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技術(shù)文章

限時提供各項科研服務(wù)

點擊次數(shù):459 發(fā)布時間:2019/9/9 9:41:48
 科研服務(wù)

1. 基因克隆服務(wù):

   基因克隆是指從樣本組織或細胞中抽提總RNA,反轉(zhuǎn)錄,設(shè)計合成特異性引物后,通過RT-PCR擴增獲得目的基因的DNA序列,獲得編碼全長蛋白質(zhì)序列的DNA序列。根據(jù)特定序列設(shè)計特異性引物,通過PCR方法從組織或細胞中調(diào)取目的基因、克隆到 T 載體并進行測序。服務(wù)范圍包含TA克隆構(gòu)建定向克隆構(gòu)建、基因3’RACE克隆、基因5’RACE克隆等基因克隆服務(wù)。

 

2. 熒光定量PCR服務(wù):

   熒光定量PCR是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。其原理是隨著PCR反應(yīng)的進行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加,這樣就可以通過熒光強度的變化來對PCR反應(yīng)進行實時的監(jiān)測。熒光定量檢測根據(jù)所使用的標記物不同可分為熒光染料法和熒光探針法。熒光染料SYBR Green嵌入到雙鏈DNA分子后構(gòu)象發(fā)生變化,能夠吸收497nm的激發(fā)光并發(fā)出520nm的熒光;而不摻入DNA雙鏈中的染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。TaqMan 熒光探針是在擴增時加入一個特異性的寡核苷酸熒光探針,兩端分別標記一個報告熒光基團和一個淬滅熒光基團。探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq 酶的 5'-3' 外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。服務(wù)內(nèi)容包括:核酸定量分析、基因表達差異分析、甲基化檢測、SNP檢測、腫瘤基因檢測、藥物療效考核、產(chǎn)前診斷和病原體檢測等相關(guān)檢測分析。

 

3. SNP檢測服務(wù)

人類基因多態(tài)性既來源于基因組中重復(fù)序列拷貝數(shù)的不同,也來源于單拷貝序列的變異。其中單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms,SNPs),目前倍受關(guān)注的一類多態(tài)性主要是指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中*常見的一種。占所有已知多態(tài)性的90%以上。我們將會按客戶要求靈活定制SNPs分型方案,提供多種技術(shù)平臺,滿足不同規(guī)模項目的需求。技術(shù)平臺主要有:測序分型SNP分析的金標準,可發(fā)現(xiàn)未知SNP位點;但成本較高,工作量大周期長,不適合大樣本做疾病關(guān)聯(lián)分析。②PCR-RFLP分型:判斷依據(jù)酶切后產(chǎn)生片段的大小和數(shù)目的變化,技術(shù)簡便,價格便宜,僅使用已知SNP判斷,事宜少量樣本;但費時費力,靈敏度差,容易造成人工假相,使結(jié)果出現(xiàn)偏差。③Taqman 探針分型:適合已知SNP位點、位點數(shù)量少、通量高的檢測,結(jié)果直觀清晰,實驗閉管進行,因而減少了PCR污染的風險;但探針合成費用高,不能發(fā)現(xiàn)未知SNP位點。④飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)分型:檢測速度快,理論上能分析單個堿基的變化;但純物理加成易受到樣本因素的多種干擾,精確度難以保證。全基因組分型芯片:起始樣品量要求很低,還能夠檢測多個感興趣的區(qū)域,從

而檢出罕見的基因突變;價格昂貴。

 

4. DNA甲基化檢測服務(wù)

DNA甲基化是*早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式,真核生物中的甲基化往往僅發(fā)生于胞嘧啶,即在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)的作用下使CpG二核苷酸5'-端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?/font>5'-甲基胞嘧啶。通常情況下,DNA甲基化能夠抑制基因的表達,而去甲基化則會誘導(dǎo)基因的重新活化和表達。通過這種DNA修飾方式可以在不改變基因序列前提下實現(xiàn)對基因表達的調(diào)控。人DNA的甲基化狀態(tài)與生長發(fā)育調(diào)控密切相關(guān),比如抑癌基因通過增加CpG島以外的CpG序列非甲基化程度,而CpG島中的CpG則呈高度甲基化狀態(tài),這樣將導(dǎo)致抑癌基因表達的下降,引起腫瘤的發(fā)生。甲基化檢測的研究應(yīng)用:1. 尋找甲基化位點;2. 驗證甲基化位點,并進行甲基化程度分析3. 分析甲基化位點與研究的相關(guān)性;4.啟動子甲基化檢測來驗證基因的表達量變化

 

5. cDNA文庫構(gòu)建服務(wù)

SMART技術(shù)的出現(xiàn)是一個新的里程碑,這個稱作 Switching Mechanism At 5 end of the RNA Transcript(SMART),能使我們擴增得到的cDNA就是全長cDNA;同時結(jié)合本公司文庫均一化技術(shù)和消減文庫技術(shù),特提供例如:普通cDNA文庫、SMART cDNA文庫均一化(NormalizedcDNA文庫、SMART 均一化cDNA文庫、SMART cDNA消減文庫等基因文庫構(gòu)建服務(wù)。SMART cDNA文庫特點:1. 只需要少至25ngmRNA50ng的總RNA
2. 采用Clontech SMART技術(shù),全長比率高3. 實驗周期短,*快23周即可完成整個文庫構(gòu)建SMART cDNA文庫應(yīng)用:1.物種種質(zhì)資源開發(fā)與保護;2.物種遺傳功能分析3.基因克隆與表達;4.新基因發(fā)現(xiàn);5.功能基因的篩選。

 

6. SSH文庫構(gòu)建服務(wù)

   抑制性消減雜交文庫技術(shù)是一種集抑制消減雜交、基因文庫和斑點雜交等技術(shù)為一體的、突破性的差異表達基因高效篩選技術(shù),與傳統(tǒng)的DD-PCR、SAGEcDNARDA等技術(shù)相比,具有低豐度mRNA富集效率高、假陽性低、靈敏度高、重復(fù)性好等特點。本服務(wù)方法結(jié)合了抑制性PCR和消減雜交技術(shù),同時融入我公司自主創(chuàng)新研發(fā)的基因文庫技術(shù),經(jīng)過體系不斷優(yōu)化,建立起了一套快捷、有效的差異基因全長cDNA篩選的方法。技術(shù)特點:只需要0.5-2 μgpoly A RNA 或只需50 ngRNA 可以在物種遺傳信息未知情況下進行多樣本差異基因高通量篩選,尤其適用于非模式生物(植物\昆蟲\魚類等)研究 
通量差異基因以克隆形式獲得保存,方便后續(xù)實驗研究(測序、RACE、引物設(shè)計等)應(yīng)用領(lǐng)域:動、植物發(fā)育和分化研究;動、植物抗藥性基因差異;組織(病理和正常)基因差異;疾病易感性差異研究;微生物基因分型研究。

 

7. 噬菌體表面展示服務(wù)

   噬菌體展示技術(shù)主要原理以改構(gòu)的噬菌體為載體,把待選基因片段定向插入噬菌體外殼蛋白質(zhì)基因區(qū),使外源多肽或蛋白質(zhì)表達并展示于噬菌體表面,進而通過親和富集法表達有特異肽或蛋白質(zhì)的噬菌體。該技術(shù)作為篩選與多種靶分子 ( 如核酸、抗體、酶類、細胞表面受體等 ) 具有特異性親和力或活性的肽的一個有效方法,自問世以來已取得了很大的發(fā)展 并被廣泛地應(yīng)用于基因治療、基因疫苗研究、抗原表位研究、藥物篩選與設(shè)計、研究細胞信號傳導(dǎo)等領(lǐng)域。技術(shù)優(yōu)勢:形成的融合蛋白表達在噬菌體顆粒的表面,不影響和干擾噬菌體的生活周期,同時保持的外源基因天然構(gòu)象能被相應(yīng)的抗體或受體所識別。 外源多肽或蛋白質(zhì)表達在噬菌體的表面,而其編碼基因作為病毒基因組中的一部分可通過噬菌體的單鏈DNA測序推導(dǎo)出來該技術(shù)實現(xiàn)了基因型和表型的轉(zhuǎn)換。與酵母雙雜交和雜交瘤細胞技術(shù)相比,噬菌體展示系統(tǒng)在篩選蛋白質(zhì)間相互作用和分泌抗體時更為簡便、高通量,更適合于不能用酵母雙雜交研究的膜蛋白和轉(zhuǎn)錄因子,并且無需了解被研究的蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),,在篩選過程中通過適當改變條件可以直接評價相互結(jié)合的特異性。應(yīng)用領(lǐng)域:DNARNA 結(jié)合蛋白的研究;蛋白-蛋白相互作用的研究;非蛋白分子與蛋白相互作用研究;胞與蛋白相互作用的研究;用于模擬表位的研究;藥物篩選與導(dǎo)向;抗體疫苗制備服務(wù)項目:1. 酵母展示文庫構(gòu)建;2. 噬菌體展示文庫構(gòu)建;3. 大腸桿菌展示文庫構(gòu)建;4. 展示文庫淘選服務(wù)。

8. 酵母雙雜服務(wù)

   酵母雙雜交系統(tǒng)是將待研究的兩種蛋白質(zhì)的基因分別克隆到酵母表達質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄激活因子(GAL4)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域基因,構(gòu)建成融合表達載體,從表達產(chǎn)物分析兩種蛋白質(zhì)相互作用的系統(tǒng)。同以往研究蛋白質(zhì)—蛋白質(zhì)之間相互作用的實驗手段相比,雙雜交系統(tǒng)具有其獨特優(yōu)勢。首先,融合體蛋白之間的相互作用是在真核酵母細胞內(nèi)進行,蛋白質(zhì)有可能保持天然的折疊狀態(tài),類似其在體內(nèi)生理狀態(tài)下的情況,這是其他離體生化檢驗方法所缺乏的,因此較之后者,它所證實的蛋白質(zhì)間相互作用將更接近于在體的真實水平。其次,雙雜交系統(tǒng)的敏感度即高,可以檢測到在蛋白質(zhì)之間結(jié)合常數(shù)低至 1mmol/L 左右的微弱作用。許多微弱或短暫的蛋白質(zhì)之間的相互作用可以借助報道基因表達過程中的多級放大效應(yīng)反映出來;融合蛋白基因在強啟動子的作用下,處于較高的表達水平。第三,在篩選 cDNA 文庫時,雙雜交系統(tǒng)能夠簡捷地得到編碼相互作用蛋白的基因序列,它只需構(gòu)建質(zhì)粒而不必準備抗體或純化蛋白,省略了其它體外檢測蛋白之間相互作用方法所必須的蛋白抽提、純化等繁瑣步驟。酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用:1、高靈敏度地檢測蛋白-蛋白的交互作用;2、尋找在蛋白-蛋白交互作用中起關(guān)鍵作用的結(jié)構(gòu)域或活性位點;3、尋找與靶蛋白相互作用的新蛋白;4、尋找具有藥物治療作用的小分子多肽;5、尋找調(diào)控蛋白質(zhì)相互作用的化合物;6、繪制蛋白質(zhì)相互作用圖譜。

 

 

原創(chuàng)作者:上海一基實業(yè)有限公司

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