高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經(jīng)濟、環(huán)保。

產(chǎn)品概述

磺胺類試紙條酶聯(lián)免疫反應測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應原理，含有磺胺類試紙條(SEM)的抗體已經(jīng)包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結合。加入底物后，產(chǎn)物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標板（可拆式）                                            12×8 孔

標準液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應當在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設備或材料

1)      酶標儀(450 nm)

2)      恒溫培養(yǎng)箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標準品中含有磺胺類試紙條，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質(zhì)量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標準品的一致性，先添加標準品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標準品，降低影響標準品曲線質(zhì)量的風險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準備【磺胺類試紙條】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質(zhì)樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3h，培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現(xiàn)象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發(fā)開始。

稀釋倍數(shù)：2.0

3）雞蛋【磺胺類試紙條】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉蒸發(fā)開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

6）血清【磺胺類試紙條】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

檢測步驟

試劑的準備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標準品于所設定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應;

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數(shù)前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數(shù))。

10．結果計算【磺胺類試紙條】

（1）    分別計算標準、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標準或樣品吸光度值/零標準吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標，標準濃度為橫坐標建立標準曲線。

（3）    從標準曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

例如，肉類樣品的稀釋倍數(shù)是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

204545     QuantiTect Multiplex PCR Kit (1000)        "1x 25 ml Master Mix

1x 20 ml RNase free water"    CNY                             

133062     NeXtalStock Magnesium nitrate (200)              CNY                             

133061     NeXtalStock Magnesium formate (200)           CNY                             

870011     therascreen KRAS RGQ PCR Kit CE (24)            CNY                             

290055     mericon VTEC stx1/2 Kit (96)             CNY                             

204341     QuantiTect Probe PCR Kit (40)          "-Trial kit size: 40 x 50 µl rxns at an economical price

- 1x 1ml 2x Master Mix, 1x 2 ml RNase free water

For quantitative, real-time PCR ａnd two-step RT-PCR using sequence-specific probes."         CNY                             

9018392  Key, Data Review, grey, QIAxcel FA          CNY                             

9012271  Power Supply, 24V / 8Amp, (9194)           CNY                             

9001647  Rotor-Gene Q 5plex (w/o PC) System       Rotor-Gene Q 5plex (w/o PC) System includes the Rotor-Gene instrument ａnd installation. The Installation ａnd Introductory Training is an on-site service, conducted by a QIAGEN Service Specialist. It covers the handling of the Rotorgene-Q systems hardware ａnd trains the user on operation of the Rotorgene software. All travel ａnd labor cost included for Installation ａnd service documented on a GMP/GLP-compliant Field Service document.  CNY                             

9015332  Sensor, pressure, M48               CNY                             

9015324  Scrapers, M48 (6)              CNY                              【磺胺類試紙條】

133028     NeXtalStock CAPSO untit. (200)                 CNY                             

133027     NeXtalStock CAPS untit. (200)          CNY                             

129112     RNase-Free Water (12 x 1,9 ml)                CNY                             

81031       Plate Rotor 2 x 96    Rotor for 2 QIAGEN 96-well plates, for use with QIAGEN Centrifuges    CNY                             

80234       Allprep FFPE DNA/ RNA Kit (50)                CNY                             

74134       RNeasy Plus Mini Kit (50)          50 RNeasy Mini Spin Columns, 50 gDNA Eliminator Mini Spin Columns, Collection Tubes Rnase Free  Reagents ａnd Buffers   CNY                             

27106       QIAprep Spin Miniprep Kit (250)      For 250 high-purity plasmid minipreps: 250 QIAprep Spin Columns, Reagents, Buffers, Collection Tubes (2 ml)     CNY                             

20021       QIAEX II Gel Extraction Kit (150)     For 150 extractions: 3 x 0.5 ml QIAEX II Suspension, Buffers  CNY                             

69990       Stainless Steel Beads, 7mm               CNY                             

69975       TissueLyser 5 mm Bead Dispenser, 96-well      For dispensing 96 beads (5 mm diameter) in parallel       CNY                             

19505       QIAvac HiSpeed LS            CNY                             

19090       Buffer RPW (125ml)                   CNY                             

19082       Buffer ASL (4 x 140 ml)     560 ml Stool Lysis Buffer  CNY                             

19065       Buffer PE (concentrate)   100 ml Wash Buffer (5x concentrate for 500 ml buffer)  CNY                             

19052       Buffer P2 500 ml Lysis Buffer   CNY                             

12663       HiSpeed Plasmid Maxi Kit (25)          25 HiSpeed Maxi Tips, 25 QIAfilter Maxi Cartridges, 25 QIAprecipitator Maxi Modules plus Syringes, Reagents, Buffers      CNY                              【磺胺類試紙條】

12245       QIAfilter Plasmid Midi Kit (100)        100 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers, 100 QIAfilter Midi Cartridges CNY                            

12143       QIAGEN Plasmid Midi Kit (25) 25 QIAGEN-tip 100, Reagents, Buffers    CNY                             

11500       Ultrapure 500 (1)              CNY                             

10083       QIAGEN-tip 2500 (25)      25 columns; 2.5 mg column capacity       CNY                             

133268     NeXtalStock Pentaerythritol ethoxy.(200)                 CNY                             

990602     Elution Plate (10)               CNY                             

QKT0626  鈣測定試劑盒Ca    偶氮胂Ⅲ法                                         

QKT0627  視黃醇結合蛋白測定試劑盒RBP免疫比濁法                                                   【磺胺類試紙條】

QKT0628  糖化血紅蛋白測定試劑盒HbA1c膠乳凝集反應法                                                  

QKT0629  無機磷測定試劑盒p紫外比色法                                                       

QKT0630  結合膽紅素測定試劑盒BCBC-True       酶法                                              

QKT0631  腦脊液與尿蛋白CSF測定試劑盒                                               

QKT0632  α1微球蛋白測定試劑盒α1-MG免疫比濁法                                                 

QKT0633  尿微量白蛋白測定試劑盒mAlb免疫比濁法                                                     

QKT0634  乙型肝炎病毒核酸熒光定量檢測試劑盒                                                  

QKT0635  補體C3測定試劑盒C3免疫比濁法                                                   

QKT0636  補體C4測定試劑盒C4免疫比濁法                                                   

QKT0637  免疫球蛋白A測定試劑盒lgA免疫比濁法                                               

QKT0638  免疫球蛋白G測定試劑盒lgG免疫比濁法                                              

QKT0639  甘氨酰脯氨酸二肽氨基肽酶測定試劑盒GPDA連續(xù)監(jiān)測法                                                   

QKT0640  α-L-巖藻糖苷酶測定試劑盒AFUPNPF-兩點法                                                  

QKT0641  α-L-巖藻糖苷酶測定試劑盒AFUCNPF-連續(xù)監(jiān)測法                                                 

QKT0642  α-淀粉酶測定試劑盒AMY   EPS連續(xù)檢測法                                           

QKT0643  血管緊張素化酶測定試劑盒ACE兩點法                                                   【磺胺類試紙條】

QKT0644  乳酸脫氫酶測定試劑盒LDH-L      速率法                                         

QKT0645  肌酸磷酸激酶測定試劑盒CK速率法                                                

QKT0646  肌酸激酶同工酶測定試劑盒CK-MB速率法                                                      

QKT0647  超敏C-反應蛋白測定試劑盒H-CRP免疫比濁法                                                       

QKT0648  α-羥基丁酸脫氫酶測定試劑盒α-HBDH速率法                                                      

QKT0649  D二聚體測定試劑盒D-Dimer免疫比濁法                                               

QKT0650  同型半胱氨酸測定試劑盒HCY酶循環(huán)法                                                  

QKT0651  二氧化碳測定試劑盒CO2     比色法                                         

QKT0652  鎂測定試劑盒Mg甲基百里香酚蘭法                                               

QKT0653  載脂蛋白測定試劑盒APoA1 免疫比濁法                                         

QKT0654  載脂蛋白B測定試劑盒ApoB        免疫比濁法                                         

QKT0655  高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒HDL-C      直接法                                         

QKT0656  總膽固醇測定試劑盒TC酶法                                                     

QKT0657  甘油三脂測定試劑盒TG酶法                                                    

QKT0658  低密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒LDL-C直接法