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（請(qǐng)以英文為準(zhǔn)，中文僅供參考）

試劑盒特點(diǎn)【特布他林檢測(cè)試劑盒】

1.AP單克隆抗體特異地與AP結(jié)合，和其它結(jié)構(gòu)相類(lèi)似的化學(xué)物質(zhì)不發(fā)生交叉反應(yīng)。單克隆抗體質(zhì)量穩(wěn)定每批次見(jiàn)幾乎沒(méi)有變化。

2.檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L (ppb) 。通過(guò)固相萃取濃縮可以檢測(cè)更低的濃度。

3.這個(gè)試劑盒有很高的重復(fù)性，變異系數(shù)在10%之內(nèi)。

4.操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程僅花費(fèi)2.5小時(shí)

5.試劑盒的形式是96孔微孔板，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品，花費(fèi)合理。

檢測(cè)原理 （競(jìng)爭(zhēng)ELISA）

1. 競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)

這個(gè)檢測(cè)方法依靠單克隆抗體來(lái)識(shí)別AP。樣品中的AP和一個(gè)AP-酶結(jié)合物預(yù)先混合然后加入到每個(gè)微孔中競(jìng)爭(zhēng)包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中AP的濃度如果高于AP-酶結(jié)合物，AP將主要與抗體結(jié)合。反之樣品中AP的濃度如果低于于AP-酶結(jié)合物，AP-酶結(jié)合物將主要與抗體結(jié)合。

2. 顯色反應(yīng)

通過(guò)洗滌步驟去除沒(méi)有反應(yīng)的AP和過(guò)多的AP-酶結(jié)合物。通過(guò)加入底物來(lái)檢測(cè)AP。和微孔板中抗體結(jié)合的AP-酶結(jié)合物催化底物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過(guò)一個(gè)孵育期用稀酸終止反應(yīng)。樣品中AP的濃度越高導(dǎo)致結(jié)合到微孔板抗體上的AP-酶結(jié)合物越少，從而產(chǎn)生的顏色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析

利用已知濃度的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應(yīng)曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線）。把樣品的吸光度值用內(nèi)插法插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以精確的計(jì)算出樣品中AP的濃度。

AP 檢測(cè)流程【特布他林檢測(cè)試劑盒】

1.樣品處理

在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。過(guò)濾樣品，加入甲醇和DMSO使甲醇的*終濃度為10% (v/v),DMSO的*終濃度為1%(v/v)。對(duì)于一些樣品進(jìn)行固相萃取是必要的。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液

利用甲醇溶液（甲醇：水 0.8：8.2）把AP標(biāo)準(zhǔn)濃縮液稀釋10倍。然后對(duì)此溶液進(jìn)一步稀釋成設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度（5μg/L- 500μg/L）。在配制的時(shí)候先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)。

3. 抗原-酶結(jié)合物溶液

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 緩沖液(#4, 白蓋).

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒(méi)有包被的微孔板中(#8)混合100μL AP標(biāo)準(zhǔn)（或樣品）和100μL酶結(jié)合物溶液。先加結(jié)合物后加標(biāo)準(zhǔn)或樣品。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）：1ml 洗液(#5) + 5ml蒸餾水

7. 沒(méi)有結(jié)合的物質(zhì)

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的排板出去微孔中的液體。

8. 顯色

每個(gè)微孔加入100μL顯色試劑(#6, 棕色瓶)，在室溫(18-25°C)孵育30分鐘。然后加入每孔再100μL的終止液(#7, 黑蓋)終止反應(yīng)。

10. 定量

在450nm測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。利用內(nèi)插法把樣品的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中AP的含量。

所需材料【特布他林檢測(cè)試劑盒】

必需 – 樣品濃縮時(shí)不需要

1.一次性玻璃試管(e.g. IWAKI, item No. 9831-1207)確保要使用一次性試管避免AP的吸附作用

2.玻璃纖維濾器(e.g. ADVANTEC Co., item No. 36481047 Φ47mm)和過(guò)濾設(shè)備

3.微量加液器(20μL - 200μL 和100μL - 1000μL, e.g. Gilson Pipetman P-200, P-1000)和吸頭

(e.g. ICN Superpack 96NS)

4.排槍(50μL - 300μL)

5.酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）(e.g. TECAN Sunrise Remote)

6.計(jì)時(shí)器

7.Strip ejector (e.g. COSTAR, No.2578)

8.甲醇Methanol (HPLC grade)

9.DMSO(HPLC grade)

2）必需- 通過(guò)SPE 濃縮時(shí)需要

n         以上的材料都需要,再加上下面的材料

n         固體萃取柱(e.g. NEXUS SPE Cartridge Producer: VARIAN PART#:1210-3102 ABS ELUT- NEXUS, 200MG 6ML,30/PK)

n         丙酮(HPLC grade)

n         二氯甲烷(analytical reagent)

3、重要性

如果在試驗(yàn)過(guò)程中使用一些沒(méi)有使用過(guò)的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品試劑時(shí)需要做比較試驗(yàn)。

檢測(cè)步驟【特布他林檢測(cè)試劑盒】

重要性

1.僅用于研究、不用于個(gè)人

2.在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。

3.不同試劑盒的中的試劑不要混用

4.儲(chǔ)存在2-8 °C

5.不使用過(guò)期產(chǎn)品

6.使用完試劑盒后根據(jù)當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)處理廢液。

7.為了增加準(zhǔn)確性推薦在檢測(cè)中做兩個(gè)重復(fù)。

注意

在試驗(yàn)中要穿保護(hù)性衣服，戴手套和眼鏡保證和試劑盒中的液體接觸。

1．樣品前處理

利用特定的玻璃纖維濾紙(1μm 孔徑)過(guò)濾水樣，加入DMSO和甲醇使DMSO終濃度為1% (v/v)、甲醇終濃度

為10% (v/v)。如果濾液要求濃縮和清洗需要固相萃取。

例子

1）將上面制備濾液過(guò)NEXUS cartridge柱（已經(jīng)用二氯甲烷(ex. 10ml)、甲醇(ex. 5ml)、蒸餾水(ex. 5ml)提前處理好的），流速10mL/min

2）用蒸餾水(ex. 5ml)和50%蒸餾水/甲醇(ex. 5ml)洗柱。真空干燥柱不超過(guò)45分鐘。

3）用二氯甲烷(ex. 6ml)洗脫分析物、然后用氮?dú)猓ㄔ?0攝氏度或更低的溫度）吹干。

4）加入甲醇和DMSO溶液溶解殘留物，調(diào)節(jié)溶液的終濃度到1%DMSO和10%甲醇溶液。

2.  標(biāo)準(zhǔn)溶液

制備甲醇溶液（甲醇：蒸餾水=0.8 ml/8.2ml）以備稀釋標(biāo)準(zhǔn)(#2, 10% v/v DMSO, 20% v/v

methanol)使用。利用上面制備的甲醇溶液以1：9的比例稀釋AP標(biāo)準(zhǔn)(#2)來(lái)配制設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液(1% v/v DMSO, 10% v/v methanol)。

1）在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的過(guò)程中先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)(#2)。這樣可以減少AP對(duì)試管壁的吸附。

2）推薦使用一次性玻璃試管來(lái)稀釋標(biāo)準(zhǔn)，可以減少吸附和污染。

3）如果不經(jīng)過(guò)10倍稀釋儲(chǔ)存液的步驟直接稀釋到設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，那么標(biāo)準(zhǔn)的真實(shí)濃度將要比計(jì)劃的濃度要大，所測(cè)定的吸光度的值要小0.2-0.5。確保要先稀釋10倍。

4） 在測(cè)定前制備AP標(biāo)準(zhǔn)溶液，一旦標(biāo)準(zhǔn)溶液從濃縮的狀態(tài)稀釋后就不再穩(wěn)定了，不易保存很長(zhǎng)時(shí)間。每個(gè)檢測(cè)過(guò)程都要配制新的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5） 用移液器吸頭混勻，不要渦旋震蕩器用劇烈震蕩來(lái)減少樣品中AP對(duì)試管壁表面的吸附。

6） 在使用完之后要確保標(biāo)準(zhǔn)濃縮液的蓋擰緊并放在冰箱，標(biāo)準(zhǔn)溶液必須被密封或把蓋擰緊以免甲醇揮

發(fā)。

7）保證標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度為10%。過(guò)高的甲醇濃度可以損害抗體，太低的濃度導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)不正確。

8）不要隨意處理試驗(yàn)廢液，要按當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)來(lái)處理。

3. 抗原-酶結(jié)合物

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 7ml緩沖液(#4, 白蓋)。

1.配制好的溶液要儲(chǔ)存在2-8°C，可以穩(wěn)定地保存2周。

2.  7mL足夠50個(gè)孔使用。

3.         用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

4.在使用的時(shí)候配制。

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒(méi)有包被抗體的微孔板中(#8)加入100ul酶結(jié)合物溶液，然后再加入100ul在第二步中配制的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液或100μL樣品（制備的1% (v/v) DMSO 和10 % (v/v) 的甲醇溶液）。用移液器吸頭混勻。

1.首先加入結(jié)合物溶液然后加入標(biāo)準(zhǔn)或樣品避免孔的內(nèi)表面的非特異性吸附。

2.用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

3.用1% DMSO 和10%的甲醇溶液做一個(gè)空白。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)【特布他林檢測(cè)試劑盒】

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，輕輕是震蕩微孔板使其內(nèi)部的液體混勻，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

1.包被抗體的酶標(biāo)板共有12條，每條有8個(gè)孔，在檢測(cè)前取出所需的孔。然后把不用的再重新放好。

2.在轉(zhuǎn)移液體時(shí)要確保不產(chǎn)生氣泡，因此操作要輕。

3.用膠帶覆蓋微孔板避免污染和液體揮發(fā)。

4.在反應(yīng)期間不要移動(dòng)和振動(dòng)微孔

5.溫度控制在18-30°C

6.嚴(yán)格反應(yīng)時(shí)間

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）(#5)：20ml 洗液(#5) + 100ml蒸餾水 。每次檢測(cè)配制所需體積的溶液，每個(gè)孔每次要求1.2mL的洗液，整個(gè)板需要120 mL。洗液要保存在2-8°C，在配制后大約可以穩(wěn)定保持一個(gè)月的時(shí)間。

7. 沒(méi)有結(jié)合的試劑

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并多重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的拍板除去微孔中的液體。

1.要確保除去任何遺留液體，否則可能引起測(cè)量錯(cuò)誤。

2.確保微孔板底部干凈，不要有手印或其它污垢，否則吸光度將有很大改變。

3.不要傾倒任何沒(méi)有處理的廢液，例如：浸泡的布或紙要燃燒掉。

8. 顯色反應(yīng)

在每個(gè)微孔中加入100ul顯色液(#6, brown vessel)。在室溫下孵育30min。然后每個(gè)微孔加入100ul終止液(#7,黑蓋)終止反應(yīng)。

1.孵育溫度控制在18-30°C

2.要使每個(gè)孔的反應(yīng)時(shí)間一致，尤其在測(cè)試多個(gè)樣品的時(shí)候

3.加入終止液后孔中的藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色

9. 定量【特布他林檢測(cè)試劑盒】

在450nm用酶標(biāo)儀測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品的吸光度值。

1.在終止反應(yīng)15分鐘內(nèi)測(cè)定吸光度值。

2.每次檢測(cè)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)至少做兩個(gè)重復(fù)。

3.確保微孔底面沒(méi)有手印和污物，否則測(cè)定的吸光度值有很大的改變。

4.樣品的檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L，樣品中AP的濃度超過(guò)500μg/L時(shí)要用10%甲醇+1% DMSO稀釋后再測(cè)定。對(duì)于完全不知情的樣品做前處理時(shí)要做遠(yuǎn)不止一倍的稀釋。

計(jì)算樣品中AP濃度的方法

（1）電腦計(jì)算

利用酶標(biāo)儀分析軟件，用Log-Log (or Log-Linear)曲線。

（2）利用附帶的曲線圖計(jì)算

9241197       Silicone sealant, RTV 108, QX         CNY                           

9241183       Sensor, Y, with cable, QX         CNY                           

9233329       Belt, tooth, X-drive, BR8000            CNY                           

9233299       Toothbelt, X-drive, P3xx1          CNY                           

9233276       Motor, bar-code camera, Y-motor           CNY                           

9233272       LabHand motor (Plato 1***)              CNY                            【特布他林檢測(cè)試劑盒】

9237711       #BR M48, Installation         CNY                           

9237164       Bezel XYP            CNY                           

9237161       Adapter Vertical Height             CNY                           

9237121       Upgrade App., R.E.A.L. Prep 96             CNY                           

9237112       Upgrade App., QIAamp 96 Swab     Take advantage of our instrumentation ａnd molecular biology expertise to install QIAamp 96 DNA Swab on your BioRobot System.  The onsite protocol development visit includes all travel ａnd labor for the visit to install the standard QIAGEN QIAamp 96 DNA Swab protocol.  Also included is a QIAamp 96 DNA Swab BioRobot 9604 Kit (12-plates) SAP #965842     CNY                           

9237103       Upgrade, BR plus 3 ext. devices      Upgrade BioRobot with three approved integration devices      CNY                           

9236355       Sample Needle, short        CNY                           

9232936       Microplate Reader (UV-340nm)Module          CNY                           

9232915       Washer Board            CNY                           

9236325       Sample Valve              CNY                           

9230821       Rack for reagents,Troughs(for 6 troughs)            CNY                           

4823024       careHIV-1 RT-PCR ASSAY              CNY                           

4861014       careEBV PCR ASSAY I             CNY                           

130823  NeXtal CubicPhase 2w Mo/C 8% µplate (2)          CNY                           

130822  NeXtal CubicPhase 1w Mo/C 8% µplate (10)        CNY                           

130723  NeXtal Tubes Classics II Suite          CNY                            【特布他林檢測(cè)試劑盒】

4513363       artus HI Virus-1 QS-RGQ Kit (24) CE            CNY                           

4510003       artus Enterovirus LC RT-PCR Kit (24) RUO         CNY                           

9011277       Plate, ground, auto vac, BR8000            CNY                           

330504  RT² SYBR Green qPCR  Mastermix (6)         CNY                           

9010975       BGR 4er-Incubator PK80          CNY                           

133293  NeXtalStock Zinc acetate (200)        CNY                           

1014051       Ni-NTA Silica (10 g)           CNY                           

1013342       Ni-NTA HisSorb Plates, black (100)        CNY                           

1005485       Q-Solution,5 x (2ml/2)        CNY                           

997012  Accessory Trough (10)             CNY                           

995999  Starter Pack, M48              CNY                           

NG0261 肝/肌糖元測(cè)試盒   50管/48樣    比色法                        

NG0262 β-葡萄糖醛酸苷酶測(cè)試盒  50管/48樣    比色法                        

NG0263 紅細(xì)胞NADH高鐵血紅蛋白還原酶測(cè)試盒       50管/48樣    比色法                        

NG0264 全血2，3－二磷酸甘油酸2，3－DPG測(cè)試盒       50管      比色法                        

NG0265 脂褐質(zhì)測(cè)試盒       50管/48樣    熒光比色法                        

NG0266 脂蛋白a[LPa]測(cè)試盒   96孔      ELISA法                           

NG0267 游離脂肪酸NEFA測(cè)試盒    50管/48樣    比色法                        

NG0268 脂肪酶測(cè)試盒       50管/48樣    比色法                        

NG0269 總脂酶[脂蛋白脂酶LPL/肝脂酶HL]測(cè)試盒      50管/24樣    比色法                        

NG0270 總氨基酸T－AA測(cè)試盒      80管/78樣    比色法                        

NG0271 羥脯氨酸測(cè)試前處理試劑    50管/48樣    比色法                        

NG0272 羥脯氨酸Hyp測(cè)試盒   50管/48樣    比色法                        

NG0273 谷氨酰胺合成酶GS測(cè)試盒 50管/48樣    比色法                         【特布他林檢測(cè)試劑盒】

NG0274 單胺氧化酶MAO測(cè)試盒     50管/48樣    紫外比色法                        

NG0275 5’－核苷酸酶5’－NT測(cè)試盒 50管/24樣    比色法                        

NG0276 腺苷脫氨酶ADA測(cè)試盒      50管/24樣    比色法                        

NG0277 前列腺酸性磷酸酶PACP測(cè)試盒       50管/25樣    比色法                        

NG0278 抗酒石酸酸性磷酸酶StrACP測(cè)試盒 50管/24樣    比色法                        

NG0279 堿性磷酸酶AKP測(cè)試盒      50管/48樣    比色法                        

NG0280 酸性磷酸酶ACP測(cè)試盒      50管/48樣    比色法                        

NG0281 白蛋白測(cè)試盒帶標(biāo)準(zhǔn)；溴甲酚綠法    100管/96樣 比色法                        

NG0282 銅蘭蛋白CP測(cè)試盒    50管/48樣    比色法                        

NG0283 總蛋白定量測(cè)試盒帶標(biāo)準(zhǔn)；雙縮脲法       100管/96樣 比色法                        

NG0284 總蛋白定量測(cè)試盒帶標(biāo)準(zhǔn)；考馬斯亮蘭法       100管/96樣 比色法                        

NG0285 總蛋白定量測(cè)試盒帶標(biāo)準(zhǔn)；考馬斯亮蘭法       50管/48樣    比色法                        

NG0286 蛋白標(biāo)準(zhǔn)品總蛋白、白蛋白                                         

NG0287 微量游離血紅蛋白測(cè)試盒    50管/48樣    比色法                        

NG0288 血清鐵測(cè)試盒       50管/48樣    比色法                        

NG0289 總鐵結(jié)合力TIBC測(cè)試盒     50管/48樣    比色法                         【特布他林檢測(cè)試劑盒】

NG0290 髓過(guò)氧化物酶MPO測(cè)試盒 50管/24樣    比色法                        

NG0292 溶菌酶LZM測(cè)試盒帶標(biāo)準(zhǔn)  30管/28樣    試管比濁法                        

NG0293 溶菌酶標(biāo)準(zhǔn)品       2mg                                  

NG0294 微球菌粉       30mg