材料、設(shè)備及試劑
　　 一、材料
　　 含pBS的E. coli DH5α或JM系列菌株，1.5ml塑料離心管(又稱eppendorf管),離心管架。
　　 二、設(shè)備
　　 微量取液器(20μl,200μl,1000μl)， 駿逸臺式高速離心機(jī)，恒溫振蕩搖床， 高壓蒸汽消毒器(滅菌鍋)， 渦旋振蕩器， 電泳儀，瓊脂糖平板電泳裝置和 恒溫水浴鍋等。
　　 三、試劑
　　 1、 LB液體培養(yǎng)基(Luria-Bertani) ：稱取蛋白胨(Tryptone)10 g，酵母提取物(Yeast extract) 5 g，NaCl 10 g，溶于800ml去離子水中，用NaOH調(diào)pH至7.5, 加去離子水至總體積1升,高壓下蒸氣滅菌20分鐘。
　　 2、LB固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基中每升加12g瓊脂粉,高壓滅菌。
　　 3、 氨芐青霉素(Ampicillin, Amp)母液：配成 50mg/ml水溶液, -20℃保存?zhèn)溆谩?
　　 4、 溶菌酶溶液： 用10mmol/L Tris?Cl(pH8.0)溶液配制成10mg/ml,并分裝成小份(如1.5ml)保存于-20℃,每一小份一經(jīng)使用后便予丟棄。
　　 5、 3mol/l NaAc (pH5.2)： 50ml水中溶解40.81g NaAc?3H2 O,用冰醋酸調(diào)pH至5.2, 加水定容至100ml, 分裝后高壓滅菌,儲存于4℃冰箱。
　　 6、 溶液Ⅰ：50 mmol/L 葡萄糖，25 mmol/L Tris.Cl (pH8.0)， 10mmol/L EDTA (pH8.0)。 溶液Ⅰ可成批配制,每瓶100ml,高壓滅菌15分鐘,儲存于4℃冰箱。
　　 7、溶液Ⅱ：0.2 mol/L NaOH (臨用前用10mol/L NaOH母液稀釋)，1％ SDS。
　　 8、溶液Ⅲ：5 mol/L KAc 60ml，冰醋酸 11.5ml， H2O 28.5ml，定容至100ml, 并高壓滅菌。溶液終濃度為: K+ 3mol/L, Acˉ 5mol/L。
　　 9、RNA酶A母液：將RNA酶A溶于10mmol/L Tris?Cl(pH7.5), 15mmol/L NaCl中,配成10mg/ml的溶液,于100℃加熱15分鐘,使混有的DNA酶失活。冷卻后用1.5ml eppendorf管分裝成小份保存于-20℃。
　　 10、飽和酚：市售酚中含有醌等氧化物,這些產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂及導(dǎo)致RNA和DNA的交聯(lián),應(yīng)在160℃用冷凝管進(jìn)行重蒸。重蒸酚加入0.1％的8-羥基喹啉(作為抗氧化劑),并用等體積的0.5mol/L Tris?Cl (pH8.0)和0.1mol/L Tris?Cl(pH8.0)緩沖液反復(fù)抽提使之飽和并使其pH值達(dá)到7.6以上,因?yàn)樗嵝詶l件下DNA會分配于有機(jī)相。
　　 11、 氯仿:按氯仿:異戊醇＝24:1體積比加入異戊醇。氯仿可使蛋白變性并有助于液相與有機(jī)相的分開,異戊醇則可起消除抽提過程中出現(xiàn)的泡沫。 　　按體積/體積＝1:1混合上述飽和酚與氯仿即得酚/氯仿(1:1)。酚和氯仿均有很強(qiáng)的腐蝕性，操作時應(yīng)戴手套。
　　 12、 TE緩沖液：10 mmo/L Tris?Cl (pH8.0)，1 mmol/L EDTA (pH8.0)。高壓滅菌后儲存于4℃冰箱中。
　　 13、STET：0.1 mol/L NaCl，10mmol/L Tris?Cl(pH8.0)，10 mmol/L EDTA (pH8.0)， 5% Triton X-100。
　　 14、STE：0.1mol/L NaCl，10mmol/L Tris?Cl(pH8.0)，1mmol/L EDTA (pH8.0)。
　　 15、 電泳所用試劑： （1） TBE 緩沖液 (5×)：稱取 Tris 54g，硼酸27.5g，并加入 0.5M EDTA (pH8.0) 20ml，定溶至1000ml。 （2）上樣緩沖液 (6×)：0.25% 溴酚藍(lán)，40% (w/v) 蔗糖水溶液。
 

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