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離心機(jī)在兩棲動(dòng)物血細(xì)胞培養(yǎng)的染色體觀察中必備

點(diǎn)擊次數(shù):654 發(fā)布時(shí)間:2008/9/10 22:49:43
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/strong>
1、掌握兩棲動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法。
2、對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)獲得的染色體進(jìn)行觀察。
3、提高學(xué)生實(shí)驗(yàn)素質(zhì),培養(yǎng)學(xué)生學(xué)研究和創(chuàng)造性能力。
二、實(shí)驗(yàn)條件:
1、材料:兩棲動(dòng)物(蟾蜍)
2、儀器:顯微鏡、超凈工作臺(tái)、培養(yǎng)箱、離心機(jī)、恒溫水浴鍋、冰凍玻片、離心管(10ml) 、注射器、針頭(5號(hào))、吸管、酒精燈、微孔濾器、濾膜、培養(yǎng)瓶、解剖盤(pán)、解剖剪、鑷子、量筒等。
3、藥品:0.2%肝素鈉、RPMT1640培養(yǎng)基、植物血凝素( PHA )、0.1%秋水仙素、0.075M KCl、固定液(甲醇:冰醋酸=3:1)、Giemsa染液、磷酸緩沖液(PH7.4) 等。
4、培養(yǎng)基:(1)RPMI1640培養(yǎng)基     4ml
          (2)小牛血清           1ml
          (3)雙抗(青霉素和鏈霉素)各 2.5μl
(青霉素和鏈霉素濃度20萬(wàn)U/ml)
          (4) PHA    0.15ml (濃度1mg/ml) 用5%NaHCO3調(diào)PH值為7.2,過(guò)濾滅菌。
三、實(shí)驗(yàn)要求:
1、選擇染色體清晰,分散好的中期分裂相,計(jì)數(shù)染色體,顯微攝影、并打印出照片。
2、分析成功或失敗的原因。
3、PHA的作用是什么?本次實(shí)驗(yàn)為什么低滲溫度選擇26℃,而在小鼠骨髓細(xì)胞染色體制片中低滲溫度選擇在38 ℃?
4、寫(xiě)出實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
四、使用說(shuō)明
血細(xì)胞培養(yǎng)是制備人和珍稀、瀕危動(dòng)物等染色體標(biāo)本的主要方法,動(dòng)物外周血淋巴細(xì)胞一般情況下不進(jìn)行分裂。如果在培養(yǎng)液中加入一種強(qiáng)有力的有絲分裂原----植物血凝素(PHA),這種淋巴細(xì)胞受到刺激可轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞,進(jìn)入有絲分裂。
實(shí)驗(yàn)方案、步驟由同學(xué)自己設(shè)計(jì)。
 

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