高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復(fù)性；檢測過程只需要不到1.5小時；五合一處理方法更省時、經(jīng)濟、環(huán)保。

產(chǎn)品概述

甲睪酮檢測試劑盒酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應(yīng)原理，含有甲睪酮檢測試劑盒(SEM)的抗體已經(jīng)包被于微孔板上。藥物分析時，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結(jié)合。加入底物后，產(chǎn)物的顏色強弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標(biāo)板（可拆式）                                            12×8 孔

標(biāo)準(zhǔn)液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標(biāo)抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應(yīng)當(dāng)在2-8℃的溫度下儲存，有效期為一年。如果超過3個月不使用試劑盒，

請將SEM-HRP酶標(biāo)抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設(shè)備或材料

1)      酶標(biāo)儀(450 nm)

2)      恒溫培養(yǎng)箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項

實驗前請閱讀以下文字，以保證獲得*佳實驗效果。

1)      標(biāo)準(zhǔn)品中含有甲睪酮檢測試劑盒，請小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風(fēng)口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實驗，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺溫度過低，應(yīng)該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質(zhì)量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時間的計算越規(guī)范越好，保持添加標(biāo)準(zhǔn)品的一致性，先添加標(biāo)準(zhǔn)品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標(biāo)準(zhǔn)品，降低影響標(biāo)準(zhǔn)品曲線質(zhì)量的風(fēng)險。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準(zhǔn)備【甲睪酮檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質(zhì)樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉(zhuǎn)速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3h，培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，上清液不足3mL，請85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現(xiàn)象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

稀釋倍數(shù)：2.0

3）雞蛋【甲睪酮檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

5）牛奶

（1）    對于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

6）血清【甲睪酮檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮氣吹干；

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

檢測步驟

試劑的準(zhǔn)備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時，確定在使用前閱讀過注意事項。準(zhǔn)備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準(zhǔn)備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時建議用廢棄的瓶子以降低污染的風(fēng)險。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標(biāo)準(zhǔn)品于所設(shè)定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設(shè)定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應(yīng)該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應(yīng);

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數(shù)前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數(shù))。

10．結(jié)果計算【甲睪酮檢測試劑盒】

（1）    分別計算標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對吸光度值。

相對吸光度值 (%) = (標(biāo)準(zhǔn)或樣品吸光度值/零標(biāo)準(zhǔn)吸光度值) ´ 100

（2）    以相對吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）    從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

例如，肉類樣品的稀釋倍數(shù)是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

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74524       RNeasy Protect Bacteria Mini Kit (50)     RNeasy Mini Kit (50) ａnd RNAprotect Bacteria Reagent (2 x 100 ml)     CNY                              【甲睪酮檢測試劑盒】

69980       TissueLyser LT Adapter, 12-Tube               CNY                             

19530       Vacuum Regulator   For use with QIAvac manifolds         CNY                             

19081       Buffer AW1       242 ml Wash Buffer (1) Concentrate for 1000 spin, 250 midi, or 100 maxi preps   CNY                             

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19055       Buffer QC 1000 ml Wash Buffer        CNY                             

13362       Blood & Cell Culture DNA Maxi Kit  10 QIAGEN Genomic-tip 500/G, QIAGEN Protease, Buffers   CNY                             

12843       CompactPrep Plasmid Midi Kit (25) "For ultrafast purification of up to 200 µg or 750 µg Molecular Biology Grade plasmid or cosmid DNA for standard applications

CompactPrep Plasmid Kits enable fast, large-scale plasmid purification in a miniprep format. The use of a vacuum manifold allows 24 samples to be purified in parallel on a single workbench"       CNY                             

NG0122   尿糖試劑         100毫升 班氏法                                 【甲睪酮檢測試劑盒】

NG0123   尿糞隱血測試盒     100T         聯(lián)苯胺法                                    

NG0124   堿性磷酸酶染液/cAKPstain   1套 可染20-30片                            

NG0125   酸性磷酸酶染液/cACPstain   1套 可染20-30片                            

NG0126   酸性酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0127   中性酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0128   堿性酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0129   雙重酯酶染液/Esterasestain 5毫升×4        染色                                    

NG0131   糖元染液/糖原染液/PASStain         10毫升    染色                                    

NG0134   H-E染液/蘇木素-伊紅染液/Hematoxylin-Eosinstain     25毫升×5      BR                               

NG0135   瑞氏姬姆薩復(fù)合染液/瑞氏吉姆薩復(fù)合染液/Wright-Giemsastain      90毫升    BR                               

NG0136   快速改良巴氏染液/Fastmodifiedpapanicolaoustain      50毫升×2；100毫升×1     BR                               

NG0137   改良巴氏染液/Modifiedpapanicolaoustain    50毫升×5；100毫升×1     BR                               

NG0138   植物樣本提取液     100毫升 BR                               

NG0139   抗酸染液/Acid-faststain 50毫升×3      BR                               

NG0140   果糖測試盒     50管/48樣      比色法                                

NG0141   微量丙二醛測試盒/MDA測試盒  50管/24樣      比色法                                 【甲睪酮檢測試劑盒】

NG0142   細胞活性鑒別染液/Cellviabilitydetectedstain       20毫升    BR                               

NG0143   血管通透性測試染液/Vasopermeabilitystain        20毫升    BR                               

NG0144   過氧化物酶染液/Peroxidasestain  5毫升×3；2毫升×1   BR                               

NG0145   血清高密度脂蛋白膽固醇測試盒/HDL-C測試盒         80毫升    沉淀分離法手工                                

NG0146   血清低密度脂蛋白測試盒/LDL測試盒         80毫升    手工/半自動                              

NG0147   蔗糖測試盒     50管/48樣      比色法                                

NG0148   蔗糖磷酸合成酶測試盒/SPS測試盒     50管/24樣      比色法                                

NG0149   蔗糖合成酶測試盒/SS測試盒       50管/24樣      比色法                                

NG0150   硝酸還原酶測試盒/NR測試盒      50管/24樣      比色法                                

NG0151   ATP含量測試盒      100管/48樣    比色法                                

NG0152   γ-谷氨酰胺半胱氨酸合成酶測試盒/γ-GCS測試盒 100管/48樣    微量定磷法                                

NG0153   F0F1-ATP酶/ATP合成酶測試盒     20管/10樣      生化法                                

NG0154   二胺氧化酶測試盒/DAO測試盒   25毫升/40T     手工比色法                                

NG0155   質(zhì)粒提取試劑盒     100T/套   BR                               

NG0156   紅細胞裂解液         100毫升 BR                               

NG0157   RIPA組織細胞快速裂解液    20毫升    BR                                【甲睪酮檢測試劑盒】