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（請(qǐng)以英文為準(zhǔn)，中文僅供參考）

試劑盒特點(diǎn)【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

1.AP單克隆抗體特異地與AP結(jié)合，和其它結(jié)構(gòu)相類(lèi)似的化學(xué)物質(zhì)不發(fā)生交叉反應(yīng)。單克隆抗體質(zhì)量穩(wěn)定每批次見(jiàn)幾乎沒(méi)有變化。

2.檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L (ppb) 。通過(guò)固相萃取濃縮可以檢測(cè)更低的濃度。

3.這個(gè)試劑盒有很高的重復(fù)性，變異系數(shù)在10%之內(nèi)。

4.操作簡(jiǎn)單，整個(gè)過(guò)程僅花費(fèi)2.5小時(shí)

5.試劑盒的形式是96孔微孔板，可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)樣品，花費(fèi)合理。

檢測(cè)原理 （競(jìng)爭(zhēng)ELISA）

1. 競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)

這個(gè)檢測(cè)方法依靠單克隆抗體來(lái)識(shí)別AP。樣品中的AP和一個(gè)AP-酶結(jié)合物預(yù)先混合然后加入到每個(gè)微孔中競(jìng)爭(zhēng)包被在微孔表面的特異性抗體。樣品中AP的濃度如果高于AP-酶結(jié)合物，AP將主要與抗體結(jié)合。反之樣品中AP的濃度如果低于于AP-酶結(jié)合物，AP-酶結(jié)合物將主要與抗體結(jié)合。

2. 顯色反應(yīng)

通過(guò)洗滌步驟去除沒(méi)有反應(yīng)的AP和過(guò)多的AP-酶結(jié)合物。通過(guò)加入底物來(lái)檢測(cè)AP。和微孔板中抗體結(jié)合的AP-酶結(jié)合物催化底物發(fā)生反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì)。通過(guò)一個(gè)孵育期用稀酸終止反應(yīng)。樣品中AP的濃度越高導(dǎo)致結(jié)合到微孔板抗體上的AP-酶結(jié)合物越少，從而產(chǎn)生的顏色越淡，吸光度越低。

3. 定量分析

利用已知濃度的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度和在450nm條件下獲得的吸光度值做出一條劑量反應(yīng)曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線）。把樣品的吸光度值用內(nèi)插法插入到標(biāo)準(zhǔn)曲線中可以精確的計(jì)算出樣品中AP的濃度。

AP 檢測(cè)流程【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

1.樣品處理

在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。過(guò)濾樣品，加入甲醇和DMSO使甲醇的*終濃度為10% (v/v),DMSO的*終濃度為1%(v/v)。對(duì)于一些樣品進(jìn)行固相萃取是必要的。

2. 標(biāo)準(zhǔn)溶液

利用甲醇溶液（甲醇：水 0.8：8.2）把AP標(biāo)準(zhǔn)濃縮液稀釋10倍。然后對(duì)此溶液進(jìn)一步稀釋成設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)的濃度（5μg/L- 500μg/L）。在配制的時(shí)候先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)。

3. 抗原-酶結(jié)合物溶液

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 緩沖液(#4, 白蓋).

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒(méi)有包被的微孔板中(#8)混合100μL AP標(biāo)準(zhǔn)（或樣品）和100μL酶結(jié)合物溶液。先加結(jié)合物后加標(biāo)準(zhǔn)或樣品。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）：1ml 洗液(#5) + 5ml蒸餾水

7. 沒(méi)有結(jié)合的物質(zhì)

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的排板出去微孔中的液體。

8. 顯色

每個(gè)微孔加入100μL顯色試劑(#6, 棕色瓶)，在室溫(18-25°C)孵育30分鐘。然后加入每孔再100μL的終止液(#7, 黑蓋)終止反應(yīng)。

10. 定量

在450nm測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。利用內(nèi)插法把樣品的吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中AP的含量。

所需材料【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

必需 – 樣品濃縮時(shí)不需要

1.一次性玻璃試管(e.g. IWAKI, item No. 9831-1207)確保要使用一次性試管避免AP的吸附作用

2.玻璃纖維濾器(e.g. ADVANTEC Co., item No. 36481047 Φ47mm)和過(guò)濾設(shè)備

3.微量加液器(20μL - 200μL 和100μL - 1000μL, e.g. Gilson Pipetman P-200, P-1000)和吸頭

(e.g. ICN Superpack 96NS)

4.排槍(50μL - 300μL)

5.酶標(biāo)儀（450nm波長(zhǎng)）(e.g. TECAN Sunrise Remote)

6.計(jì)時(shí)器

7.Strip ejector (e.g. COSTAR, No.2578)

8.甲醇Methanol (HPLC grade)

9.DMSO(HPLC grade)

2）必需- 通過(guò)SPE 濃縮時(shí)需要

n         以上的材料都需要,再加上下面的材料

n         固體萃取柱(e.g. NEXUS SPE Cartridge Producer: VARIAN PART#:1210-3102 ABS ELUT- NEXUS, 200MG 6ML,30/PK)

n         丙酮(HPLC grade)

n         二氯甲烷(analytical reagent)

3、重要性

如果在試驗(yàn)過(guò)程中使用一些沒(méi)有使用過(guò)的廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品試劑時(shí)需要做比較試驗(yàn)。

檢測(cè)步驟【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

重要性

1.僅用于研究、不用于個(gè)人

2.在操作前半小時(shí)從冰箱中拿出試劑盒使其恢復(fù)到室溫（18-25°C）。

3.不同試劑盒的中的試劑不要混用

4.儲(chǔ)存在2-8 °C

5.不使用過(guò)期產(chǎn)品

6.使用完試劑盒后根據(jù)當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)處理廢液。

7.為了增加準(zhǔn)確性推薦在檢測(cè)中做兩個(gè)重復(fù)。

注意

在試驗(yàn)中要穿保護(hù)性衣服，戴手套和眼鏡保證和試劑盒中的液體接觸。

1．樣品前處理

利用特定的玻璃纖維濾紙(1μm 孔徑)過(guò)濾水樣，加入DMSO和甲醇使DMSO終濃度為1% (v/v)、甲醇終濃度

為10% (v/v)。如果濾液要求濃縮和清洗需要固相萃取。

例子

1）將上面制備濾液過(guò)NEXUS cartridge柱（已經(jīng)用二氯甲烷(ex. 10ml)、甲醇(ex. 5ml)、蒸餾水(ex. 5ml)提前處理好的），流速10mL/min

2）用蒸餾水(ex. 5ml)和50%蒸餾水/甲醇(ex. 5ml)洗柱。真空干燥柱不超過(guò)45分鐘。

3）用二氯甲烷(ex. 6ml)洗脫分析物、然后用氮?dú)猓ㄔ?0攝氏度或更低的溫度）吹干。

4）加入甲醇和DMSO溶液溶解殘留物，調(diào)節(jié)溶液的終濃度到1%DMSO和10%甲醇溶液。

2.  標(biāo)準(zhǔn)溶液

制備甲醇溶液（甲醇：蒸餾水=0.8 ml/8.2ml）以備稀釋標(biāo)準(zhǔn)(#2, 10% v/v DMSO, 20% v/v

methanol)使用。利用上面制備的甲醇溶液以1：9的比例稀釋AP標(biāo)準(zhǔn)(#2)來(lái)配制設(shè)定的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液(1% v/v DMSO, 10% v/v methanol)。

1）在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液的過(guò)程中先加甲醇溶液后加標(biāo)準(zhǔn)(#2)。這樣可以減少AP對(duì)試管壁的吸附。

2）推薦使用一次性玻璃試管來(lái)稀釋標(biāo)準(zhǔn)，可以減少吸附和污染。

3）如果不經(jīng)過(guò)10倍稀釋儲(chǔ)存液的步驟直接稀釋到設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，那么標(biāo)準(zhǔn)的真實(shí)濃度將要比計(jì)劃的濃度要大，所測(cè)定的吸光度的值要小0.2-0.5。確保要先稀釋10倍。

4） 在測(cè)定前制備AP標(biāo)準(zhǔn)溶液，一旦標(biāo)準(zhǔn)溶液從濃縮的狀態(tài)稀釋后就不再穩(wěn)定了，不易保存很長(zhǎng)時(shí)間。每個(gè)檢測(cè)過(guò)程都要配制新的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

5） 用移液器吸頭混勻，不要渦旋震蕩器用劇烈震蕩來(lái)減少樣品中AP對(duì)試管壁表面的吸附。

6） 在使用完之后要確保標(biāo)準(zhǔn)濃縮液的蓋擰緊并放在冰箱，標(biāo)準(zhǔn)溶液必須被密封或把蓋擰緊以免甲醇揮

發(fā)。

7）保證標(biāo)準(zhǔn)溶液中甲醇的濃度為10%。過(guò)高的甲醇濃度可以損害抗體，太低的濃度導(dǎo)致結(jié)果讀數(shù)不正確。

8）不要隨意處理試驗(yàn)廢液，要按當(dāng)?shù)氐姆ㄒ?guī)來(lái)處理。

3. 抗原-酶結(jié)合物

重新配制一瓶抗原-酶結(jié)合物溶液：抗原-酶結(jié)合物粉末(#3) + 7ml緩沖液(#4, 白蓋)。

1.配制好的溶液要儲(chǔ)存在2-8°C，可以穩(wěn)定地保存2周。

2.  7mL足夠50個(gè)孔使用。

3.         用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

4.在使用的時(shí)候配制。

4. 標(biāo)準(zhǔn)/樣品 與結(jié)合物混合

在沒(méi)有包被抗體的微孔板中(#8)加入100ul酶結(jié)合物溶液，然后再加入100ul在第二步中配制的AP標(biāo)準(zhǔn)溶液或100μL樣品（制備的1% (v/v) DMSO 和10 % (v/v) 的甲醇溶液）。用移液器吸頭混勻。

1.首先加入結(jié)合物溶液然后加入標(biāo)準(zhǔn)或樣品避免孔的內(nèi)表面的非特異性吸附。

2.用移液器吸頭混勻，轉(zhuǎn)移液體時(shí)不要產(chǎn)生氣泡。

3.用1% DMSO 和10%的甲醇溶液做一個(gè)空白。

5. 競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

在包被抗體的微孔板(#1)的每個(gè)孔中加入100μL在第四步中混合的溶液，輕輕是震蕩微孔板使其內(nèi)部的液體混勻，在室溫(18-25°C)孵育60分鐘。

1.包被抗體的酶標(biāo)板共有12條，每條有8個(gè)孔，在檢測(cè)前取出所需的孔。然后把不用的再重新放好。

2.在轉(zhuǎn)移液體時(shí)要確保不產(chǎn)生氣泡，因此操作要輕。

3.用膠帶覆蓋微孔板避免污染和液體揮發(fā)。

4.在反應(yīng)期間不要移動(dòng)和振動(dòng)微孔

5.溫度控制在18-30°C

6.嚴(yán)格反應(yīng)時(shí)間

6. 洗液

用蒸餾水以1：5的比例稀釋洗液（6倍濃縮）(#5)：20ml 洗液(#5) + 100ml蒸餾水 。每次檢測(cè)配制所需體積的溶液，每個(gè)孔每次要求1.2mL的洗液，整個(gè)板需要120 mL。洗液要保存在2-8°C，在配制后大約可以穩(wěn)定保持一個(gè)月的時(shí)間。

7. 沒(méi)有結(jié)合的試劑

每個(gè)微孔用300μL的洗液沖洗，并多重復(fù)兩次。在吸水紙上用力的拍板除去微孔中的液體。

1.要確保除去任何遺留液體，否則可能引起測(cè)量錯(cuò)誤。

2.確保微孔板底部干凈，不要有手印或其它污垢，否則吸光度將有很大改變。

3.不要傾倒任何沒(méi)有處理的廢液，例如：浸泡的布或紙要燃燒掉。

8. 顯色反應(yīng)

在每個(gè)微孔中加入100ul顯色液(#6, brown vessel)。在室溫下孵育30min。然后每個(gè)微孔加入100ul終止液(#7,黑蓋)終止反應(yīng)。

1.孵育溫度控制在18-30°C

2.要使每個(gè)孔的反應(yīng)時(shí)間一致，尤其在測(cè)試多個(gè)樣品的時(shí)候

3.加入終止液后孔中的藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色

9. 定量【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

在450nm用酶標(biāo)儀測(cè)定每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品的吸光度值。

1.在終止反應(yīng)15分鐘內(nèi)測(cè)定吸光度值。

2.每次檢測(cè)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)至少做兩個(gè)重復(fù)。

3.確保微孔底面沒(méi)有手印和污物，否則測(cè)定的吸光度值有很大的改變。

4.樣品的檢測(cè)范圍5μg/L - 500μg/L，樣品中AP的濃度超過(guò)500μg/L時(shí)要用10%甲醇+1% DMSO稀釋后再測(cè)定。對(duì)于完全不知情的樣品做前處理時(shí)要做遠(yuǎn)不止一倍的稀釋。

計(jì)算樣品中AP濃度的方法

（1）電腦計(jì)算

利用酶標(biāo)儀分析軟件，用Log-Log (or Log-Linear)曲線。

（2）利用附帶的曲線圖計(jì)算

9240965       X-Ring, pipetting system, Qsym              CNY                           

9240683       Spring, Elevator Pickup Head, AP196/98              CNY                           

9240814       #Agreement, EZ1 DSP, PM, 1YR            CNY                           

9240788       Update, Pump Pulley/Motor, AP98          CNY                           

6000-5008    RCS Reagent Troughs             CNY                           

6000-5004    Sealing Film Dispenser             CNY                           

9241768       QIAxtractor, Basic Agreement   The Basic Cover Agreement, QIAxtractor provides full service coverage for the QIAxtractor ａnd the CAS 1280. Costs for service visits are fully covered including travel, labor, ａnd parts. One on-site pipetting head service ａnd inspection is included. With a Basic Cover Agreement, there is a response time of 5 working days.      CNY                           

9241656       Transfer Rack Plate, AP           CNY                           

9241630       Shaker Adjustment Kit, AP        CNY                           

9241367       Damper, door, EZ1a          CNY                           

9240759       Update, Sliding Door Latch, AP98          CNY                           

9243548       Pyro Q96 ID, PM Service   "Service response time (repair): not applicable

Periodic inspection/maintenance: yes

Inspection/maintenance delivery: onsite

Cost coverage for Repair Parts : not included

Cost coverage for labor: yes, full coverage

Cost coverage for travel: yes, full coverage

Replacement system (Loaner) provision: not applicable

Transportation cost coverage: yes, full coverage"       CNY                           

9242766       Cogwheel, x-drive, portal, Qsym             CNY                            【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

9242710       Validation Support, 2d, QIAgility      The QIAGEN QIAgility Guided Validation Support service includes all travel ａnd labor charges for a site visit up to 2 days by a QIAGEN Specialist.  A QIAGEN specialist will provide an introduction to the QIAgility system ａnd software, review the User Manual, ａnd practical hands-on operation. The Guided Validation service includes experimental design consultation, internal validation documentation support, ａnd QIAGEN sponsored data templates.  Enough consumable chemistry ａnd accessories (QIAGEN or other vendors) should be purchased to cover the validation experimental design ａnd are not included in the cost of validation support. Please indicate which processes (quant setup, normalization, PCR setup, CE setup) ａnd kit manufacturer (Applied Biosystems, Promega, QIAGEN) need to be included in the validation.  CNY                           

9242253       Cable, x, portal AS, Qsym         CNY                           

9242234       RGQ, IQ/OQ Service  "Instrument qualification support service for the Rotorgene Q ａnd Rotorgene 6000. The product contains the IQ/OQ documentation ａnd the performance of the qualification protocols (travel ａnd labor costs included).

During the service, the compliance with the manufacturer＇s installation requirements is testified ａnd the performance verification & dynamic calibration of the Rotorgene Q is performed."      CNY                           

9242172       Repair fee, Depot Repair, TissueLyser II              CNY                           

5000-1403    Bumpers Side, VTX2          CNY                           

5000-1401    Guide Rack Back Asmbly, VTX2             CNY                           

5000-1311    Capacitor 8UF, SKR1        CNY                           

5000-1273    Door Damper Assembly, DML2        CNY                           

5000-1258    Y Optical Sensor CMPLT, DML2             CNY                           

5050-1074 V.1     CD Rom Manual - LumiCheck Plate        CNY                           

5050-1069 V.1     CD Rom Manual - Rotary Shaker I, 240V             CNY                           

6000-5001    Costar Plate Lids        CNY                           

6000-3120    Plate Washer I - WasteReserv.CapAssembly              CNY                           

5000-1420    Driveplate Asmly 099A, VTX2          CNY                           

5127-1220    hc2 Sample Conversion Kit              CNY                           

9243701       careHPV, Training             CNY                            【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

EA11423       EASYartus BKV RG_I        CNY                           

800190  Sequencing in a Box Service           CNY                           

800110  Single Read, w/ prep  "Bacterial clone cultivation ａnd template purification or PCR product purification, including DNA quality control

Repetition of sequencing, if necessary

Data collected to maximal read length"   CNY                           

132538  NeXtal Stock Dioxane (50) 100% v/v Dioxane - 50mL (5 x 10 ml tube)    CNY                           

QY-x1855     Bac-to-Bac桿狀病毒載體表達(dá)系統(tǒng)   SF9                            

QY-x1856     人腦膠質(zhì)瘤    SHG-44                             

QY-x1857     神經(jīng)母細(xì)胞瘤       SH-SY5Y                                  

QY-x1858     人卵巢癌       SKOV3                               【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

QY-x1859            SP-210                             

QY-x1860     人腦膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞       SW038-C2                               

QY-x1861     T淋巴細(xì)胞    T cell                                 

QY-x1862     人正常卵巢細(xì)胞    TC-1                                 

QY-x1863     人卵巢癌       TOV-21G                                 

QY-x1864     人膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞       U251                                 

QY-x1865     大鼠的腎小球系膜細(xì)胞EC  HBZY-1                             

QY-x1866     大鼠肝癌細(xì)胞       Walker 256                              

QY-x1867     人前列腺癌細(xì)胞    DU145                              

QY-x1868     NIH3T3 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 293                                      

QY-x1869     人胚腎細(xì)胞                                          

QY-x1870     L929 小鼠成纖維細(xì)胞 293T 人胚腎T細(xì)胞                                    

QY-x1871     HSC-T6 大鼠肝星狀細(xì)胞 GES-1 人胃粘膜細(xì)胞                                     

QY-x1872     L-02 人肝細(xì)胞                                      

QY-x1873     Lewis 肺癌 瘤株 EAC 艾氏腹水瘤 瘤株                                        

QY-x1874     LA795 肺腺癌 瘤株 S180 腹水瘤 瘤株                                          【頭孢哌酮檢測(cè)試劑盒】

QY-x1875     H22 肝癌 瘤株 B16 黑色素瘤 體外培養(yǎng)株                                     

QY-x1876     MPC-83 胰腺腺泡細(xì)胞癌 體外培養(yǎng)株 B16 黑色素瘤 瘤株                                         

QY-x1877     MPC-83 胰腺腺泡細(xì)胞癌                                     

QY-x1878     瘤株 C3 白血病 體外培養(yǎng)株                                    

QY-x1879     RIN-m5F β胰島素瘤                                    

QY-x1880     體外培養(yǎng)株 L1210 淋巴白血病 體外培養(yǎng)株                                         

QY-x1881     MA891 乳腺癌 瘤株 L1210 淋巴白血病 瘤株                                       

QY-x1882     TA2 自發(fā)高乳腺癌 瘤株 SP2/0 骨髓瘤 體外培養(yǎng)株                                     

QY-x1883     U14 宮頸癌 瘤株 YAC-1 淋巴瘤 體外培養(yǎng)株                                        

QY-x1884     G422 神經(jīng)膠質(zhì)瘤 瘤株 TC-1 HPVl6 E6、E7和ras基因共轉(zhuǎn)化的C57BL／C(H-2b)小鼠肺上皮細(xì)胞 體外培養(yǎng)株                                        

QY-x1885     PC-12 嗜鉻細(xì)胞瘤 體外培養(yǎng)株                                         

QY-x1886     SRA01/04 人晶體上皮細(xì)胞系 MCF-7 乳腺腺癌                                    

QY-x1887     CNE-1 高分化鼻咽癌