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（請(qǐng)以英文為準(zhǔn)，中文僅供參考）

試劑盒特點(diǎn)【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

1.AP單克隆抗體特異地與AP結(jié)合，和其它結(jié)構(gòu)相類似的化學(xué)物質(zhì)不發(fā)生交叉反應(yīng)。單克隆抗體質(zhì)量穩(wěn)定每批次見幾乎沒有變化。

2.檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L (ppb) 。通過固相萃取濃縮可以檢測(cè)更低的濃度。

3.這個(gè)試劑盒有很高的重復(fù)性，變異系數(shù)在10%之內(nèi)。

4.操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過程僅花費(fèi)2.5小時(shí)

5.試劑盒的形式是96孔微孔板，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品，花費(fèi)合理。

檢測(cè)原理 （競(jìng)爭(zhēng)ELISA）

1. 競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)

這個(gè)檢測(cè)方法依靠單克隆抗體來識(shí)別AP。樣品中的AP和一個(gè)AP-酶結(jié)合物預(yù)先混合然后加入到每個(gè)微孔中競(jìng)爭(zhēng)包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中AP的濃度如果高于AP-酶結(jié)合物，AP將主要與抗體結(jié)合。反之樣品中AP的濃度如果低于于AP-酶結(jié)合物，AP-酶結(jié)合物將主要與抗體結(jié)合。

2. 顯色反應(yīng)

通過洗滌步驟去除沒有反應(yīng)的AP和過多的AP-酶結(jié)合物。通過加入底物來檢測(cè)AP。和微孔板中抗體結(jié)合的AP-酶結(jié)合物催化底物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過一個(gè)孵育期用稀酸終止反應(yīng)。樣品中AP的濃度越高導(dǎo)致結(jié)合到微孔板抗體上的AP-酶結(jié)合物越少，從而產(chǎn)生的顏色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析

利用已知濃度的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應(yīng)曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線）。把樣品的吸光度值用內(nèi)插法插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以精確的計(jì)算出樣品中AP的濃度。

AP 檢測(cè)流程【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

1.樣品處理

在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。過濾樣品，加入甲醇和DMSO使甲醇的*終濃度為10% (v/v),DMSO的*終濃度為1%(v/v)。對(duì)于一些樣品進(jìn)行固相萃取是必要的。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液

利用甲醇溶液（甲醇：水 0.8：8.2）把AP標(biāo)準(zhǔn)濃縮液稀釋10倍。然后對(duì)此溶液進(jìn)一步稀釋成設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度（5μg/L- 500μg/L）。在配制的時(shí)候先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)。

3. 抗原-酶結(jié)合物溶液

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 緩沖液(#4, 白蓋).

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒有包被的微孔板中(#8)混合100μL AP標(biāo)準(zhǔn)（或樣品）和100μL酶結(jié)合物溶液。先加結(jié)合物后加標(biāo)準(zhǔn)或樣品。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）：1ml 洗液(#5) + 5ml蒸餾水

7. 沒有結(jié)合的物質(zhì)

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的排板出去微孔中的液體。

8. 顯色

每個(gè)微孔加入100μL顯色試劑(#6, 棕色瓶)，在室溫(18-25°C)孵育30分鐘。然后加入每孔再100μL的終止液(#7, 黑蓋)終止反應(yīng)。

10. 定量

在450nm測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。利用內(nèi)插法把樣品的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中AP的含量。

所需材料【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

必需 – 樣品濃縮時(shí)不需要

1.一次性玻璃試管(e.g. IWAKI, item No. 9831-1207)確保要使用一次性試管避免AP的吸附作用

2.玻璃纖維濾器(e.g. ADVANTEC Co., item No. 36481047 Φ47mm)和過濾設(shè)備

3.微量加液器(20μL - 200μL 和100μL - 1000μL, e.g. Gilson Pipetman P-200, P-1000)和吸頭

(e.g. ICN Superpack 96NS)

4.排槍(50μL - 300μL)

5.酶標(biāo)儀（450nm波長）(e.g. TECAN Sunrise Remote)

6.計(jì)時(shí)器

7.Strip ejector (e.g. COSTAR, No.2578)

8.甲醇Methanol (HPLC grade)

9.DMSO(HPLC grade)

2）必需- 通過SPE 濃縮時(shí)需要

n         以上的材料都需要,再加上下面的材料

n         固體萃取柱(e.g. NEXUS SPE Cartridge Producer: VARIAN PART#:1210-3102 ABS ELUT- NEXUS, 200MG 6ML,30/PK)

n         丙酮(HPLC grade)

n         二氯甲烷(analytical reagent)

3、重要性

如果在試驗(yàn)過程中使用一些沒有使用過的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品試劑時(shí)需要做比較試驗(yàn)。

檢測(cè)步驟【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

重要性

1.僅用于研究、不用于個(gè)人

2.在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。

3.不同試劑盒的中的試劑不要混用

4.儲(chǔ)存在2-8 °C

5.不使用過期產(chǎn)品

6.使用完試劑盒后根據(jù)當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)處理廢液。

7.為了增加準(zhǔn)確性推薦在檢測(cè)中做兩個(gè)重復(fù)。

注意

在試驗(yàn)中要穿保護(hù)性衣服，戴手套和眼鏡保證和試劑盒中的液體接觸。

1．樣品前處理

利用特定的玻璃纖維濾紙(1μm 孔徑)過濾水樣，加入DMSO和甲醇使DMSO終濃度為1% (v/v)、甲醇終濃度

為10% (v/v)。如果濾液要求濃縮和清洗需要固相萃取。

例子

1）將上面制備濾液過NEXUS cartridge柱（已經(jīng)用二氯甲烷(ex. 10ml)、甲醇(ex. 5ml)、蒸餾水(ex. 5ml)提前處理好的），流速10mL/min

2）用蒸餾水(ex. 5ml)和50%蒸餾水/甲醇(ex. 5ml)洗柱。真空干燥柱不超過45分鐘。

3）用二氯甲烷(ex. 6ml)洗脫分析物、然后用氮?dú)猓ㄔ?0攝氏度或更低的溫度）吹干。

4）加入甲醇和DMSO溶液溶解殘留物，調(diào)節(jié)溶液的終濃度到1%DMSO和10%甲醇溶液。

2.  標(biāo)準(zhǔn)溶液

制備甲醇溶液（甲醇：蒸餾水=0.8 ml/8.2ml）以備稀釋標(biāo)準(zhǔn)(#2, 10% v/v DMSO, 20% v/v

methanol)使用。利用上面制備的甲醇溶液以1：9的比例稀釋AP標(biāo)準(zhǔn)(#2)來配制設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液(1% v/v DMSO, 10% v/v methanol)。

1）在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的過程中先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)(#2)。這樣可以減少AP對(duì)試管壁的吸附。

2）推薦使用一次性玻璃試管來稀釋標(biāo)準(zhǔn)，可以減少吸附和污染。

3）如果不經(jīng)過10倍稀釋儲(chǔ)存液的步驟直接稀釋到設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，那么標(biāo)準(zhǔn)的真實(shí)濃度將要比計(jì)劃的濃度要大，所測(cè)定的吸光度的值要小0.2-0.5。確保要先稀釋10倍。

4） 在測(cè)定前制備AP標(biāo)準(zhǔn)溶液，一旦標(biāo)準(zhǔn)溶液從濃縮的狀態(tài)稀釋后就不再穩(wěn)定了，不易保存很長時(shí)間。每個(gè)檢測(cè)過程都要配制新的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5） 用移液器吸頭混勻，不要渦旋震蕩器用劇烈震蕩來減少樣品中AP對(duì)試管壁表面的吸附。

6） 在使用完之后要確保標(biāo)準(zhǔn)濃縮液的蓋擰緊并放在冰箱，標(biāo)準(zhǔn)溶液必須被密封或把蓋擰緊以免甲醇揮

發(fā)。

7）保證標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度為10%。過高的甲醇濃度可以損害抗體，太低的濃度導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)不正確。

8）不要隨意處理試驗(yàn)廢液，要按當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)來處理。

3. 抗原-酶結(jié)合物

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 7ml緩沖液(#4, 白蓋)。

1.配制好的溶液要儲(chǔ)存在2-8°C，可以穩(wěn)定地保存2周。

2.  7mL足夠50個(gè)孔使用。

3.         用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

4.在使用的時(shí)候配制。

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒有包被抗體的微孔板中(#8)加入100ul酶結(jié)合物溶液，然后再加入100ul在第二步中配制的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液或100μL樣品（制備的1% (v/v) DMSO 和10 % (v/v) 的甲醇溶液）。用移液器吸頭混勻。

1.首先加入結(jié)合物溶液然后加入標(biāo)準(zhǔn)或樣品避免孔的內(nèi)表面的非特異性吸附。

2.用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

3.用1% DMSO 和10%的甲醇溶液做一個(gè)空白。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，輕輕是震蕩微孔板使其內(nèi)部的液體混勻，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

1.包被抗體的酶標(biāo)板共有12條，每條有8個(gè)孔，在檢測(cè)前取出所需的孔。然后把不用的再重新放好。

2.在轉(zhuǎn)移液體時(shí)要確保不產(chǎn)生氣泡，因此操作要輕。

3.用膠帶覆蓋微孔板避免污染和液體揮發(fā)。

4.在反應(yīng)期間不要移動(dòng)和振動(dòng)微孔

5.溫度控制在18-30°C

6.嚴(yán)格反應(yīng)時(shí)間

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）(#5)：20ml 洗液(#5) + 100ml蒸餾水 。每次檢測(cè)配制所需體積的溶液，每個(gè)孔每次要求1.2mL的洗液，整個(gè)板需要120 mL。洗液要保存在2-8°C，在配制后大約可以穩(wěn)定保持一個(gè)月的時(shí)間。

7. 沒有結(jié)合的試劑

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并多重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的拍板除去微孔中的液體。

1.要確保除去任何遺留液體，否則可能引起測(cè)量錯(cuò)誤。

2.確保微孔板底部干凈，不要有手印或其它污垢，否則吸光度將有很大改變。

3.不要傾倒任何沒有處理的廢液，例如：浸泡的布或紙要燃燒掉。

8. 顯色反應(yīng)

在每個(gè)微孔中加入100ul顯色液(#6, brown vessel)。在室溫下孵育30min。然后每個(gè)微孔加入100ul終止液(#7,黑蓋)終止反應(yīng)。

1.孵育溫度控制在18-30°C

2.要使每個(gè)孔的反應(yīng)時(shí)間一致，尤其在測(cè)試多個(gè)樣品的時(shí)候

3.加入終止液后孔中的藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色

9. 定量【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

在450nm用酶標(biāo)儀測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品的吸光度值。

1.在終止反應(yīng)15分鐘內(nèi)測(cè)定吸光度值。

2.每次檢測(cè)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)至少做兩個(gè)重復(fù)。

3.確保微孔底面沒有手印和污物，否則測(cè)定的吸光度值有很大的改變。

4.樣品的檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L，樣品中AP的濃度超過500μg/L時(shí)要用10%甲醇+1% DMSO稀釋后再測(cè)定。對(duì)于完全不知情的樣品做前處理時(shí)要做遠(yuǎn)不止一倍的稀釋。

計(jì)算樣品中AP濃度的方法

（1）電腦計(jì)算

利用酶標(biāo)儀分析軟件，用Log-Log (or Log-Linear)曲線。

（2）利用附帶的曲線圖計(jì)算

4551063       artus Borrelia LC PCR Kit (24) CE          CNY                           

130717  NeXtal Tubes ComPAS Suite           CNY                           

130715  NeXtal Tubes ProComplex Suite             CNY                           

4506263       artus HBV RG PCR Kit (24) CE        CNY                           

120015  QIAprep Turbo Buffer Module 8000 "6 x 250 ml each: Buffers P1, P2, N3; 12 x 100 ml Buffer PE (concentrate); 3 x 250 ml Buffer EB; 6 x 1.65 ml RNase A (25 mg/ml solution); handbook

Buffers to run QIAprep Turbo 96 on a BioRobot 8000 (24 x 96-well plates)"  CNY                           

79654    QIAshredder (50) 50 disposable cell-lysate homogenizers for use in nucleic acid minipreps, caps   CNY                           

76526    RNAprotect Cell Reagent (250 ml)          CNY                           

74192    Rneasy Plus 96 Kit (12)            CNY                           

27405    QuickLyse Miniprep Kit (100)           CNY                           

27173    QIAprep 96 Turbo Core Kit (24)             CNY                           

20902    QIAEX II Suspension   1.5 ml suspension       CNY                           

133269  NeXtalStock Phosphate-citr. pH 4.2 (200)             CNY                           

990522  Filter-Tips, 200 µl (960)            CNY                            【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

990396  QIAcube Modified Protocol              CNY                           

4501263       artus EBV RG PCR Kit (24) CE        CNY                           

4501205       artus EBV RG PCR Kit (96) RUO            CNY                           

4500265       artus HSV-1/2 RG PCR Kit (96) CE        CNY                           

949008  Autopure Precipitation Soln (3800 ml)           CNY                           

335001  EpiTect Methyl qPCR Assay (200)          CNY                           

990332  Filter-Tips, 200 µl (1024)          CNY                           

939011  Buffer ATL ( 4 x 50 ml)              CNY                           

9010929       Motor, Y, with gearbox encoder              CNY                           

9010855       ZLV BGR DT-Abstreifer 4-fach Plato 7...D            CNY                           

133246  NeXtalStock Sodium phosphate pH9.2 (200)        CNY                           

330601  RT² SYBR Green FAST Mastermix (8)           CNY                           

929604  QX Wash Buffer (40 ml)            CNY                           

9010810       Source rack (96 pos) for tubes 16mm x 1             CNY                           

9010636       Microplate station, tall Station for accommodating a 96-well plate (or other labware with the same base dimensions) on the worktable   CNY                           

69581    DNeasy 96 Blood & Tissue Kit (4)    For 4 x 96 DNA minipreps: 4 DNeasy 96 Plates, QIAGEN Proteinase K, Buffers, Square-Well Blocks, AirPore Tape Sheets, Collection Microtubes (1.2 ml), Caps, 96-well Plate Registers       CNY                            【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

63206    DyeEx 2.0 Spin Kit (250)    250 DyeEx Spin Columns, Collection Tubes (2 ml)      CNY                           

207043  QuantiTect Whole Transcriptome Kit (25)            CNY                           

9010253       Gripper, right, landoplasted, MTP 120           CNY                           

979101  PyroMark Q96 HS Plate (100)  For sample analysis of DNA template on MD.       CNY                           

NG0023 GSH-ST測(cè)試盒/谷胱甘肽-S轉(zhuǎn)移酶測(cè)試盒      100管/48樣 比色法                        

NG0024 GSH-PX測(cè)試盒/谷胱甘肽過氧化物酶測(cè)試盒   50管/24樣    比色法                        

NG0025 谷胱甘肽還原酶測(cè)試盒/GR測(cè)試盒    50管/48樣    比色法                        

NG0026 GSH測(cè)試盒/還原型谷胱甘肽測(cè)試盒  100管/96樣 分光光度法                         【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

NG0027 總谷胱甘肽-氧化型谷胱甘肽測(cè)試盒/T-GSH/GSSG測(cè)試盒   48T 微量酶標(biāo)法                        

NG0028 總巰基測(cè)試盒/-SH測(cè)試盒   100管/48樣 分光光度法，測(cè)總的巰基和2種蛋白分型                           

NG0029 分型巰基測(cè)試盒/-SH測(cè)試盒       100管/24樣 分光光度法，分蛋白結(jié)合型和非蛋白結(jié)合型；可以測(cè)2種蛋白分型                      

NG0030 單胺氧化酶測(cè)試盒/MAO測(cè)試盒 50管/48樣    紫外比色法                        

NG0031 一氧化氮測(cè)試盒硝酸還原酶法/NO測(cè)試盒硝酸還原酶法       25管/24樣    比色法                        

NG0032 一氧化氮測(cè)試盒化學(xué)法測(cè)NO2/NO測(cè)試盒化學(xué)法測(cè)NO2      100管/96樣 比色法                        

NG0033 一氧化氮合成酶測(cè)試盒測(cè)T-NOS、iNOS、cNOS三型同時(shí)出結(jié)果/NOS測(cè)試盒測(cè)T-NOS、iNOS、cNOS三型同時(shí)出結(jié)果    50管/24樣    比色法                        

NG0034 一氧化氮合成酶測(cè)試盒CAS:測(cè)總NOST-NOS/NOS測(cè)試盒CAS:測(cè)總NOST-NOS   25管/24樣    比色法                        

NG0035 乳酸測(cè)試盒測(cè)全血/LD測(cè)試盒測(cè)全血 50管/48樣    可見光比色法                           

NG0036 乳酸測(cè)試盒測(cè)血清、組織等/LD測(cè)試盒測(cè)血清、組織等 50管/48樣    比色法                        

NG0037 乳酸脫氫酶測(cè)試盒/LDH測(cè)試盒  50管/24樣    比色法                        

NG0038 ATP酶測(cè)試盒測(cè)組織及細(xì)胞膜的可測(cè)Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶，樣本處理前需高速離心 50管/48樣    比色法                           

NG0039 ATP酶測(cè)試盒測(cè)組織及細(xì)胞膜的可測(cè)Na+K+、Ca2+Mg2+-ATP酶，樣本處理前不需高速離心    50管/48樣    比色法                           

NG0040 銅-ATP酶測(cè)試盒/Cu-ATPase測(cè)試盒      100管/48樣 比色法                        

NG0041 氫-鉀ATP酶測(cè)試盒/H＋、K＋-ATPase酶測(cè)試盒  100管/48樣 比色法                        

NG0042 超微量ATP酶測(cè)試盒測(cè)總ATPase   50管/25樣    比色法                         【己烯雌酚檢測(cè)試劑盒】

NG0043 超微量ATP酶測(cè)試盒測(cè)Na＋K＋-ATP酶       50管/25樣    比色法                        

NG0044 超微量ATP酶測(cè)試盒測(cè)Ca2+Mg2+-ATP酶    50管/25樣    比色法                        

NG0045 超微量ATP酶測(cè)試盒測(cè)Ca2+-ATP酶     50管/25樣    比色法                        

NG0046 超微量ATP酶測(cè)試盒測(cè)Na＋K＋、Ca2++Mg2+-ATP酶      75管/25樣    比色法                        

NG0047 超微量ATP酶測(cè)試盒測(cè)Na＋K＋、Ca2++Mg2+、T-ATP酶       100管/25樣 比色法                        

NG0048 蘋果酸脫氫酶測(cè)試盒測(cè)血清       50管      紫外比色法                        

NG0049 蘋果酸脫氫酶測(cè)試盒測(cè)組織       50管      紫外比色法                        

NG0050 琥珀酸脫氫酶測(cè)試盒/SDH測(cè)試盒     50管/48樣    比色法                        

NG0051 肌酸激酶測(cè)試盒/CK測(cè)試盒 50管/24樣    比色法                        

NG0052 膽堿酯酶測(cè)試盒/CHE測(cè)試盒     50管/48樣    比色法                        

NG0053 乙酰膽堿酯酶測(cè)試盒/T-CHE測(cè)試盒  50管/24樣    比色法                        

NG0054 丁酰膽堿酯酶測(cè)試盒/B-CHE測(cè)試盒  50管/24樣    比色法                        

NG0055 葡萄糖-6-磷酸脫氫酶測(cè)試盒/G-6-PD測(cè)試盒   50管/24樣    比色法