混合。混后溶液之pH應(yīng)為7.2-7.4，除非pH 值偏差太大，否則不需用酸堿再調(diào)整之。若為太堿，可再通入CO2 氣體調(diào)整pH。培養(yǎng)基以真空幫浦通過(guò)過(guò)濾膜時(shí)，pH 會(huì)升高0.1-0.2。 
   3.3.4. 以0.1 或0.2 mm 無(wú)菌過(guò)濾膜過(guò)濾滅菌，同時(shí)分裝至無(wú)菌容器中，標(biāo)示培養(yǎng)基種類、日期、瓶號(hào)等，貯存于4℃。血清亦可加入培養(yǎng)基中一起過(guò)濾 
   3.3.5. 配制之培養(yǎng)基配制須作生長(zhǎng)試驗(yàn)與污染測(cè)試。 
4. 配制培養(yǎng)基之生長(zhǎng)測(cè)試 
4.1. 材料： 
4.1.1. MDCK cell ATCC CCL-34 或CCRC 60004 4.1.2. 6-well TC plate or 35 mm TC dish 
4.1.3. methanol 
4.1.4. glacial acetic acid 
4.1.5. 10% Giemsa solution GibcoBRL 10092-013 
4.2. 步驟： 
4.2.1. 以待測(cè)試培養(yǎng)基培養(yǎng)MDCK cell，接種MDCK 細(xì)胞于6-well plate 或35mm TC dish 中，每個(gè)well 接種1 × 102 活細(xì)胞，同時(shí)作對(duì)照組實(shí)驗(yàn)。 
4.2.2. 接種5～7 天后，在100 倍倒立顯微鏡作觀察細(xì)胞群落之生長(zhǎng)，待細(xì)胞群落大到可以肉眼觀察，而群落間不互相接觸時(shí)即可。 4.2.3. 去除培養(yǎng)基，加入1ml Carnoy’s 固定液甲醇：冰醋酸? 3:1，室溫下靜置10 min。 
4.2.4. 去除固定液，水洗二次。 
4.2.5. 加入1ml 10% Giemsa solution，，室溫下靜置染色2-3 min。
4.2.6. 去除染液，水洗二次。
4.2.7. 以肉眼計(jì)數(shù)群落數(shù)，并比較之，若新配制或新批號(hào)的培養(yǎng)基對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不佳，則丟棄之。
 

以上資料由www.xiangyikj.com 長(zhǎng)沙駿逸儀器有限公司提供
長(zhǎng)沙駿逸儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)制造離心機(jī)、實(shí)驗(yàn)室儀器的高科技企業(yè)。
長(zhǎng)沙駿逸儀器有限公司擁有一批經(jīng)驗(yàn)豐富的高級(jí)工程技術(shù)人員，專業(yè)從事離心機(jī)的設(shè)計(jì)、開(kāi)發(fā)和生產(chǎn)。
長(zhǎng)沙駿逸儀器有限公司生產(chǎn)、技術(shù)骨干均是多年從事離心機(jī)的設(shè)計(jì)行業(yè)的精英。
長(zhǎng)沙駿逸儀器有限公司所生產(chǎn)高速冷凍離心機(jī);冷凍離心機(jī);大容量離心機(jī);高速離心機(jī);低速離心機(jī)產(chǎn)品品種齊全，技術(shù)、性能穩(wěn)定、質(zhì)量可靠。歡迎垂詢!
地  址：湖南省長(zhǎng)沙市望城坡    郵編： 410205
電  話：0731-4742228
傳  真：0731-2641558
聯(lián)系人：楊先生13574189676    loveself520@yahoo.com.cn
                  田先生13974991641     tkyong888@yahoo.com.cn
個(gè)性化：centrifugeweb.chem17.com
網(wǎng)  址：www.xiangyikj.com



 

 

原創(chuàng)作者：長(zhǎng)沙駿逸實(shí)驗(yàn)儀器有限公司

相關(guān)產(chǎn)品

script>