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（請以英文為準(zhǔn)，中文僅供參考）

試劑盒特點【沙門氏菌試紙條】

1.AP單克隆抗體特異地與AP結(jié)合，和其它結(jié)構(gòu)相類似的化學(xué)物質(zhì)不發(fā)生交叉反應(yīng)。單克隆抗體質(zhì)量穩(wěn)定每批次見幾乎沒有變化。

2.檢測范圍5μg/L - 500μg/L (ppb) 。通過固相萃取濃縮可以檢測更低的濃度。

3.這個試劑盒有很高的重復(fù)性，變異系數(shù)在10%之內(nèi)。

4.操作簡單，整個過程僅花費2.5小時

5.試劑盒的形式是96孔微孔板，可以同時檢測多個樣品，花費合理。

檢測原理 （競爭ELISA）

1. 競爭性反應(yīng)

這個檢測方法依靠單克隆抗體來識別AP。樣品中的AP和一個AP-酶結(jié)合物預(yù)先混合然后加入到每個微孔中競爭包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中AP的濃度如果高于AP-酶結(jié)合物，AP將主要與抗體結(jié)合。反之樣品中AP的濃度如果低于于AP-酶結(jié)合物，AP-酶結(jié)合物將主要與抗體結(jié)合。

2. 顯色反應(yīng)

通過洗滌步驟去除沒有反應(yīng)的AP和過多的AP-酶結(jié)合物。通過加入底物來檢測AP。和微孔板中抗體結(jié)合的AP-酶結(jié)合物催化底物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過一個孵育期用稀酸終止反應(yīng)。樣品中AP的濃度越高導(dǎo)致結(jié)合到微孔板抗體上的AP-酶結(jié)合物越少，從而產(chǎn)生的顏色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析

利用已知濃度的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應(yīng)曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線）。把樣品的吸光度值用內(nèi)插法插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以精確的計算出樣品中AP的濃度。

AP 檢測流程【沙門氏菌試紙條】

1.樣品處理

在操作前半小時從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。過濾樣品，加入甲醇和DMSO使甲醇的*終濃度為10% (v/v),DMSO的*終濃度為1%(v/v)。對于一些樣品進(jìn)行固相萃取是必要的。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液

利用甲醇溶液（甲醇：水 0.8：8.2）把AP標(biāo)準(zhǔn)濃縮液稀釋10倍。然后對此溶液進(jìn)一步稀釋成設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度（5μg/L- 500μg/L）。在配制的時候先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)。

3. 抗原-酶結(jié)合物溶液

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 緩沖液(#4, 白蓋).

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒有包被的微孔板中(#8)混合100μL AP標(biāo)準(zhǔn)（或樣品）和100μL酶結(jié)合物溶液。先加結(jié)合物后加標(biāo)準(zhǔn)或樣品。

5. 競爭反應(yīng)

在包被抗體的微孔板(#1)的每個孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）：1ml 洗液(#5) + 5ml蒸餾水

7. 沒有結(jié)合的物質(zhì)

每個微孔用300μL的洗液沖洗，并重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的排板出去微孔中的液體。

8. 顯色

每個微孔加入100μL顯色試劑(#6, 棕色瓶)，在室溫(18-25°C)孵育30分鐘。然后加入每孔再100μL的終止液(#7, 黑蓋)終止反應(yīng)。

10. 定量

在450nm測定每個標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。利用內(nèi)插法把樣品的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中AP的含量。

所需材料【沙門氏菌試紙條】

必需 – 樣品濃縮時不需要

1.一次性玻璃試管(e.g. IWAKI, item No. 9831-1207)確保要使用一次性試管避免AP的吸附作用

2.玻璃纖維濾器(e.g. ADVANTEC Co., item No. 36481047 Φ47mm)和過濾設(shè)備

3.微量加液器(20μL - 200μL 和100μL - 1000μL, e.g. Gilson Pipetman P-200, P-1000)和吸頭

(e.g. ICN Superpack 96NS)

4.排槍(50μL - 300μL)

5.酶標(biāo)儀（450nm波長）(e.g. TECAN Sunrise Remote)

6.計時器

7.Strip ejector (e.g. COSTAR, No.2578)

8.甲醇Methanol (HPLC grade)

9.DMSO(HPLC grade)

2）必需- 通過SPE 濃縮時需要

n         以上的材料都需要,再加上下面的材料

n         固體萃取柱(e.g. NEXUS SPE Cartridge Producer: VARIAN PART#:1210-3102 ABS ELUT- NEXUS, 200MG 6ML,30/PK)

n         丙酮(HPLC grade)

n         二氯甲烷(analytical reagent)

3、重要性

如果在試驗過程中使用一些沒有使用過的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品試劑時需要做比較試驗。

檢測步驟【沙門氏菌試紙條】

重要性

1.僅用于研究、不用于個人

2.在操作前半小時從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。

3.不同試劑盒的中的試劑不要混用

4.儲存在2-8 °C

5.不使用過期產(chǎn)品

6.使用完試劑盒后根據(jù)當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)處理廢液。

7.為了增加準(zhǔn)確性推薦在檢測中做兩個重復(fù)。

注意

在試驗中要穿保護(hù)性衣服，戴手套和眼鏡保證和試劑盒中的液體接觸。

1．樣品前處理

利用特定的玻璃纖維濾紙(1μm 孔徑)過濾水樣，加入DMSO和甲醇使DMSO終濃度為1% (v/v)、甲醇終濃度

為10% (v/v)。如果濾液要求濃縮和清洗需要固相萃取。

例子

1）將上面制備濾液過NEXUS cartridge柱（已經(jīng)用二氯甲烷(ex. 10ml)、甲醇(ex. 5ml)、蒸餾水(ex. 5ml)提前處理好的），流速10mL/min

2）用蒸餾水(ex. 5ml)和50%蒸餾水/甲醇(ex. 5ml)洗柱。真空干燥柱不超過45分鐘。

3）用二氯甲烷(ex. 6ml)洗脫分析物、然后用氮氣（在30攝氏度或更低的溫度）吹干。

4）加入甲醇和DMSO溶液溶解殘留物，調(diào)節(jié)溶液的終濃度到1%DMSO和10%甲醇溶液。

2.  標(biāo)準(zhǔn)溶液

制備甲醇溶液（甲醇：蒸餾水=0.8 ml/8.2ml）以備稀釋標(biāo)準(zhǔn)(#2, 10% v/v DMSO, 20% v/v

methanol)使用。利用上面制備的甲醇溶液以1：9的比例稀釋AP標(biāo)準(zhǔn)(#2)來配制設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液(1% v/v DMSO, 10% v/v methanol)。

1）在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的過程中先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)(#2)。這樣可以減少AP對試管壁的吸附。

2）推薦使用一次性玻璃試管來稀釋標(biāo)準(zhǔn)，可以減少吸附和污染。

3）如果不經(jīng)過10倍稀釋儲存液的步驟直接稀釋到設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，那么標(biāo)準(zhǔn)的真實濃度將要比計劃的濃度要大，所測定的吸光度的值要小0.2-0.5。確保要先稀釋10倍。

4） 在測定前制備AP標(biāo)準(zhǔn)溶液，一旦標(biāo)準(zhǔn)溶液從濃縮的狀態(tài)稀釋后就不再穩(wěn)定了，不易保存很長時間。每個檢測過程都要配制新的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5） 用移液器吸頭混勻，不要渦旋震蕩器用劇烈震蕩來減少樣品中AP對試管壁表面的吸附。

6） 在使用完之后要確保標(biāo)準(zhǔn)濃縮液的蓋擰緊并放在冰箱，標(biāo)準(zhǔn)溶液必須被密封或把蓋擰緊以免甲醇揮

發(fā)。

7）保證標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度為10%。過高的甲醇濃度可以損害抗體，太低的濃度導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)不正確。

8）不要隨意處理試驗廢液，要按當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)來處理。

3. 抗原-酶結(jié)合物

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 7ml緩沖液(#4, 白蓋)。

1.配制好的溶液要儲存在2-8°C，可以穩(wěn)定地保存2周。

2.  7mL足夠50個孔使用。

3.         用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時不要產(chǎn)生氣泡。

4.在使用的時候配制。

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒有包被抗體的微孔板中(#8)加入100ul酶結(jié)合物溶液，然后再加入100ul在第二步中配制的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液或100μL樣品（制備的1% (v/v) DMSO 和10 % (v/v) 的甲醇溶液）。用移液器吸頭混勻。

1.首先加入結(jié)合物溶液然后加入標(biāo)準(zhǔn)或樣品避免孔的內(nèi)表面的非特異性吸附。

2.用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時不要產(chǎn)生氣泡。

3.用1% DMSO 和10%的甲醇溶液做一個空白。

5. 競爭反應(yīng)【沙門氏菌試紙條】

在包被抗體的微孔板(#1)的每個孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，輕輕是震蕩微孔板使其內(nèi)部的液體混勻，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

1.包被抗體的酶標(biāo)板共有12條，每條有8個孔，在檢測前取出所需的孔。然后把不用的再重新放好。

2.在轉(zhuǎn)移液體時要確保不產(chǎn)生氣泡，因此操作要輕。

3.用膠帶覆蓋微孔板避免污染和液體揮發(fā)。

4.在反應(yīng)期間不要移動和振動微孔

5.溫度控制在18-30°C

6.嚴(yán)格反應(yīng)時間

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）(#5)：20ml 洗液(#5) + 100ml蒸餾水 。每次檢測配制所需體積的溶液，每個孔每次要求1.2mL的洗液，整個板需要120 mL。洗液要保存在2-8°C，在配制后大約可以穩(wěn)定保持一個月的時間。

7. 沒有結(jié)合的試劑

每個微孔用300μL的洗液沖洗，并多重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的拍板除去微孔中的液體。

1.要確保除去任何遺留液體，否則可能引起測量錯誤。

2.確保微孔板底部干凈，不要有手印或其它污垢，否則吸光度將有很大改變。

3.不要傾倒任何沒有處理的廢液，例如：浸泡的布或紙要燃燒掉。

8. 顯色反應(yīng)

在每個微孔中加入100ul顯色液(#6, brown vessel)。在室溫下孵育30min。然后每個微孔加入100ul終止液(#7,黑蓋)終止反應(yīng)。

1.孵育溫度控制在18-30°C

2.要使每個孔的反應(yīng)時間一致，尤其在測試多個樣品的時候

3.加入終止液后孔中的藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色

9. 定量【沙門氏菌試紙條】

在450nm用酶標(biāo)儀測定每個標(biāo)準(zhǔn)和樣品的吸光度值。

1.在終止反應(yīng)15分鐘內(nèi)測定吸光度值。

2.每次檢測制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)至少做兩個重復(fù)。

3.確保微孔底面沒有手印和污物，否則測定的吸光度值有很大的改變。

4.樣品的檢測范圍5μg/L - 500μg/L，樣品中AP的濃度超過500μg/L時要用10%甲醇+1% DMSO稀釋后再測定。對于完全不知情的樣品做前處理時要做遠(yuǎn)不止一倍的稀釋。

計算樣品中AP濃度的方法

（1）電腦計算

利用酶標(biāo)儀分析軟件，用Log-Log (or Log-Linear)曲線。

（2）利用附帶的曲線圖計算

9237156       Controller Board XYP         CNY                           

9237122       Upgrade App., QIAprep Turbo  Take advantage of our instrumentation ａnd molecular biology expertise to install QIAprep Turbo 96 on your BioRobot System. The onsite protocol installation visit includes all travel ａnd labor for the visit to install the standard QIAGEN QIAprep Turbo protocol, plus the QIAprep Turbo 96 BioRobot 8000 Kit (4-plate) SAP #962141      CNY                           

9237096       Training, BR QIAGEN Introductory   A minimum of 4 people are required to attend this training. The QIAGEN BioRobot Systems Introductory Training is offered at QIAGEN training facilities to refresh current users or introduce new users to the QIAGEN BioRobot Systems hardware ａnd QIAsoft Operating System software.  Participants are given an overview of the hardware system ａnd maintenance/troubleshooting procedures before exploring the three software environments of the QIAsoft Operating System.  Each software environment is explained in detail, ａnd users are taken step by step through each section with explanations on how to best adjust or write new protocols for their BioRobot System.  An introduction to teaching new ａnd exisiting slots ａnd racks is followed by writing a new protocol which uses these with the three available pipetting options, pooling, distributing ａnd transfer.  Users are encouraged to write protocols in the proper format creating prompts, flushes, ａnd correct pipetting parameters.  The training concludes as protocols are tested ａnd run reinforcing concepts ａnd demonstrating success.   CNY                           

9237094       Training, LiquiChip On-site       On-site Training 1 day LiquiChip     CNY                           

9021147       Bottle, Reagent (with cap assy), DCU            CNY                           

9021110       Skin Panel, Upper Left Rear, DCU          CNY                           

9021105       Skin Panel, Output Drawer, DCU            CNY                           

9021082       PLC Module, Dual RS-232, Slot 7, DCU        CNY                           

9021073       Gateway 1, CC-Link, DCU        CNY                           

9021048       Set, SP-AS assembly, Qsym            CNY                           

9020935       Kit, calibration, overshoot, RGQ             CNY                           

9020711       Table plate, complete, C18              CNY                           

9020628       Door, consumables, right, Cabinet Qsym             CNY                           

9020602       Packing Foam Set - DML2000         CNY                            【沙門氏菌試紙條】

9020353       SOW RGQ Software (RGQ Series II)             CNY                           

9020328       PCB - LED, RGQII              CNY                           

9020289       Tool, Adj., Extractor, Qsym              CNY                           

9020288       Packaging (complete), QGY            CNY                           

9017656       Adapter Set, press.sensor, BR8 RD              CNY                           

9020253       Waste bag, Qsym              CNY                           

9020244       QIAsymphony Cabinet SP         CNY                           

9017435       Sample tracking, Qsym             CNY                           

9017186       Plunger set (6), Biorobot EZ1          CNY                           

9020239       PM kit, C18 & QIAxtractor (UV/HEPA), CX1           CNY                           

9020204       Module, Thermocycler, 24 well, GPX             CNY                           

9020197       PCB, breakout, P-axis, 8 ch. , QX1         CNY                           

9239527       O Ring, #012, Nitrile, 70D (Set of 20)            CNY                           

9020169       Rotor Hub Assy, RG3        CNY                           

9020160       Insulation disc - chamber side, RG3              CNY                           

9020133       O Ring Kit VPT, PyroQ24VW           CNY                            【沙門氏菌試紙條】

9239513       SD Controller              CNY                           

9239502       Fitting,1/4-28x1/8Barb,FaceSeal (10)            CNY                           

9239495       XY Motor Driver w/Encoder              CNY                           

NG0530 旋毛蟲抗原檢測試劑盒              血清       20T/40T              

NG0531 旋毛蟲抗體IgG\IgM檢測試劑盒        血清       20T/40T              

NG0532 肺吸蟲抗體IgG\IgM檢測試劑盒        血清       20T/40T              

NG0533 肝吸蟲抗體IgG\IgM檢測試劑盒        血清       20T/40T              

NG0534 瘧原蟲抗體IgG\IgM檢測試劑盒        血清       20T/40T               【沙門氏菌試紙條】

NG0536 真菌分離培養(yǎng)基試劑盒                     10T              

NG0537 念珠菌顯色分離培養(yǎng)基試劑盒                  18T              

NG0538 皮膚癬菌鑒別培養(yǎng)基試劑盒                     20T              

NG0539 霉菌滴蟲培養(yǎng)基試劑盒              分泌物    20T              

NG0540 杜克雷嗜血桿菌選擇性培養(yǎng)基試劑盒                     20T              

NG0541 大腸菌群快速檢測紙片                     60T/100T                   

NG0542 幽門螺桿菌快速檢測試劑    脲酶法    胃粘膜/牙垢   50T/100T                   

NG0543 解脲支原體培養(yǎng)基試劑盒液體                  20T              

NG0544 支原體固體培養(yǎng)基試劑盒                  20T              

NG0545 解脲-人型支原體復(fù)合培養(yǎng)基試劑盒                20T              

NG0546 淋球菌培養(yǎng)管              分泌物    20T              

NG0547 淋球菌TM培養(yǎng)基試劑盒           分泌物    10T              

NG0548 淋球菌鑒定藥敏試劑           分泌物    20T              

NG0549 解脲支原體選擇性培養(yǎng)基試劑盒              分泌物    20T              

NG0550 解脲支原體藥敏盒              分泌物    20T              

NG0551 肺炎支原體選擇性培養(yǎng)基試劑盒              分泌物    20T               【沙門氏菌試紙條】

NG0552 人型支原體選擇性培養(yǎng)基試劑盒              分泌物    20T              

NG0553 人型支原體藥敏盒              分泌物    20T              

NG0554 生殖支原體選擇性培養(yǎng)基試劑盒              分泌物    20T              

NG0555 霉菌培養(yǎng)基試劑盒              分泌物    20T              

NG0556 自然沉降法液基細(xì)胞處理試劑盒       100人份/件   88元/人份                         

NG0557 宮頸脫落細(xì)胞處理試劑盒    100人份/件   88元/人份                         

NG0558 痰液處理試劑盒    100人份/件   88元/人份                         

NG0559 穿刺、刷檢細(xì)胞處理試劑盒       50人份/件     88元/人份                         

NG0560 漿膜腔積液處理試劑盒       50人份/件     108元/人份                       

QKT0556      同型半胱氨酸/HCY酶法            康特                           

QKT0557      結(jié)核分枝桿菌抗體IgG檢測試劑盒酶聯(lián)免疫法                                         

QKT0558      丙型肝炎病毒核心抗原檢測試劑盒