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離心機的類型與實驗室常用離心機介紹
1.類型:實驗室用與工業(yè)用,間歇式與連續(xù)式,冷凍式與不冷凍式,地面式與桌式,普通離心機和高速離心機與超速離心機,制備式與分析式。
2.實驗室常用離心機:
普通離心機——臺式(3000-16000rpm)和地面式(3000-6000rpm),一般不帶冷凍設備,由電機和轉子所組成,轉速由電壓調節(jié)器調節(jié)。
高速冷凍離心機——臺式與地面式,18000-25000rpm,0-4℃。
上述+制冷設備及溫度檢測器。
超速離心機——地面式,達30000rpm,0-4℃。
上述+真空設備及真空檢測器。
3.轉子:角式與水平式轉子,角式常用于沉降離心,水平式還常用于梯度離心。
4.離心原理:利用轉子高速旋轉時所產生的強大離心力,加速顆粒的沉淀速度,把樣品中不同沉降系數(shù)或浮力密度的物質分離開。
F=ω2ω2r。ω是角速度(弧度/秒)。r是顆粒的旋轉半徑(厘米)
F是任何顆粒所經受的向外離心力。
RCF=ω2r/980,RCF是相對離心力,單位為G;980是地心引力,單位為厘米/秒?。
RCF=⒈119×10-5n2r,n為每分鐘的轉數(shù)。
處于離心管內不同位置的顆粒所受的離心力不同,常以離心管中點至旋轉中心距離為r時所得到相對離心圖表示為平均離心力。
離心力的計算使不同轉速和不同離心半徑的離心,統(tǒng)一到相同的離心中去衡量顆粒在離心中所受外加作用力的大小,以利用因不同離心機,不同轉子在使用中所選擇的離心時間和轉速。
離心時間:t=[(㏑r2-㏑r1)/ω2]/s
t為樣品顆粒完全沉降到離心管底的時間(秒).
S為沉降系數(shù).
r2為旋轉軸中心到離心管底部的距離(厘米).
r1為旋轉軸中心到樣品液液面的距離(厘米).
5.離心方法:
(1)差速離心法:定義,應用于沉降系數(shù)相差一~幾個數(shù)量級顆粒的分離。
缺點:a.分離效果差,不能一次得到純顆粒,經再懸浮和再離心(2~3次),才能得到較純的顆粒。
b.壁效應嚴重,在離心管一側會出現(xiàn)沉淀。
c.顆粒被擠壓,可能變形,聚集而失活。
(2)梯度離心:定義,應用于相差較少(20%或更少)或分子量相差三倍的蛋白質。
優(yōu)點:a.分離效果好,可一次獲得較純顆粒。
b.適應范圍廣,能象差速離心法一樣分離具有沉降系數(shù)差的顆粒,又能分離有一定浮力密度差的顆粒。
c.顆粒不會擠壓變形。
缺點:離心時間較長;需要制備梯度;操作嚴格,不易掌握。
常用的密度梯度離心方法有:蔗糖密度梯度離心;氯化銫等密度梯度離心。
6.普通離心機使用注意事項:
(1).離心機要置水平位置,以保證旋轉軸垂直地球水平面。
(2).使用前應檢查套環(huán)是否平衡(臺稱)。
(3).離心杯及其外套(離心管套)是否平衡(臺稱)。
(4).樣品傾入離心杯后應與離心管套一起兩兩平衡,平衡后把它們放置于轉子的對稱位置。
(5).蓋好蓋子,打開電源開關,調整離心時間。
(6).啟動離心時轉速應由小至大,緩慢升速(一般要2~3min)。
(7).達到預定轉速后再調整離心時間至預定時間(10min)。
(8).離心完成后要調整調速連桿至零位,同時關上電源。
(9).要等到轉速為零時才能打開離心機蓋,取出樣品。
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