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（請(qǐng)以英文為準(zhǔn)，中文僅供參考）

試劑盒特點(diǎn)【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

1.AP單克隆抗體特異地與AP結(jié)合，和其它結(jié)構(gòu)相類似的化學(xué)物質(zhì)不發(fā)生交叉反應(yīng)。單克隆抗體質(zhì)量穩(wěn)定每批次見(jiàn)幾乎沒(méi)有變化。

2.檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L (ppb) 。通過(guò)固相萃取濃縮可以檢測(cè)更低的濃度。

3.這個(gè)試劑盒有很高的重復(fù)性，變異系數(shù)在10%之內(nèi)。

4.操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程僅花費(fèi)2.5小時(shí)

5.試劑盒的形式是96孔微孔板，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品，花費(fèi)合理。

檢測(cè)原理 （競(jìng)爭(zhēng)ELISA）

1. 競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)

這個(gè)檢測(cè)方法依靠單克隆抗體來(lái)識(shí)別AP。樣品中的AP和一個(gè)AP-酶結(jié)合物預(yù)先混合然后加入到每個(gè)微孔中競(jìng)爭(zhēng)包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中AP的濃度如果高于AP-酶結(jié)合物，AP將主要與抗體結(jié)合。反之樣品中AP的濃度如果低于于AP-酶結(jié)合物，AP-酶結(jié)合物將主要與抗體結(jié)合。

2. 顯色反應(yīng)

通過(guò)洗滌步驟去除沒(méi)有反應(yīng)的AP和過(guò)多的AP-酶結(jié)合物。通過(guò)加入底物來(lái)檢測(cè)AP。和微孔板中抗體結(jié)合的AP-酶結(jié)合物催化底物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過(guò)一個(gè)孵育期用稀酸終止反應(yīng)。樣品中AP的濃度越高導(dǎo)致結(jié)合到微孔板抗體上的AP-酶結(jié)合物越少，從而產(chǎn)生的顏色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析

利用已知濃度的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應(yīng)曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線）。把樣品的吸光度值用內(nèi)插法插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以精確的計(jì)算出樣品中AP的濃度。

AP 檢測(cè)流程【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

1.樣品處理

在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。過(guò)濾樣品，加入甲醇和DMSO使甲醇的*終濃度為10% (v/v),DMSO的*終濃度為1%(v/v)。對(duì)于一些樣品進(jìn)行固相萃取是必要的。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液

利用甲醇溶液（甲醇：水 0.8：8.2）把AP標(biāo)準(zhǔn)濃縮液稀釋10倍。然后對(duì)此溶液進(jìn)一步稀釋成設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度（5μg/L- 500μg/L）。在配制的時(shí)候先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)。

3. 抗原-酶結(jié)合物溶液

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 緩沖液(#4, 白蓋).

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒(méi)有包被的微孔板中(#8)混合100μL AP標(biāo)準(zhǔn)（或樣品）和100μL酶結(jié)合物溶液。先加結(jié)合物后加標(biāo)準(zhǔn)或樣品。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）：1ml 洗液(#5) + 5ml蒸餾水

7. 沒(méi)有結(jié)合的物質(zhì)

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的排板出去微孔中的液體。

8. 顯色

每個(gè)微孔加入100μL顯色試劑(#6, 棕色瓶)，在室溫(18-25°C)孵育30分鐘。然后加入每孔再100μL的終止液(#7, 黑蓋)終止反應(yīng)。

10. 定量

在450nm測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。利用內(nèi)插法把樣品的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中AP的含量。

所需材料【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

必需 – 樣品濃縮時(shí)不需要

1.一次性玻璃試管(e.g. IWAKI, item No. 9831-1207)確保要使用一次性試管避免AP的吸附作用

2.玻璃纖維濾器(e.g. ADVANTEC Co., item No. 36481047 Φ47mm)和過(guò)濾設(shè)備

3.微量加液器(20μL - 200μL 和100μL - 1000μL, e.g. Gilson Pipetman P-200, P-1000)和吸頭

(e.g. ICN Superpack 96NS)

4.排槍(50μL - 300μL)

5.酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）(e.g. TECAN Sunrise Remote)

6.計(jì)時(shí)器

7.Strip ejector (e.g. COSTAR, No.2578)

8.甲醇Methanol (HPLC grade)

9.DMSO(HPLC grade)

2）必需- 通過(guò)SPE 濃縮時(shí)需要

n         以上的材料都需要,再加上下面的材料

n         固體萃取柱(e.g. NEXUS SPE Cartridge Producer: VARIAN PART#:1210-3102 ABS ELUT- NEXUS, 200MG 6ML,30/PK)

n         丙酮(HPLC grade)

n         二氯甲烷(analytical reagent)

3、重要性

如果在試驗(yàn)過(guò)程中使用一些沒(méi)有使用過(guò)的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品試劑時(shí)需要做比較試驗(yàn)。

檢測(cè)步驟【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

重要性

1.僅用于研究、不用于個(gè)人

2.在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。

3.不同試劑盒的中的試劑不要混用

4.儲(chǔ)存在2-8 °C

5.不使用過(guò)期產(chǎn)品

6.使用完試劑盒后根據(jù)當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)處理廢液。

7.為了增加準(zhǔn)確性推薦在檢測(cè)中做兩個(gè)重復(fù)。

注意

在試驗(yàn)中要穿保護(hù)性衣服，戴手套和眼鏡保證和試劑盒中的液體接觸。

1．樣品前處理

利用特定的玻璃纖維濾紙(1μm 孔徑)過(guò)濾水樣，加入DMSO和甲醇使DMSO終濃度為1% (v/v)、甲醇終濃度

為10% (v/v)。如果濾液要求濃縮和清洗需要固相萃取。

例子

1）將上面制備濾液過(guò)NEXUS cartridge柱（已經(jīng)用二氯甲烷(ex. 10ml)、甲醇(ex. 5ml)、蒸餾水(ex. 5ml)提前處理好的），流速10mL/min

2）用蒸餾水(ex. 5ml)和50%蒸餾水/甲醇(ex. 5ml)洗柱。真空干燥柱不超過(guò)45分鐘。

3）用二氯甲烷(ex. 6ml)洗脫分析物、然后用氮?dú)猓ㄔ?0攝氏度或更低的溫度）吹干。

4）加入甲醇和DMSO溶液溶解殘留物，調(diào)節(jié)溶液的終濃度到1%DMSO和10%甲醇溶液。

2.  標(biāo)準(zhǔn)溶液

制備甲醇溶液（甲醇：蒸餾水=0.8 ml/8.2ml）以備稀釋標(biāo)準(zhǔn)(#2, 10% v/v DMSO, 20% v/v

methanol)使用。利用上面制備的甲醇溶液以1：9的比例稀釋AP標(biāo)準(zhǔn)(#2)來(lái)配制設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液(1% v/v DMSO, 10% v/v methanol)。

1）在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的過(guò)程中先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)(#2)。這樣可以減少AP對(duì)試管壁的吸附。

2）推薦使用一次性玻璃試管來(lái)稀釋標(biāo)準(zhǔn)，可以減少吸附和污染。

3）如果不經(jīng)過(guò)10倍稀釋儲(chǔ)存液的步驟直接稀釋到設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，那么標(biāo)準(zhǔn)的真實(shí)濃度將要比計(jì)劃的濃度要大，所測(cè)定的吸光度的值要小0.2-0.5。確保要先稀釋10倍。

4） 在測(cè)定前制備AP標(biāo)準(zhǔn)溶液，一旦標(biāo)準(zhǔn)溶液從濃縮的狀態(tài)稀釋后就不再穩(wěn)定了，不易保存很長(zhǎng)時(shí)間。每個(gè)檢測(cè)過(guò)程都要配制新的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5） 用移液器吸頭混勻，不要渦旋震蕩器用劇烈震蕩來(lái)減少樣品中AP對(duì)試管壁表面的吸附。

6） 在使用完之后要確保標(biāo)準(zhǔn)濃縮液的蓋擰緊并放在冰箱，標(biāo)準(zhǔn)溶液必須被密封或把蓋擰緊以免甲醇揮

發(fā)。

7）保證標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度為10%。過(guò)高的甲醇濃度可以損害抗體，太低的濃度導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)不正確。

8）不要隨意處理試驗(yàn)廢液，要按當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)來(lái)處理。

3. 抗原-酶結(jié)合物

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 7ml緩沖液(#4, 白蓋)。

1.配制好的溶液要儲(chǔ)存在2-8°C，可以穩(wěn)定地保存2周。

2.  7mL足夠50個(gè)孔使用。

3.         用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

4.在使用的時(shí)候配制。

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒(méi)有包被抗體的微孔板中(#8)加入100ul酶結(jié)合物溶液，然后再加入100ul在第二步中配制的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液或100μL樣品（制備的1% (v/v) DMSO 和10 % (v/v) 的甲醇溶液）。用移液器吸頭混勻。

1.首先加入結(jié)合物溶液然后加入標(biāo)準(zhǔn)或樣品避免孔的內(nèi)表面的非特異性吸附。

2.用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

3.用1% DMSO 和10%的甲醇溶液做一個(gè)空白。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，輕輕是震蕩微孔板使其內(nèi)部的液體混勻，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

1.包被抗體的酶標(biāo)板共有12條，每條有8個(gè)孔，在檢測(cè)前取出所需的孔。然后把不用的再重新放好。

2.在轉(zhuǎn)移液體時(shí)要確保不產(chǎn)生氣泡，因此操作要輕。

3.用膠帶覆蓋微孔板避免污染和液體揮發(fā)。

4.在反應(yīng)期間不要移動(dòng)和振動(dòng)微孔

5.溫度控制在18-30°C

6.嚴(yán)格反應(yīng)時(shí)間

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）(#5)：20ml 洗液(#5) + 100ml蒸餾水 。每次檢測(cè)配制所需體積的溶液，每個(gè)孔每次要求1.2mL的洗液，整個(gè)板需要120 mL。洗液要保存在2-8°C，在配制后大約可以穩(wěn)定保持一個(gè)月的時(shí)間。

7. 沒(méi)有結(jié)合的試劑

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并多重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的拍板除去微孔中的液體。

1.要確保除去任何遺留液體，否則可能引起測(cè)量錯(cuò)誤。

2.確保微孔板底部干凈，不要有手印或其它污垢，否則吸光度將有很大改變。

3.不要傾倒任何沒(méi)有處理的廢液，例如：浸泡的布或紙要燃燒掉。

8. 顯色反應(yīng)

在每個(gè)微孔中加入100ul顯色液(#6, brown vessel)。在室溫下孵育30min。然后每個(gè)微孔加入100ul終止液(#7,黑蓋)終止反應(yīng)。

1.孵育溫度控制在18-30°C

2.要使每個(gè)孔的反應(yīng)時(shí)間一致，尤其在測(cè)試多個(gè)樣品的時(shí)候

3.加入終止液后孔中的藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色

9. 定量【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

在450nm用酶標(biāo)儀測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品的吸光度值。

1.在終止反應(yīng)15分鐘內(nèi)測(cè)定吸光度值。

2.每次檢測(cè)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)至少做兩個(gè)重復(fù)。

3.確保微孔底面沒(méi)有手印和污物，否則測(cè)定的吸光度值有很大的改變。

4.樣品的檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L，樣品中AP的濃度超過(guò)500μg/L時(shí)要用10%甲醇+1% DMSO稀釋后再測(cè)定。對(duì)于完全不知情的樣品做前處理時(shí)要做遠(yuǎn)不止一倍的稀釋。

計(jì)算樣品中AP濃度的方法

（1）電腦計(jì)算

利用酶標(biāo)儀分析軟件，用Log-Log (or Log-Linear)曲線。

（2）利用附帶的曲線圖計(jì)算

9243775       QIAsymphony AS Custom Protocol Advanced2           CNY                           

9019447       Sensor brd 4 CH temp sensor         CNY                           

9019444       Electrolytic capacitor 8000uF x 63V        CNY                           

9018158       Waste station, waste drawer, Qsym        CNY                            【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

9018154       Bottle, waste drawer, Qsym             CNY                           

9018135       Sensor, xz, et/hs, Qsym            CNY                           

9018132       Splash guard, extractor, Qsym        CNY                           

9017720       Appl. Pack Investigator for Univ.PF         CNY                           

9017832       Sensor, tip check, QIAC            CNY                           

9017830       Power entry port, QIAC             CNY                           

9017828       Power supply, 230 V, QIAC              CNY                           

9017821       Board, main, QIAC             CNY                           

9017820       Flexcircuit, display, 40 pol. , QIAC          CNY                           

9017812       Board, centrifuge (240V), QIAC              CNY                           

4846024       careUU PCR ASSAY          CNY                           

4861024       careEBV PCR ASSAY II            CNY                           

130906  NeXtal DWBlock MPD Suite             CNY                           

4518265       artus HCV RG RT-PCR Kit (96) CE        CNY                           

130720  NeXtal Tubes JCSG+ Suite              CNY                           

129114  Nuclease-Free Water (10 x 50 ml)          CNY                            【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

4504065       artus Parvo B19 LC PCR Kit (96) CE             CNY                           

120025  TurboFilter 96 Plates (96) 96 TurboFilter 96 Plates    CNY                           

4505065       artus HAV LC RT-PCR Kit (96) CE         CNY                           

4506063       artus HBV LC PCR Kit (24) CE        CNY                           

75742    RNeasy Fibrous Tissue Midi Kit (10)       10 RNeasy Midi Spin Columns, Collection Tubes (15 ml), Proteinase K, RNase-free DNase I, RNase-free Reagents ａnd Buffers    CNY                           

74181    RNeasy 96 Kit (4)       For 4 x 96 total RNA preps: 4 RNeasy 96 Plates, Elution Microtubes CL (1.2 ml), Caps, RNase-free Reagents ａnd Buffers   CNY                           

28053    MinElute 96 UF PCR Purification Kit (24)       24 MinElute 96 UF PCR Purification Plates    CNY                           

74121    RNeasy Protect Starter Kit RNAlater RNA Stabilization Reagent (20 ml), 6 RNeasy Mini Spin Columns, 2 RNeasy Midi Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers    CNY                           

74104    RNeasy Mini Kit (50)   50 RNeasy Mini Spin Columns, Collection Tubes (1.5 ml ａnd 2 ml), RNase-free Reagents ａnd Buffers   CNY                           

72251    TurboCapture 96 mRNA Kit (5) For rapid ａnd easy mRNA purification in high-throughput applications. The kit provides a fast ａnd simple procedure for purifying mRNA. Up to 96 samples can be processed simultaneously - ideal for high-throughput applications such as compound screening ａnd target validation (e.g. by siRNA screening).       CNY                           

19407    VacConnectors (500) 500 disposable connectors for use with QIAamp spin columns on luer connectors. Should be ordered in conjuntion with 19408 - VacValves (24).      CNY                           

12281    QIAfilter Plasmid Mega Kit (5)   5 QIAGEN-tip 2500, Reagents, Buffers, 5 QIAfilter Mega-Giga Cartridges       CNY                           

12191    QIAGEN Plasmid Giga Kit (5)    5 QIAGEN-tip 10000, Reagents, Buffers CNY                           

QY-G270      轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞       COS-7 SV40       成纖維細(xì)胞    貼壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G271      狗腎細(xì)胞       MDCK  上皮細(xì)胞       貼壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G272      豬動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞    PIEC      上皮細(xì)胞       貼壁       RPMI-1640    小牛血清      

QY-G273      豬干細(xì)胞       MSCs     上皮細(xì)胞       貼壁       DMEM（低糖）    胎牛血清      

QY-G274      人腎上皮細(xì)胞       HK-2      上皮細(xì)胞       貼壁       DMEM/F12    胎牛血清      

QYC01   鹽酸克倫特羅(瘦肉精）快速檢測(cè)卡  20T/盒   各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC02   萊克多巴胺快速檢測(cè)卡       20T/盒   各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC03   沙丁胺醇快速檢測(cè)卡    20T/盒   各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC04   β-興奮劑快速檢測(cè)卡  20T/盒   各種動(dòng)物肌肉組織、肝臟、尿液、血清、飼料等                        

QYC05   三聚氰胺快速檢測(cè)卡    20T/盒   水產(chǎn)、牛奶、奶粉                           

QYC06   孔雀石綠快速檢測(cè)卡    20T/盒   水產(chǎn)、飼料等                            【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

QYC07   呋喃唑酮代謝物快速檢測(cè)卡       20T/盒   水產(chǎn)、飼料等                           

QYC08   呋喃它酮代謝物快速檢測(cè)卡       20T/盒   水產(chǎn)、飼料等                           

QYC09   呋喃妥因代謝物快速檢測(cè)卡       20T/盒   水產(chǎn)、飼料等                           

QYC10   呋喃西林代謝物快速檢測(cè)卡       20T/盒   水產(chǎn)、飼料等                           

QYC11   氯霉素快速檢測(cè)卡       20T/盒   水產(chǎn)、蜂蜜、牛奶、奶粉                        

QYC12   磺胺類多殘留快速檢測(cè)卡    20T/盒   蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC13   阿維菌素、伊維菌素快速檢測(cè)卡       20T/盒   蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC14   氟喹諾酮類快速檢測(cè)卡       20T/盒   蜂蜜、牛奶、奶粉                           

QYC15   己烯雌酚快速檢測(cè)卡    20T/盒   水產(chǎn)、蜂蜜、飼料等                        

QYC16   氟喹諾酮總量檢測(cè)卡    20T/盒   水產(chǎn)、蜂蜜、飼料等                        

QYC17   磺胺類多殘留檢測(cè)卡    20T/盒   水產(chǎn)、蜂蜜、飼料等                        

QYC18   黃曲霉毒素B1快速檢測(cè)卡        20T/盒   谷物、牛奶、奶粉                           

QYC19   黃曲霉毒素M1快速檢測(cè)卡       20T/盒   谷物、牛奶、奶粉                           

QYC20   青霉素快速檢測(cè)試紙卡      20T/盒   谷物、牛奶、奶粉                           

QYC21   β內(nèi)酰胺類快速檢測(cè)試紙卡      20T/盒   谷物、牛奶、奶粉                           

QYC22   紅霉素快速檢測(cè)試紙卡      20T/盒   谷物、牛奶、奶粉                            【苯并芘檢測(cè)試劑盒】

QYC23   新霉素快速檢測(cè)試紙卡      20T/盒   谷物、牛奶、奶粉                           

QYC24   頭孢噻呋快速檢測(cè)試紙卡   20T/盒   谷物、牛奶、奶粉                           

QYC201 豬瘟抗體檢測(cè)卡    20T/盒   抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC202 豬口蹄疫檢測(cè)卡    20T/盒   抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC203 豬瘟抗原檢測(cè)卡    20T/盒   抗血清檢測(cè)診斷                        

QYC204 豬偽狂犬抗體快速檢測(cè)卡    20T/盒   抗血清檢測(cè)診斷