高回收率(75%-105%)，多種樣品的低成本提取方法；高重復(fù)性；檢測過程只需要不到1.5小時(shí)；五合一處理方法更省時(shí)、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保。

產(chǎn)品概述

賽庚啶檢測試劑盒酶聯(lián)免疫反應(yīng)測試盒基于競爭性酶聯(lián)反應(yīng)原理，含有賽庚啶檢測試劑盒(SEM)的抗體已經(jīng)包被于微孔板上。藥物分析時(shí)，樣品同SEM-HRP共同被添加到板孔中。如果樣品中含有SEM，會(huì)競爭SEM抗體，抑制SEM-HRP與板上包被的抗體結(jié)合。加入底物后，產(chǎn)物的顏色強(qiáng)弱與樣品中SEM的濃度成反比。

 試劑盒組成

已包被的酶標(biāo)板（可拆式）                                            12×8 孔

標(biāo)準(zhǔn)液（0，0.025，0.1，0.4，1.6，6.4ppb）                              6×2.0mL

回收用10ppb(Spiking)——可選                                        1×0.8ml

HRP酶標(biāo)抗原(HRP-Conjugated)                                         1×6mL

10×樣品提取液(Sample Extraction Buffer)                             1×25mL

20×濃縮洗液(Wash Solution)                                          1×30mL

終止液(Stop Buffer)                                                  1×20mL

TMB底物(TMB Substrate)                                               1×10mL

50mM 2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)                               1×1.8mL

本試劑盒應(yīng)當(dāng)在2-8℃的溫度下儲(chǔ)存，有效期為一年。如果超過3個(gè)月不使用試劑盒，

請(qǐng)將SEM-HRP酶標(biāo)抗原放置-20℃或者冰凍保存。

檢測試劑盒以外需要提供的設(shè)備或材料

1)      酶標(biāo)儀(450 nm)

2)      恒溫培養(yǎng)箱

3)      勻漿器

4)      蒸干器

5)      漩渦振蕩器

6)      移液槍(50，100mL，1mL各一支)

7)      多道移液器（50-300mL）

8)      乙酸乙酯

9)      0.1M K₂HPO₄

10) 正己烷

注意事項(xiàng)

實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)閱讀以下文字，以保證獲得*佳實(shí)驗(yàn)效果。

1)      標(biāo)準(zhǔn)品中含有賽庚啶檢測試劑盒，請(qǐng)小心使用。

2)      不要使用過期的試劑盒。

3)      不同批次的試劑盒不要混用，抗體和微孔板具有盒與批次的特異性。

4)      盡量保持室溫20-25℃，避免在通風(fēng)口操作防止溫度過低，過熱和/或者蒸發(fā)。同樣的，不要在陽光直射下實(shí)驗(yàn)，防止過熱及蒸發(fā)。在孵育期間，如果工作臺(tái)溫度過低，應(yīng)該鋪墊若干紙巾或者其他物料。

5)      水質(zhì)量很重要，確保使用蒸餾或者去離子水。

6)      加入樣品或者試劑到空的微孔板時(shí)，吸嘴靠于微孔接近底部，并保持接觸。

7)      孵育時(shí)間的計(jì)算越規(guī)范越好，保持添加標(biāo)準(zhǔn)品的一致性，先添加標(biāo)準(zhǔn)品后添加樣品。

8)      從低濃度到高濃度地添加標(biāo)準(zhǔn)品，降低影響標(biāo)準(zhǔn)品曲線質(zhì)量的風(fēng)險(xiǎn)。

9)      將微孔板置于放有干燥劑的密封袋中，冷藏保存。

樣品的準(zhǔn)備【賽庚啶檢測試劑盒】

確保樣品的正確保存，一般來說，樣品在2-4只能保存1-2天，如果要保存更長時(shí)間，就要保存在-20冷凍保存，在用之前需要將冷凍的樣品在室溫下或冰箱內(nèi)解凍。

1×樣品提取液

按1：9的比例配制樣品提取濃縮液和雙蒸餾水。

1）飼料（用于檢測添加到飼料中的魚粉、蝦粉或動(dòng)物組織的SEM）

（1）    取0.5g勻質(zhì)樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20 µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋振蕩1min；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時(shí)，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速渦旋震蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL乙酸乙酯上清液（含0.25g初始樣品）到另一試管（避免觸及下層水相！如果

移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機(jī)相），在60-70 °C減壓蒸餾或60-70°C氮?dú)獯蹈桑?/span>

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，轉(zhuǎn)速渦旋振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進(jìn)行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：4.0

2）魚/蝦/肉（牛肉/雞肉/豬肉）：可用于五合一前處理方法

（1）    稱取1g勻漿樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCl和20µL50 mM 2-硝基苯甲醛，渦旋震蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3h，培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下（20-25℃）4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品)到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機(jī)相），如果出現(xiàn)乳化現(xiàn)象，上清液不足3mL，請(qǐng)85℃水浴3分鐘。在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮?dú)獯蹈桑?/span>

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；（注：肝臟組織富含脂肪、色素等，為防止乳化現(xiàn)象，建議選用4mL正己烷溶解，渦旋震蕩30秒后，再進(jìn)行下一步操作）

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩1分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進(jìn)行樣品測試。

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

稀釋倍數(shù)：2.0

3）雞蛋【賽庚啶檢測試劑盒】

（1）    稱取1g雞蛋樣品加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL蒸餾水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩30秒；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時(shí)，在培養(yǎng)期間，每1h振蕩5秒；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH， 6 mL 乙酸乙酯，渦旋震蕩振蕩30s；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機(jī)相），在60-70℃減壓蒸餾或60-70℃氮?dú)獯蹈桑?/span>

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品抽提工作液體，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100µL下清液，進(jìn)行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

注意：為了避免過高的背景值，建議用空白樣品做平行，從取3ml乙酸乙酯上清旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)開始。

4）蜂蜜

（1）    稱取1g蜂蜜加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時(shí)；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）    室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機(jī)相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮?dú)獯蹈桑?/span>

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進(jìn)行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

5）牛奶

（1）    對(duì)于含脂牛奶，取待測牛奶樣品3ml室溫4000g，5min。除去上層脂肪層。（對(duì)于脫脂奶粉，次步略）

（2）    取1ml樣品，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時(shí)；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH，6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；室溫下4000g離心10分鐘；

（5）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機(jī)相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮?dú)獯蹈桑?/span>

（6）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（8）    室溫下4000g離心10分鐘；

（9）    每孔取100 µL下清液，進(jìn)行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

6）血清【賽庚啶檢測試劑盒】

（1）        稱取1g血清加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和20µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（2）        50°C恒溫培養(yǎng)3小時(shí)；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（3）        加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（4）        室溫下4000g離心10分鐘；

（5）        取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移

取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機(jī)相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮?dú)獯蹈桑?/span>

（6）        用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（7）        加入1mL1×樣品提取液，劇烈

（8）        振蕩2分鐘；

（9）        室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進(jìn)行樣品測試。

     稀釋倍數(shù)：2.0

7）尿樣

（1）    取3ml尿樣，4000g離心5min。

（2）    離心后稱取1ml，加入0.5mL1×樣品提取液，3.5mL雙蒸水，0.5mL 1M HCL和40µL 50 mM 2-硝基苯甲醛，劇烈振蕩1分鐘；

（3）    50°C恒溫培養(yǎng)3小時(shí)；（說明書后的**標(biāo)記方法可供選擇）

（4）    加入5mL 0.1 M K₂HPO₄，0.4 mL 1 M NaOH ， 6 mL 乙酸乙酯，轉(zhuǎn)速振蕩1min；

（5）    室溫下4000g離心10分鐘；

（6）    取3mL上清液(包含了0.5g的原始樣品) 到另一試管（避免觸及下層水相！如果移取液中含有水相，再次4000g離心5分鐘，取上層有機(jī)相），在60 -70°C減壓蒸餾或60-70°C氮?dú)獯蹈桑?/span>

（7）    用1 mL 正己烷(或者正庚烷)溶解干燥好的樣品；

（8）    加入1mL1×樣品提取液，劇烈振蕩2分鐘；

（9）    室溫下4000g離心10分鐘；

（10）    每孔取100 µL下清液，進(jìn)行樣品測試。

稀釋倍數(shù)：2.0

檢測步驟

試劑的準(zhǔn)備

注意：試劑在使用之前要在室溫下解凍1-2小時(shí)，確定在使用前閱讀過注意事項(xiàng)。準(zhǔn)備適量的檢測用試劑，所有的試劑搖勻后使用。準(zhǔn)備足夠所有小管所需的用量，不能將試劑倒回原來的瓶子中，處理試劑時(shí)建議用廢棄的瓶子以降低污染的風(fēng)險(xiǎn)。

1x洗液的制備

1體積的20x洗液同19體積的蒸餾水混合

檢測

\以下為計(jì)算份量的表格，用戶可根據(jù)自己的需要來確定需要配置多少試劑。

（1）    加入100mL的標(biāo)準(zhǔn)品于所設(shè)定的孔中；

（2）    加入100mL的樣品于所設(shè)定的孔中

（3）    在每孔中加入50mL 1×SEM-HRP，輕敲微孔板邊緣混勻1分鐘；

（4）    室溫（22.5±2.5）°C避光孵育30分鐘；

（5）    洗板3次，每次應(yīng)該加入250mL 1×洗液，*后一次使板盡量甩干并在吸水紙上吸干；

（6）    每孔加入100mL的TMB底物；

（7）    在室溫（22.5±2.5）°C避光孵育20分鐘后，每孔加入100mL的終止液終止反應(yīng);

（8）    在450nm或450/650nm下讀OD值 (讀數(shù)前，用吸水紙將板底部的指痕和水分擦去，避免影響讀數(shù))。

10．結(jié)果計(jì)算【賽庚啶檢測試劑盒】

（1）    分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)、質(zhì)控和樣品的平均吸光度值和相對(duì)吸光度值。

相對(duì)吸光度值 (%) = (標(biāo)準(zhǔn)或樣品吸光度值/零標(biāo)準(zhǔn)吸光度值) ´ 100

（2）    以相對(duì)吸光度值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)濃度為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）    從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取質(zhì)控和樣品的濃度值。

（4）    樣品檢測下限計(jì)算方法如下：

樣品檢測下限 = (0.025ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

樣品定量下限 = (0.1ng/g) ´ (稀釋倍數(shù))

例如，肉類樣品的稀釋倍數(shù)是2.0,那么肉類樣品的檢測下限是0.05ppb,定量檢測下限是0.2ppb。

9020600  Crosstalk Test Fixture, DML 3000             CNY                             

9017841  Tool, rotor fixation, calibration, QIAC               CNY                             

9013297  Top plate, vacuum manifold 6 strips , 4            CNY                             

9013267  Fan, cooling, BR3000 0             CNY                             

9020803  Syringe 60ml, CX1             CNY                             

9020732  Cooling adapter, PCR, v2, Qsym                CNY                             

9020707  Lid, polycarbonate, C34            CNY                             

9020699  Tip stripper, red, C48                 CNY                             

9020694  IPC Hard drive PCA6781, PyroQ96ID                 CNY                             

9020633  Pos. aid (1), waste box, Cabinet Qsym              CNY                             

9020392  PCB, connect drawer, chassis AS, Qsym            CNY                             

9020335  PCB - Power, RGQII           CNY                             

9020252  UPG Waste bag holder, Qsym           CNY                              【賽庚啶檢測試劑盒】

9020232  Foot assembly, front, CAS                  CNY                             

9020213  Switch, assembly, lid, Jul05-May07, C34           CNY                             

9020207  Pipetting head, non LLS, 1 ch. , CC2                   CNY                             

9239538  Assy, Power Inlet Mounting, SDS              CNY                             

9239537  Assy, Terminated, Blue LED, SDS               CNY                             

9239534  Assy, Reservoir, SDS          CNY                             

9020177  PM kit, EZ1xl             CNY                             

9020101  Shipping Lock Washer, TLyser 2                 CNY                             

9239503  Check Valve, LC                  CNY                             

9239489  EX RTD Adapter bd. XYP           CNY                             

9239483  EX Syringe Pump LX100             CNY                             

9232835  Tips Disposable Eppendorf 1.1 ml             CNY                             

9232804  Filter, Interference, 550nm              CNY                             

9239363  Inlet-micro-fuse T 3.15A, 250V, EZ1                  CNY                             

9239343  MDx Protocol Installation, on-site, 2day          CNY                             

9239263  BioSprint Software            CNY                              【賽庚啶檢測試劑盒】

9236440  0.5 hr                 CNY                             

9239156  Assembly, gripper, TWI             CNY                             

9239152  Screw, support fixation (to base), TWII             CNY                             

9239006  Z-Rack Packing Cover                CNY                             

QY-x1367 人惡性黑色素瘤細(xì)胞A375                                                

QY-x1368 人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞M619                                                

QY-x1369 人黑色素瘤細(xì)胞 M14                                               

QY-x1370 人葡萄膜黑色素細(xì)胞UM                                                     【賽庚啶檢測試劑盒】

QY-x1371 人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞D407                                                     

QY-x1372 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Rb                                                 

QY-x1373 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞OCM-1                                                  

QY-x1374 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞MuM－2C                                                     

QY-x1375 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞MuM－2B                                                     

QY-x1376 人低侵襲性脈絡(luò)膜黑色素素瘤細(xì)胞OCM-1A                                                    

QY-x1377 人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤Y79                                               

QY-x1378 熒光素酶轉(zhuǎn)染人成骨肉瘤細(xì)胞U2OS-Luc teT-on                                              

QY-x1379 人橫紋肌肉瘤細(xì)胞TE671 subline No.2                                              

QY-x1340 人眼脈絡(luò)黑色素瘤細(xì)胞C918                                                     

QY-x1341 人橫紋癌細(xì)胞A673                                                      

QY-x1342 人惡性胚胎橫紋肌瘤細(xì)胞RD                                                     

QY-x1343 人表皮癌細(xì)胞A-431                                                    

QY-x1344 人正常皮膚細(xì)胞 HaCaT                                                      

QY-x1345 人皮膚纖維微細(xì)胞系Malmc                                                       

QY-x1346 人皮膚成纖維細(xì)胞系BJ                                                        【賽庚啶檢測試劑盒】

QY-x1347 人成纖維肉瘤細(xì)胞HT1080                                               

QY-x1348 人皮膚癌細(xì)胞系HS-1                                                  

QY-x1349 人皮膚癌細(xì)胞系HS-4                                                  

QY-x1350 人胸膜瘤細(xì)胞SMC-1                                                   

QY-x1351 人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系 143TK                                                       

QY-x1352 人舌癌細(xì)胞Tca-8113                                                   

QY-x1353 人舌癌細(xì)胞系Tca8113-P60                                                 

QY-x1354 人舌癌細(xì)胞系Tca8113-P160                                              

QY-x1355 人舌癌細(xì)胞T6                                                      

QY-x1356 人舌鱗癌細(xì)胞系TSCCA                                               

QY-x1357 上頜牙齦癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌GNM                                                     

QY-x1358 人星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251                                                     

QY-x1359 人退行性癌細(xì)胞Calu-6